Штамм астinомусеs ruтgеrsеnsis n88-продуцент ферментов

Штамм астinомусеs ruтgеrsеnsis n88-продуцент ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ШТАММ ACTINOMYCESRUTGER - SENS IS №88 - ПРОДУЦЕНТ Ф'ЕРМЕНТОВ, ЛШИРУЮЩИХ КЛЕТОЧНЫЕ СТЕНКИ МИКРООРГАНИЗМОВ,' штамм хранится во. Всесоюзной коллекции микроррганизмой под № 592 и депонирован Б музее'чистых культур В.НИН прикладной энзимологии под № 151 оМорфологические признаки.Культуры бурые, воздушный мицелий серый или темно-серый. Средняя толщина гиф 0,6-0,8 мк. Спороносцы искривленные, ;иногда с неполными спиралями. Споры овальные и про- • долговатые. Поверхность спор гладкая. , •Культуральные признаки.Кукурузная среда, состоящая из следующих компонентов, г/л: кукурузный экстракт -. 10,Of глгоко- : за - 5,0; Naff - 5,0; (NH^}2St)4 -3,5, СаСО,^- 5,Ojкрахмал нерастворимый - 15,0; агар-агар - 20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бледно-медовый.Кукурузная среда, состоящая из следующих компонентов г/л: кукурузный экстракт - 10,0, MaCl - 3,0, (NH^^jSO^. - 3,0, СаСОч 2,5,' ' • крахмал нерастворимый - 10,0', агарагарг20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бледномедовый.','Овсяная среда с дрожжевым экстрак- TW. Рост воздушного мицелия обильный, цвет соломеннотжелтый, субстратный г-шцелий желтоватый.Среда Гаузё, Состоящая из следующих компонентов, г/л: крахмал нерастворимый - 20,0, MgS04'7 НуО - О , 5 ; Na С 1 • - 0,5; KNO^~ -~ 1,0/ К^НРО^ - 0,5', FeS04 - 0,01, агарагар - 20,0. Воздушный ?иицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.Среда ВаксйаМа с"глицерином, воздушный мицелий белесый, субстратный мицелий бёсцветнь1й.Среда СР-1 с глюкозой следующего состава, г/л: СаСО-} -KNO^-0,7, MgS04-7H20 - 0,35J NaCl - 0,35,' KjHPO^ --0,53; FeSO^, - следы; глюкоза - 14,0, агар-агар - 20,0. Воз- . душный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.Сусло-агар. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.Физиологе - биохимические свойства.Крахмал не тидролизует, желатину разжижает умеренно, молоко энергично свертывает на четвертые сутки и слабо пентонизирует на 30-ые сутки. Меланоидных пигментов не образует.Потребляет: глюкозу, арабинозу, ксилозу, маннит и фруктозу..Не потребляет: инозит, сахарозу, рамнозу ' и раффинозу. • • •Антагонистические свойства.Обладает антагонистическим свой- . ствами по o^THomeHinq к дрожжам и ёак- 'териям родов Bacillus Escherichia, Pseudomonas, Microcpccus.(Лcr*^о4^-sjbo >&

Пде; О>

":":0

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕС НИХ

РЕСПУБЛИН

П9) (И) е

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMPV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛА@ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ЫТИЙ (21) 2570851/28-13 (22) 20.01.78 (46) 15.02.83, Бюл. б ,(72) B.Ä. Кузнецов, М.FI. Гуреева, A.Ï. Шпокене, Ю.Ф. Василяускас, A.П. Ужкуренас и А.Б. Рагавичюс (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии и Институт микробиологии AH СССР (53) 577.15.08(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

9 439514, кл. С 12 0 13/10, 1972. (54) (57) IIITAHM ACT I NOMYCES RUTGERSENSIS 988 - ПРОДУЦЕНТ ФЕРМЕНТОВ, ЛИЭИРУЮЩИХ КЛЕТОЧНЫЕ СТЕНКИ МИКРООРГАНИЗМОВ, штамм хранится во, Всесоюзной коллекции микроорганизмов под 9 592 и депонирован в музее чистых культур ВНИИ прикладной энзимологии под Р 151.

Морфологические признаки.

Культуры бурые, воздушный мицелий серый или темно-серый. Средняя толщина гиф 0,6-0,8 мк. Спороносцы искривленные, иногда с неполными спиралями. Споры овальные и продолговатые. Поверхность спор гладкая.

Культуральные признаки.

Кукурузная среда, состоящая из следующих компонентов, r/ë: кукурузный экстракт вЂ, 10,0 глюкоза — 5,0; NaC1 - 5,0; (NH4)>564 -3,5, СаСО - 5,0;крахмал нерастворимый15,0; агар-агар — 20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный ми целий бледно-медовый.

Кукурузная среда, состоящая иэ следующих компонентов г/л: кукурузный экстракт — 10,0, МаС!

3,0, (НН4 РО - 3,0, СОСО 2,5; крахмал нерастворимый - 10,0; агарагар-20,0. Воздушный мицелий отсут3I5E) С 12 М 1 00, С 12 P 1/06 ствует, субстратный мицелий бледномедовый.

Овсяная среда с дрожжевым экстрактом. Рост воздушного мицелия обильный, цвет соломенно-желтый, субстратный мицелий желтоватый.

Среда Гаузе, состоящая из следующих компонентов, г/л: крахмал нерастворимый - 20,0, M9S04 ° 7 Н О0,5; NaC1 — О,5; KNO — 1,0, К НРО ц — 0,5; FeS04 — 0,.01, агарагар — 20, О. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.

Среда Ваксмеайа с глицерином, воздушный мицелий белесый, субстратный мицелий бесцветный.

Среда СР-1 с глюкозой следующего состава, r/л: CACO g — KIIOg — О, 7, М9 S0g.7Н О вЂ” О, 35, НаС 1 - 0,35, K0HP0g - 0,03, Ге50g — следы, глюке- С за — 14,0, агар-агар — 20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстрат- ный мицелий бесцветный.

Сусло-агар. Воздушный мицелий отсутствует„ субстратный мицелий бесцветный.

Физиолого — биохимические свойства.

Крахмал не гидролнзует, желатину разжижает умеренно, молоко энергично свертывает на четвертые сутки и слабо пентониэирует на 30-ые сутки.

Меланоидных пигментов не образует.

Потребляет: глюкозу, арабинозу, ксилозу, маннит и фруктозу..Не потребляет: инозит, сахароэу, рамнозу и раффинозу.

Антагонистические свойства.

Обладает антагонистическим свой- . ствами по отношению к дрожжам и бак териям родов 8acillus Escherichia, Pseudornonas, I0Iicrococcus.

l °

704179

Изобретение относится Y микробиолбгическбй промышленности и ка сается нового штамма — продуцента ферментов, лизирующих клеточные стенки микроорганизмов, используемых в пищевой промышленности, медицине, сельском хозяйстве.

Известей штамм рода Actinomyces, а именно Actinomyces cinегоsus

За - п родуцент литических ферментов P1) .

Недостатком известного штамма является невысокая литическая активностЬ продуцируемых ферментов.

Целью изобретения является получение штамма микроорганизмов — про- 15 дуцента ферментов, лиэирующих клеточ-. .нйе стенки микроорганизмов, обладающего высокой литической активностью.

Предлагаемый штамм выделен из подзолистых; почв южной заокской части Московской области. Из выде ленных многочисленных актиномицетов в процессе стабилизирующего отбора отобран штамм Actinomyces rutgersen"

sis 988 как продуцент комплекса 25 лизирующих ферментов. Лиэирующее действие на дрожжи и другйе микроорганизмы проверяли методом агариэованных блокОв на среде следуюцего состава, г/л: KNOq — 1,0; К2НРО4

0,5, NaC1 — 0,5; MgS04 7Й О вЂ” 0,5;

CaCOn — 0,5; кормовые дрожжи5,0; агар-агар — 20,0. Штамм Асй1nomyces rutgersensis 988 депониро- ван во Всесоюзной коллекции микро организмов под 9 592 и во ВНИИ ,прикладной энэимологии под 9 151.

Штамм бтличается от уже иэвестных продуцентов лизирующих ферментов своими морфологическими, фйзиологическими и культуральными признака- 40 ми.

Штамм имеет следующую характе"ристику.

Морфологические признаки. . 45

Культуры бурые, воздушный мицелий серый или темно-серый. Средняя толщина гиф О,б-0,8 мк. Спороносцы

- искривленные, иногда с неполными спиралями. Сйоры овальные и продолговатые. Поверхность спор гладкая.

Культуральные признаки штамма

Actinomyces rutgersensis 988 на первые сутки роста.

Кукурузная среда, состоящая иэ следующих компонентов, г/л: ку- 55 курузный экстракт — 10,0 аппо сырому весу), глюкоза - 5,0, Na01 — 5,0, (И Н ) 504 — 3, 5; СаСΠ— 5, О, Крахмал йерастворимый — 15,0; агар-агар—

20,0. Воздушный мицелий отсутствует, 60 субстратный мицелий бледно-медовйй.

Кукурузная среда, состоящая из следующих компонентов, г/л: кукурузный экстракт — 10,0, NaC1 — 3,0, (NQ)pS0p - 3,0; CaCOg - 2,5; крахмал нерастворимый — 10,0; агар-агар—

20,0. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бледно-медовый.

Овсяная среда с дрожжевым экстрактом. Рост воздушного мицелия обильный, цвет соломенно-желтый (JI2), субстратный мицелий желтоватый..

Среда Гауэе, состоящая иэ следующих компонентов„ г/л: крахмал нерастворимый .- 2,0, MOSO4 ° 7HgO

0,5; NaC 1 — 0,5; KNO — 1,0; К2НРОф

0,5 FeSO4 — 0,01, агар-агар — 20,0.

Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.

Среда Ваксмана с глицерином. Воздушный мицелий белесый, субстратный мицелий бесцветный.

Среда CP-1 с глюкозой следующего состава, г/л: СаСО.1 - 0,7, КИО j

0,7, Mg 50 4 7Н О вЂ” 0,35, ИаС1

О, 35; К НРО4 — 0,53, FeSOg — следы; глюкоза — 14,0 агар-atap - 20,0.

Воздушный мицелий отсутствует, суб-! стратный мицелий бесцветный.

Сусло — агар. Воздушный мицелий отсутствует, субстратный мицелий бесцветный.

Физиолого-биохимические свойства.

Крахмал не гидролизует, желатину разжижает умеренно, молоко энергично свертывает на четвертые сутки и слабо пептонизирует на 30-ые сутки.

Меланоидных пигментов не образует.

Потребляет: глюкозу„ арабинозу, ксилозу, маннит, фруктоэу, не потребляет: инозит, сахарозу, рамнозу и раффинозу.

Антагонистические свойства.

Обладает антагонистйческими свойствами по отношению к дрожжам и бактериям родов 8aci!ius Escherichià, Pseudomonas, Micrococcus, II р и м е р. В качестве посевного материала при выращивании продуцента в колбах использовали семисуточную культуру Actinomyces rutgersen"

sis 988„ выращенную на стандартной кукурузной среде 92 следующего состава, г/л: кукурузный экстракт — 10,0; глюкоза 5,0, ИаС 1 — 5,0 (NH4)>SO4

3,5, СаСО 1 - 5,0; крахмал нерастворимый - 15,0; агар-агар — 20,0 при 28-30 С. Споры смывали с косяка

15 мл дистиллированной стерильной воды, и в каждую колбу вносили по

3 мл споровой суспенэии (10 -10 спор в 1 мл 1;.

Для глубинного культивирования использовали среду следующего состава, г/л: К НРΠ— 2,5; MgSO< ° 7Н20

1,0, ИН4С1 — 0,62, пекарские дрожжи — 2,5; соевая мука — 10,0, дрожжевой автолиэат — 1 мл.

Компоненты питательной среды растворяли в дистиллированной воде в вышеуказанной последовательности, рН среды перед стерилизацией 7,5.

704179

Лизирующая активность =

% лизиса « разведение

Л ед/мл, Составитель Т.Мелентнева

Редактор М.Кузнецова Техред А.Ач Корректор,Л.Вокшан

Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 6394/2

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Культивирование вели в 750 миллиметровых качалочных колбах по

50 мл среды в каждой колбе. Среду в колбах стерилизовали при 1,3 атм в течение 40 мин. Продолжительность культивирования 24-30 ч на круговых качалках при 220 об/мин.

Литическую активность определяли турбидиметрическим методом. К 1 мл субстрата (суспензии дрожжей Candida) добавляли 1 мл трис-буфера 0,2 М при 10 рН 7,0-7,2 и 2 мл культуральной жидкости или ферментного раствора, разведенного так, чтобы за 1 ч инкубации при,40 С оптическая плотность реакционной смеси измеряли до и пос- 15 ле инкубации (начальная экстинкция должнъ быть s пределах 0,7-0,8) на ФЭК-56 при длине волны 537 мм в кювете 1 мм с расстояниями между стенками.

; 20

Расчет проводили по формуле:

% лизиса субстрата A-В . 100, В где A - -начальная экстинкция, В - конечная экстинкция; 25

Перечисление % лизиса субстрата на единицы лизирующей активности на мл культуральной жидкости: где Д вЂ” количество ферментного раствора в реакционной смеси.

Штамм Actinomyces rutgersens!s

Р 88 начинает синтезировать лизирующие ферменты через 24 ч культивирования и достигает максимума литической активности через 30 ч ° Культуральная жидкость из Act. rutgersensis М 88 при разведении в 10 раз лизирует Candida utilis на 40-45%, Sacch. cerevisiae на 30-35%, Esche-

richia coli — на 50-60%, Nicroc.

lysodeichicus на 45-55%, Pseud. (f luorescens — на 34-45%, 8ас. subtilis — на 40-50%.

Выход ферментного препарата 17 r на 1 л культуральной жидкости.

AKTHBBocTb 20000-22000 ед/г (no отношению к дрожжам рода Candida), Лизирующий ферментный препарат из Actinomyces rutgersensis Р 88 содержит, мл/г: растворимых белков — 200-220, аминного азота—

7,0-7,5, редуцирующих сахаров — 4547.