Способ количественного определения пантотеновой кислоты в жидкой питательной среде

Способ количественного определения пантотеновой кислоты в жидкой питательной среде

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советсник

Социалистических

Республик

Оп ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ!!ч699013

Ж

J о (61) Дополни гельное к авт. свид-ву (22) Зая влено 26.06.78 (21) 2625748/28 — 13

1 (5l ) М. Кл.

Г 12 К 1/00 с присоединением заявки .%

Гвоударстооннь!й комитет (23) Приоритет до делам нэобретеннй н открьпнй

Опубликовано 25.11.79 Бюллетень J% 43 (53) УДК576.8. . 093. 1 (088.8 ) Дата опубликования описания 25,11.79 (72) Авторы изобретения

Н. А. Хозова и 10 Г. Сучков (71) Заявитель

Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумнь1й институт (54) СГ!ОГОБ КОЛИЧЕГТВЕННОГО ОП1 ЕДЕЛЕНИЯ ПАЕ1ТОТЕНОВОЙ1

КИСЛОТЫ В ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ

Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии.

Известен способ количественного определения пантотеновой кислоты в жидкой питательной среде путем внесения в нее тест-культуры с

5 последующим инкубированием и определением количества пантотеновой кислоты по мутности среды 11).

Чувствительность способа составляет

10-з

Однако известный способ ие обеспечивает высокой точности.

Целью изобретения является повьппсиие точности способа.

Это достигается тем, « п в качестве тест

15 культуры Используют штамм jersinia pestis

Ev Pan 1.

Штамм jersinia pestis EV Pan 1 получен из вакцинного штамма EV после возггейсзвия нитрозометилмочевиной из числа вариантов, устойчивых к налидиксовой кислоте, и обладает стабильно высокой избирательной реакцией на этот витамин. Штамм jersinia peszis EV Рап 1 депонирован в коллекции Всесоюзного ордена

Трудового Красного Знамени иаушо-исследовательского института Микроб и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологобиохимическимн признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Полиморфные, грамнегативиые палочки с закругленными концами, длиной 1.-2 мкм и шириной 0,3 — 05 мкм. Жгутиков нс имеет. спор не образует. Бульон Хоттингсра, хлопьсвидиый осадок, бульон прозрачный. Агар Хоттингсра.

Колонии диаметром 0,5 — 2 мм с припо,-н яты м зернистым центром, окрашенные в сероватый цвет и имеющие фестончатую периферическую зону.

Физиолого-биохимические свойства.

Оптимум роста 26 — 28 Г. Устанавливает глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, галактозу, маннозу. Восстанавливает нитриты. Желатину не разрушает. Индол не обра !уст. Сероводород выделяет. Продуцирует пестицин 1. Грела

Джексона — Берроуза с темином. Образует иепигментированные колонии.

Авирулентен для белых мьиией при подкожном введении от 10 до 1() микробных клег я

Составитель Е. Дубовицкая

Техрсд Н.Бабурка Корректор Н. Задерновская

Редактор О. Степина

Тираж 526 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., n. 4/5

Заказ 7448/26

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 6990 ток и для морских свинок до 10 микробных клеток.

Требует для роста наличия в питательной среде метионина, фенилаланина, треонина, цистеина и патотеновой кислоты или пантотената кальция.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Э ,Для получения опытной суспензии используют 48 ч культуру, выращенную при 28 С на плотной агаровой среде. Готовят густую взвесь 1О в физиологическом растворе, отмывают клетки центрифугированием с целью освобождения от питательных веществ, вновь ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации

2 10 микробных клеток (м.к) в 1 мл по оп- 15 тическому стандарту мутности и ставят в термостат при 28 С на 3 ч для истощения внутриклеточных запасов витаминов.

8 качестве основной используется синтетическая среда на фосфатном буфере М/15 рН 20

7,1 — 7,2 (Na2HPO4 — 66,6 г КН2Р04 — 33,4 г, вода — 1000 мл). Непосредственно перед опытом вносят стерильно следующие компоненты в 100 мл основы: (NH4)g $04 20% — 0)5 мл, MgSO4 7Н О 10% — 0,25 мл, Глюкоза 40%

0,5 мл, раствор сульфита натрия до концентрации 0,1% и аминокислоты — метионин, треонин, фенилаланин и цистеин-в дозах 0,01 мг/мл.

Готовят два параллельных ряда пробирок с последовательными десятикратными разведениями исследуемой питательной среды. Разводят до 10 основной синтетической средой без добавления лантотеновой кислоты.

Для построения стандартной кривой роста тест-штамма два параллельных ряда пробирок

13 заполняют по 4,5 мл основной синтетической среды с добавлением пантотеновой кислоты, в количествах 102 1Q 1 10- 10 г 10-з

10 мкг/мл. Затем в каждую пробирку, как в опытном, так и в стандартных рядах, вносят по 0,5 мл истощенной суспензии тест-штамма, создавая посевную концентрацию 200 млн м.к./мл.

Посевы помещают в термостат при 28 С.

После выдерживания посевов в течение 1 сут производят ежедневное определение интенсивности роста тест-штамма путем измерения мутности среды с помощью нефелометра, Использование изобретения позволяет определить количество пантотеновой кислоты в преде10-4 /

Формула изобретения

Способ количественного определения пантотеновой кислоты в жидкой питательной среде путем внесения в неЕ тест-культуры с последующим инкубированием и определением количества пантотеновой кислоты по мутности среды, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве тесткультуры используют штамм jersinia pestis

EV Pan l.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Одинцова Е. И. Микробиологические методы определения витаминов. М., 1959, 119—

120.