Способ защиты бактериальных культур от бактериофагов

Способ защиты бактериальных культур от бактериофагов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (63) Дополнительное к авт. свмд-ву (22) Заявлено 100278(21) 2579635/28-13 (51)М. Кл.

С 12 К 1/00 с присоединением заявки ¹

{23) Приоритет

Государственный комитет

СССР по делам изобреl f íèé и открытий (53) УДК l576.8.... . 093.1 (088. 8) Опубликовано 151179, Бюллетень № 42

Дата опубликования описания 151179 (72) Авторы изобретения

В.Н.Поздняков, В.И.Звенигородский, С.В.Беляев, Ю.Д.Виханский и Н.И.Жданова

Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ЗАЩИТЫ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КУЛЬТУР

OT БАКТЕРИОФАГОВ

Изобретение относится к области микробиологической промышленности, а именно к способам защиты бактериальных культур от бактериофагов .

Известен способ з ашиты бакт ериальных культур от бактериофагов путем введения в питательную среду фагоинактивирующего агента (1). однако известный способ не обеспечивает защиту бактериальных культур от действия бактериофагов при использовании питательных сред, содержащих органические ингредиенты

Целью изобретения является повышение эффективности способа.

Цель достигается тем, что по предлагаемому способу в качестве фаголизируюшего агента используют гекса- метилендиизоцианат.

Способ осуществляют следующим образом.

В ферментационную производственную среду, применимую для культивиро- 25 вания штамма-продуцента, вносят гексаметилендиизоцианат (ГМДЦ) в количестве до 0,1% по объему до начала или во время ферментации в случае обнаруеепил фага. Процесс ферментации ведут и. регламенту.

Пример 1. В качестве испй туемой культуры применяют штамм

Bacthur ingiens is, устойчивый к

ГМДЦ. Культуру выращивают в течение 5-7 суток при 28 С в пробирках на скошенной агаризованной среде (Р 1) следующего состава:

Мясной бульон 1,0 л

Пептон 10,0 г

NaCI 5,0г

Агар-агар 20,0 r

Выращенную культуру смывают С косяка О, 85в-ньм физиологическим раствором и вносят в колбы, объемом

750 мл, содержащие по 50 мл дрожжеполисахаридной среды (Р 2) в таком количестве, чтобы конечный титр спор был не менее 1 ° 107 в 1 мл.,следующего состава:

Дрожжи кормовые сухие 30i0 г, Мука кукурузная 15,0 r

Вода водопроводная 1,0 л

В опытные колбы вносят фаг с конечным титром не менее 10> в 1 мл и 0,1% ГМДЦ по объему. В контрольные колбы вносят только фаг или ГМД11.

Засеянные колбы инкубируют на качалке при 200-250 . об/мин прн 28 С до полного рассыпания культуры на споры и кристаллы, которые контролиЛ с

697562

Формула изобретения

Составитель Е. Дубовицкая

Редактор В.Трубченко Техред М, Петко Корректор Н.Горват

Заказ 6876/19 Тираж 526 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 руют при помощи оптического микроскопа. Титр фагов в момент внесения в колбы и в конце ферментации определяют двуслойным методом на агаризованной среде Хоттингера с последующей инкубацией чашек при 28 С в течение 18 ч. Определение биологической активности выросших культур проводят на гусеницах пчелиной огневки семидневного возраста в течение б дней при 28 С. 10

0,1Ъ ГМДЦ не оказывает ингибирующего действия на культуру и инактивирует внеклеточный фаг.

Пример 2. Исходную культуру штамма Brevibacterium sp 22Л выращивают на среде Р 3 в течение 24 ч при 28ОС. Затем петлей переносят в колбы, емкостью 250 мл, содержащие

10-30 мл посевной среды Р 3. Состав среды 9 3 следующий:

Меласса 3,0 г

Кукурузный экстракт 30,0 г

NaCI 4,0 r

Вода водопроводная 1,0 л

Культуру инкубируют на качалке при

240 об/мин в течение 18 ч при 28 С.

Посевной материал в количестве

10 об/Ъ .переносят в колбы вышеуказанной емкости, содержащие 10 мл фер- 30 ментационной среды 9 4;

Меласса 160 г

Кукурузный экстракт 30 г

Аммоний хлористый. 25 г

Калий фосфорнокислый дв узамещенный 10 r

Мел 20 r

Вода 1 л одновременно с посевным матерна= лом вносят препарат фага в консчнс>й концентрации, не менее 1 10> фаг. част/мл и ГМДЦ в концентрации

0,1 об/Ъ Ферментацию проводят на качалке при 28 С в течение 72 ч. о

Количество образовавшегося лизина определяют методом хроматографии .

Уровень накопления .биомассы определяют по изменению оптической плотности на ФЭК-56.. Титр фага в момент внесения и по окончании ферментации определяют аналогично примеру 1. 0,1Ъ

ГМДЦ инактивирует внеклеточный фаг, несколько снижая рост биомассы и выход продукта.

В процессе ферментации ГМДЦ гидролиэуется на гексаметилендиамин, который менее токсичен и вовлекается в метаболизм бактерий.

Использование предо>агаемого способа позволит ликвидировать фаголиэис при промышленном синтезе биологически активных веществ.

Способ защиты бактериальных культур от бактериофагов, путем введения в питательную среду фагоинактивирующего агента, о т л и ч а ющ и и сятем,,что,,с целью повышения эффективности способа, в качестве фагоинактивирующего агента используют гексаметилендиизоцианат.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Франции Р 224?462, кл. С 12 В 1/24, 1976.