Способ нахождения оптимальной питательной среды для культивирования клеток

Способ нахождения оптимальной питательной среды для культивирования клеток

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОЛ ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 08. 12.7 7 (21) 255306.1/30-13 с присоединением заявки №вЂ”

Гасударственный камитет

СССР

ho делает изобретений и атхрытий (23) Приоритет

Опубликовано 15. 12.79. Бюллетень ¹ 46

Дата опубликования описания 20,12.79.093. (72) Автор изобретения

Л. В, Богоров

Ордена Трудового Красного Знамени институт физиологии растений им. K. А, Тимирязева АН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ НАХОЖДЕНИЯ ОПТИМАЛЬНОЙ ПИТАТЕЛЬНСЙ

СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК

Изобретение относится к области мик- робиологии и может быть использовано в лабораторной практике для оптимизации состава сред и условий выращивания микроорганизмов, водорослей, простейших, а также культур растительной и животной ткани.

Известен способ нахождения оптимальной питательной среды для культивирова- ния клеток путем посева исходной культуt0 ры на ряд исследуемых питательных сред, отличающихся по своему составу. Оптимальная питательная среда выбирается по максимальному урожаю клеток. Численность клеток учитывается или методом счета поц микроскопом, или по плотности клеточной суспензии, определяемой нефелометрически tl), Основные недостатки известного метода нахождения оптимальной питательной среды для культивирования клеток заключаются в его трудоемкости и невысокой точности выбора оптимальной среды в тех случаях, когда различия в урожае клеток незначительны. Кроме того„при работе с накопительными или смешанными культурами влияние сопутствующей микрофлоры может быть настолько значительным, что определение оптимальной питательной среды изBeQcTEIEIM способом будет невозмо>юным.

: Целью изобретения является увеличение точности выбора оптимальнои питатель» ной среды и сокращение времени исследования.

Для достижения этой цели в основе предлагаемого способа лежит известный биологический принцип, согласно которому физиологические требования организма к составу питательной среды возрастают при уменьшении концентрации посевного материала. Если клетки способны размножаться при их минимальном количестве, то состав питательной среды в наибольшей. степени отвечает требованиям организма.

Предлагаемое изобретение новьппмет точность нахождения оптимальной питательной среды, позполяет проволиту, по708572

14 10

8 "10

12«10

5 ° 10

7 10

Б-2

b-3

t-ii- (1(10

9 10

1-7

3 иск оптимапьной среды n»st организма, который находится в смешанной ипи накопительной культуре, ибо выбор среды проводится ло способности организма к размножению при минимапьном числе жизнеспособных клеток, Кроме того„пред- пагаемый способ дает возможность одновременно опробовать значитепьное число питатепьных сред, так как отпадает необходимость в определении количества (0 клеток на каждой питатепьной среде.

Пример. Выбор оптимальной пи- татепьной среды для купьтивирования морской планктонной водоросли Neph,r O(.hfOpi. 5 д,Ю(е.

Испытуемые питательные среды сослтавпяют по прописям искусственной морской воды с добавлением биогенных эпементов.

Каждую исследуемую питательную среду наливают в 7 пробирок по 9 мп, В первую пробирку вносят по 1 мп исходной культуры и тщательно перемешива25 ют, затем из нее берут 1 мп разбавленной суспензии и вносят во вторую пробирку. После перемешивания из нее берут 1 мп и переносят в третью пробирку. Таким образом, посевной материал

30 последовательно разводят в каждой исспе дуемой питательной среде до 10 траз.

Ка кдую серию разведений посевного материапа на исследуемой питатепьной сре де проводят в трех повторностях. Посев

35 осуществпяют одпм и тем же посевным материалом одного возрас а и из одной колбы.

Сравнение двух методов нахождения

Параллельно с этим ставят опыты в копбочках Ilo известной методике с последующим учетом, урожая клеток.

Пробирки и колбочки помещают в каме ру фитотрона с температурой 1820оС и освещением 2000 пкжс.

Рост клеток Меphrochfovig >0.(.inc в пробирках и колбочках отмечают,визуапьно каждый. день и оценивают по 6бальной системе. После 14 дней купьти« вирования в колбочках определяют урс жай клеток путем прямого счета в камере Горяева.

Подбор оптимальной среды проводят в 4 этапа таким образом, что на каждом последующем этапе испытывают серию сред, полученных путем изменений составных компонентов среды, оказавшейся оптимальной на предшествующем этапе.

Результаты испытаний, приведены в таблице, позволяют выяснитЬ наилучшую дпя развития Мер л острот (.S Ьабце питатепьную среду Б-1004, которая дает хороший рост N, ЬЫ(йЕ. при наибопь шем разведении 10 и на которой накаппивается урожай 8,9 ° 10 кпеток/мп.

При сравнении двух методов нахождения оптимальной питатепьной среды по-; данным, приведенным в таблице, видно, что при использовании прототипа не всегда, отчетливо видна разница между урожаем клеток на питательных средах, которые отвечают физиологическим требованиям организма. Наиболее отчетливо это различие выявляется при использовании предлагаемого способа, при этом получаются более достоверные результаты. оптимальной питательной среды

703572

24-10

Б- 1 0

44 1О, 51 10

+++ ++

+-+-+ ++

Б-1 1

Б-12

49 10

21 10

18 ° 10

+++ +++

Б-1 5

Б-1 6

17 ° 10

11 10

28 ° 1 05

Б-l 7

Б-19

Б-1 03

Б-l 04

29 ° 10 о

88 ° 10

Б-1 05

Б-106

Б-1 07

Б-l 08

Б-1 001

Б-1 002

Б-1 003

++ ++

+ +

Б- 1. 004 е

Б-1 005. ++- <- . ++

+Ф+ ++

Б-101 +

Б-l 02 +++

1.!++ ++ ++

Продолжение таблицы

14 10

11 10

73 10

1Ь 10

33. 10

41 10

27. 10

21 10

44 10

27 10

l

89 10

Г

77 ° 10 . з

7,1е! 0

703572

Продолжение таблицы

Б-1007 + +

24 10

69 ° 10

17 10

Б-1 008 +++ ++ +

Б-1 009 +

73 10

Б-1 01 0 +++ ++

Примечание: отсутствие роста; + — плохой рост; + — рост;

++ - хороший pocr; +++ - очень хороший рост;

++++ = интенсивный рост., Таким образом, предлагаемое изобре- . тение повышает точность нахождения оптимальной питательной средыр позволяет проводить поиск оптимальной питательной среды для организма, который .находится в смешанной или накопительйой структуре; предлагаемый спопоб дает воз. мЖность одновременно опробовать значительное число питательных сред, так как отпадает необходимость в определении количества клеток на каждой питательной

"среде.

Составитель Н, Паников

Релектор Л. Лоеожилоее Текрел М. Квтемеш Корректор К . Млклролко

Заказ 7763/29 Тираж 526 Подписное!

111 ИИПИ Государственного комитета СССР. по делам изобретений и открытий

11, 30 15, М<к:ква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Фпцпял 1Ц111 "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Фоормула изобретения о

Способ нахождения оптимальной пита» тельной среды для культивирования клеток, предусматривающий вырашивание культуры на испытуемых питательных средах с последующим ее отбором, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью уве. личения точности выбора и сокращения времени исследования, посевной материал последовательно разводят в каждой исследуемой питательной среде; и оптималь35 ную среду выбирают по наличию роста клеток при наибольших разведениях по- севного материала.

Источники информации, 4О принятые во внимание при эксйертизе

1. Большой практикум по микробиологии, под ред. Селибера Г. Л., "Высшая школа, М., 1 962, с. 105.