Способ получения протеолитического фермента

Способ получения протеолитического фермента

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

а(- t „,,2а :.„ Я

54 TEJ,-. -,(. дя

Йи 6/3 но т púнв

О П

« >703568

Союз Сьветскик

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву—

l (22) Залвлеио030578 (21) 2609541/28-13 с присоединением заявки Ж(23) Приоритет (51)М. Кл

С 12 D 13/10

Государственный комитет

СССР ио делам иэобретеиий и открытий

Опубликовано 151279. бюллетень Но 46

Дата опубликования описанив 1512 9 (53) УДК 576. . 851:577. 156.1 (088.8) Н.С. Егоров, Н.С. Ландау, M.Н. Лебедева и Л.Г. Гутвейб (72) Авторы изобретения (54) .СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО

ФЕР MEHTA

Ius используют штампы BaciIIus oii- .

gonitrophiIus 21 р или BaciIIus virgatus 44 б. Выращивание продуцентов ведут в среде следующего состава, вес.Ф: глицерин 1,5-2,5; цнтрат Na

0,4-0,6; КН РО+ 0,09-0,11; Ма НРО

0/6-0@8; NH4NO 0 06-0 08; Mg 804

0,015-0,025у ЯаСС 2,5-3,5(остальноеводопроводная вода .

Штаммы хранятся в музее живых культур кафедры микробиологии Биологического факультета МГУ и имеют следующие характеристик и.

BaciIIus oIigonitrophiIus 21 р представляет собой грамположитель. ные палочки размером 1,6-3,6 х к0,7-0,8 1(иногда образующие короткие цепочки, перитрих. Споры продолгова|тые, расположены не строго локализовано, клетку не деформируют. Желати" . . ну разжижает, молоко пептониэируют, восстанавливает нитраты, усваивает

-минеральный азот, хорошо гидролизует

i . крахмал, при росте на сахарах обра зуется плотная пленка. На РПЛ рост обильнЬ- . поверхность колоний бугристая, кожйстая, на безаэотистой среде Эшби хорошо растет, образуя плоские колоний, íà МПЛ образу.-.т сероИзобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения ферментов иэ микроорганизмов . 5

Известен способ получения протеолитическ oro фермента, предусматривающий культивирование микроорганизмов рода BaciIIus на питательной среде, содержащей источники углерода, азо- 1О та и минеральные соли, отделение клеток и выделение целевого продукта из культуральной жидкости (1).

В качестве продуцента используют штаммы BaciIIus subtiIis и BaciIIus

mesentericus.

Недостатком известного способа является низкая фибринолитическая и тромболитическая активность при высокой казеинолитической активности, что ограничивает применейие фермента для медицинских целей. Кроме того, способ требует длительного времени культивирования.

Целью изобретения является увеличение фибрннолитической и тромболитической активности фермента и сокращение времени культивирования, Цель достигается тем, что по предлагаемому способу из рода BaciI(71) Заявитель московский ордена ленина и ордена трудового красного знамени государственный университет им. М. В. Ломоносова

t

703568

"--.водброд, "на картофеле @ger обильный, на посевной среде, состояцей иэ сусухой, кружевной. xoro рыбного агара — О, 5%, дрожжеBaciIIus virgatus 44б представляет вого экстраКта — 0,3%, пептона собой грамположительные палочки раэ- 0,5%. мером 1,5,0 х 0,6-0,7,О, одиночные и Культивирование продуцента осусоединенные в цепочки, перитрих . 5 "ществляют в течение 24 ч глубинным

Споры продолговатые, экстерминально способом на качалках в колбах на р оложены, клетку не дефорйирую У . 750 мл со 100 мл среды. Полученная

РазжИжают желатину, пептониэирует культуральная жидкость содержит молоко, усваивает минеральный и не : 3217 усл. ед/мл фибринолитической усваивает молекулярный азбт, вбсста-. p активности, 6,2 каз. ед/мл казеинолинавливает нитраты, гидролиэует кРах»: тйческой активности и растворяет мал, образует кислоты на глюкозе, тромбы крови эа 40 мин. Выделение манните, сахарозе. На беэазотистой . фермента из культуральной жидкости среде Эшби рост крайне скудный, на после отделения клеток центрифугироPIIA штрих белый, слегка выпуклый, 15 ванием проводят с помощью сернокисповерхность неровная, с влажным блес- лого аммония О, 75 насыщения. ПолуКоМ на картофеле рост обильный; ченный препарат обладает удельной бугристый, белый .. активностью по фибринолизу 5400 усл.

Продуценты образуют "вне спеточную ед/мг белка, по казеинолизупротеазу на малокомпонентной среде 11 каэ. ед/мг белка. следуюцего состава, вес .%s глицерин-2,Данный способ позволяет получить

° /

20 цитрат Na - 0,5, КН Р04- 0,1, фермент с высокой фибринолитической, Na HPO+ - 0,7, ИН4БОз - 0,07, тромболитической и низкой казеино-

MgSOy - 0,02, NaCI - 3, в течение . литической активностью эа короткое

24 ч, затем отделяют клетки и фер- время культивирования. мент осаждают из культуральной жидкос-25 ти сернохислым аммбнием при насыцении 0,7-0,9. - Формула изобретения

Пример 1. В синтетическую среду содержащую (вес ° %) /глицерин-2 1 . Способ получения протеолитицитра™ 1 а - 0,5, КН2Р04 — 0,1, 30 ческого фермента, предусматривающий

Na 0 07 культивирование микроорганизмов роИдБО4 - 0,02, NaCI — 3, после стерн" да BaciIXus на питательной среде, лизации вносят 5 об.% одноуточного содеражцей источники углерода, аэожидкого "посевного материала - . та и минеральные соли, отделений

Bac. OIigonitrophiIus 21 р, выра- 35 клеток и выделение целевого продукта щенного на посевной среде, состоя- из культуральной жидкости, о т л ищей из сухого рыбного агара — 0,5%| ч а ю шийся тем, что, с целью дрОжжевого экстракта — 0,3%, Пептона- повышения фибринолитической и тром0,5% . Культивирование осуцествляют болитической активности фермента и глубинным Способом в колбах на 750 мл 4п сокращения времени культивирования, со 100 мл среды на качалках при ЗО C из рода ВасШив используют штаммы в тЪчение 24 ч. ПолуЧеййая "культу- Вас1ХХцв оХ1доп11горЬЫцв 21 р или ральная жидкость содержит 2684 Усл. BaciIXus ч1гдаЫв 44б. ед/мл фйбринолитическ4Й активйбс гй,- 2, Сйособ по п. 1, о т л и ч а ю4 04 каз, ед/мл каэеинолитйческой 4 ц и и с я тем, что вырацивание проактивности и растворяет тромбй за дуцентов ведут в среде следующего — ,30 мин. Выделение фермейта из куль- состава, вес.%: глицерин 1,5-2,5; туральной жидкости после отделенйя цитрат Na 0,4-0,6; КН Р0 0,09-0,11; клеток центрифугированиеьТ йроводят NaqHPOy 0,6-0,8; .ИН ИОq 0,06-0,08у с помоцью сернокислого аммония Ок8 Мд304 О, 015-0,025у ИаСХ 2,5-3,5у насыщения. Полученный препарат об- остальное — водопроводная вода. ладает удельной активностью по фибринолизу 5000-6000 усл. ед/мг белка, Источники информации, по казеинолизу - 6-10 каз.ед/мг бел- прйнятые во внимание при экспертизе ка.: .. =: 1. Егоров Н.С. Ушакова В.H.

Пример 2. В синтетическую 55 О фибринолитической и тромболитисреду указанного выше состава после ческой активности некоторых бакте-. ,стерилиэации вносят 5 об.% одно- рий, Научный доклад высшей школы, суточного жидкого йосевного" матерна- Бйологические науки, 1968, д 6, ла Вас, virgatus 44б, выращенйого 93-98.

ЦНИИПИ Заказ 7762/28 Тйраж 526 Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4