Питательная среда для выделения микроорганизмов-продуцентов амилаз

Питательная среда для выделения микроорганизмов-продуцентов амилаз

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскик

Социалистическик

Республик о

«о697563

Ж

/) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву(51)М. Кл.2

С 12 К 1/02 (22) 3аявлено 163177(21) 2545684/28-13 с присоединением заявки М— (23) Приоритет—

Государственны Я конитет

СССР по делан изобретениЯ и открытиЯ (53) УДК 577.15 (088.8) Опубликовано 1 5.1 1.7 9 Бюллетень Ио 4 2

Дата опубликования описания 15.1 1.79 (72) Авторы Г. И. Денис, И. И. Стяпонавичус, К-A. В. Климавичюс, ИЗО рЕтЕИИя P . К. Рашап, И. И . Галь виДис, 3. А. Квакайте и И. И. ЯнУшаУскас (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной эн з имоло гик (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ

МИКРООРГАНИЗМО — ПРОДУЦЕНТОВ АМИЛАЗ

Мяс ной экстракт 1, 0-2,0

Натрий хлористый 0,4-0 5

Агар-агар 0,8-2, 5 окраше нный крахмал, расщепляемый с(-и

Р-амилазами l 0-5,0

Окрашенный крахмал, расщепляемый сС-амилазой 1, 0-5, 0

Дис ти ллиров ан на я вода Остальное

15

2,0-2,5

1,0-2,0

Изобрете ние от нос итс я к области микробиологии и касается состава питательной среды для селекции или индуцированного мутагенеза.

Наиболее близкой по технической сущности является питательная среда для выделения микроорганизмов — продуцентов амилаз, включающая крахмал, пентон, мясной экстракт, натрий хлористый и агар-агар (1).

Недостаток среды состоит в том, что она не дает резкого отличия между колониями продуцентов с низкой продуктивностью cL-амилазы и продуцентами -амилазы, а также при обработке крахмала иодом возможно заражение микроорганизмами из окружающей среды.

Цель изобретения — ускорение и уточнение отбора продуцентов.

Поставленная цель достигается тем, что среда дополнительно содержит окрашенные крахмалы, содержащие хромогенные группы, один из которых расщепляется с(-и Р --амилазами,второ@с(.-амилазой, при следующем соотношении компонентов,вес.Ъ:

Крахмал

Пептон

В зависимости от красителя и глубины окраски получают окрашенный крахмал двух типов, расщепляемый

Д-и -амилазами или только oL-амилазой ° окрашенный крахмал получают перемешиванием растворимого крахмала в водной среде с 5-20%-ным количеством активного красителя при 20-60 С о в присутсвии неорганических солей или щелочных добавок.

Для этого, чтобы четко различались колонии продуцентов Ы.-и -амилаз, необходимо совместное введение в среду окрашенного крахмала обоих типов.

Получение окрашенного крахмала а) активным красителем Proc|on

Red МХ-2В. б 9756 3

Формула изобретения

Составитель И.Привалона

Редактор O.Êîëåñíèêîâà Техред N,Êeëåìåø Корректор)0.Макаренко

Заказ б 551/10 Тираж 526 Подписное

ЦЛИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Х-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4

В круглодонной колбе емкостью

250 мл смешивают 10 r растворимого крахмала и 100 мл воды и перемешивают при 50 С н течение 30 мин. Прибавляют раствор 1 r красителя Procion Red МХ-2В в 100 мл дистиллиро5 ванной волы и продолжают перемешинание при той же температуре н течение

45 мин, добавляя постепенно небольшими порциями 20 r сернокислого натрия.

После этого н реакционную смесь добавляют раствор 1 г тринатрийфосфата в 10 мл воды и перемешивают еще 75 мин при 50 С. Содержимое колбы охлаждают, окрашенный крахмал отфильтровывают и промывают дистиллированной водой до тех пор, пока фильтрат станет бесцветным. После этого промывают метилоным спиртом. После нысушинания в вакуум-эксикаторе получают готовый продукт — мелкодисперсный порошок ярко-розового цнета, нерастворимый н воде, расщепляемый с(.-амилазой и нерасщепляемый Р- амиазой; б) активным красителем Бигпай1 х

BriIIiant BIuc R.

Окрашивание проводят по такой же 25 методике, как и н случае активного красителя Procion Red МХ-2В. Продуктмелкодисперсный порошок василькового цвета, нерастворимый в воде. Расщепляется как c(.-, так и Р -амилазаии. <0

Пример. Для осуществления изобретения приготавливают питательную среду следующего состава, вес.%:

Крахмал

Пептон 1 ° 0 35

Мясной экстракт 1,0

Натрий хлористый 0 5

Крахмал, окрашенный активным красителем. Sumabix BriIIiant

BIuc R 10 40

Крахмал, окраше нный активным красителем Procion Red МХ-2В 1,0

Агар- агар 2,0

Дистиллированная вода Остальное

Крахмал суспендируют н небольшом количестве воды и кипятят н течение

3 мин при перемешин алии. Охлаждают до комнатной температуры, прибавляют пелтон, растворенный н небольшом количестве воды. После этого добавляют остальные компоненты, перемешивают 3 мин. Подготовленную среду антоклавируют в течение 30 мин при

0,5 атм. Далее среду разливают в стерильные чашки Петри (по 15 мл) и для проверки стерильности среду выдерживают в термостате при 37 С н течение 24 час ° Потом засевают суспензией микроорганизмов и держат в термостате при 37 С. Через 12-48 час проверяют эоны гидролиза, Микроорганизмы, продуцирующие сС-амилазу, образуюI безцветные зоны; микроорганизмы, продуцирующие р -амилазу, образуют зоны розового цвета на фиоле- . товом фоне. По величине эон судят об активности данного прдуцента °

Данный состав питательной среды позволяет в 10 раз увеличить производительность труда при отборе продуцентов Q-и Р-амилаз из природных источника или при селекции микроорганизмов с использованием мутагенных факторов .

Питательная среде для выделения микроорганизмов — продуцентов амилаз, включающая крахмал, пептон, мясной экстракт, натрий хлористый, агар-агар и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью ускорения и уточнения отбора продуцентов, она дополнительно содержит окрашенные крахмалы, содержащие хромогенные группы, один из которых расщепляется сС. — и Р-амилазами, а а второй — oi -амилазой, при следующем соотношении компонентов, нес.Ъ:

Крахмал 2,0-2,5

Пелтон 1, 0-2,0

Мясной экстракт 1, 0-2,0

Иатрий хлористый 0,4-0 5

Агар-агар 0,8-2,5

Окрашенный крахмал, расщепляемый с . -амилазами 1,0-5,0 окрашенный крахмал, расщепляемый с(-амилазой 1,0-5,0

Дистиллированная вода остальное

Источники информации, принятые во ннимание при экспертизе

1. Shinke Ryu, Nischiro Hiroshi, Migibayaschi Narataro AgricuIher

and BioIogicaI ChemicaI, 1974, 32, N 3, р. 665-666 (прототип)