Способ получения мутантов холерных вибрионов

Способ получения мутантов холерных вибрионов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ

COIO3 COBBTCKNX

Социалистических

РЕСлУблНК

<9704180 (61) ???????????????????????????? ?? ??????, ????????-????????” (22) ???????????????? 0806.78 (21) 2647760>

Опубликовано 230781. Бюллетень М.27

Дата опубликования описания 230 781 (51)М. Кл.

С 12 К 1/00

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (53) УДК 576 . 8. 09 3,,1 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Т.А. Кудрякова и М. С. Дрожевкина (71) Заявитель

Ростовский-на-Дону государственный научноисследовательский противочумный институт (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МУТАНТОВ

ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ

Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии.

Известен способ получения мутантов холерных вибрионов путем выращивания исходной культуры в жидкой питательной среде, приготовления микробной суспензии, обработкой ее нитрозометилмочевиной, пересевом на плотную питательную среду и отбором колоний мутантов (1) .

Однако известный способ является довольно сложным.

Целью изобретения является упрощение отбора мутантов. эта цель достигается тем, что сус- 1 пензию обрабатывают нитрозометилмочевиной в концентрации 0,1 — 0,5 мг/мп и отбирают мутанты по коричневой окраске колоний.

Способ осуществляется следующим, образом.

Засевают петлю суточной агаровой культуры холерного вибриона в 5 мл дрожжевого бульона.

После двукратного отмывания I-суточной бульонной культуры физиологическим раствором к осадку добавляют

1 мл его. В 0,1 мг/мл HNN вносят

0,1 мп отмытой культуры холерного вибриона. Раствор нитрозометилмоче- З0 вины готовят путем добавления 1 мг

НММ в 1 мл физиологического раствора.

0,1 мл препарата переносят в 0,9 мл

Физиологического раствора, в который добавляют 0,1 мл культуры. После контакта с препаратом в течение 15 минут производят высев на питательную среду следующего состава (г/л): экстракт дрожжевой (аминный азот

30 мг е) — .10,0 пелтон Мартека (соотношение 1:1 к объему дрожжевого экстракта) — 5,0 агар Корсаковский — 20,0

Посевы выращивают при 37 и наблюо дают за образованием пигментных колоний 10 сут. Пигментную колонию пересевают на чашку с агаром. Череэ 1 — 2 сут выращивания газон выросшей культуры приобретает шоколадный цвет. Селекционированные этим способом мутанты стойко сохраняют способность образовывать пигмент.

Способ иллюстрируется следующим примером.

1 мг нитроэометилмочевины растворяют в 1 мл физиологического раствора. 0,1 мл препарата переносят в

0,9 мл физиологического раствора, в который . добавляют 0,1 мп VibrioeItor

Штамм готовят путем посева 1

704180

Формула изобретения

Составитель Е. Дубовицкая

Редактор Л. Гольдина Техред T. Маточка Корректор М. Пожо

ФлййайбЪ йФЪЬхЗаказ 5769/40 Тираж 528 Подписное

BHHKlH Государственного ксмитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал .ППП Патент, г..Ужгород, ул.Проектная, 4 петли суточной агаровон культуры в пробиркУ с 5 мл бульон а. Через сут ки выращивания при 37 центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. К осадку добавляЮт по 5 мл физраствора и отмывают центрифугированием дважды, удаляя недостаточную жидкость.

Затем к осадку добавляют 1 .мл того же раствора. Смесь HMM с культурой холерных вибрионов помещают в термостат на 15 мин. при. 37, Затем 0,1 пробы переносят в 10 мл бульона и пс

0,5 мл последовательно раститровывают в шести пробирках с 4,5 мл бульона. Иэ каждой пробирки высевают по

0,1 мп на 3 чашки с агаром для получения изолированных колоний. Через сутки проводят повторное титрование культуры из всех пробирок по 0,5 мл и высевают на 3 чашки с агаром по

0,1 мп из 5, 6, 7 пробирок. Все посевы сохраняют при 37 С в течение 10 суток. Колонии коричневого цвета пересевают на чашку с агаром и через

1 - 2 сут. выращивания газон культуры имеет шоколадный цвет ° Остальные свойства пигментной культуры VibrioeItor 381 П* не отличаются от исходного штамма.

Использование изобретения позволит упростить отбор мутантов холерных вибрионов при проведении генетических исследов аний, Способ получения мутантов холерных вибрионов путем выращивания ис* модной культуры в жидкой питательной среде, приготовления микробной суспензии обработкой ее нитрозометилмочевиной, пересевом на плотную пита t5 тельную среду и отбором колоний мутантов, отличающийся тем, что, с целью упрощения отбора мутантов, суспенэию обрабатывают нитроэометилмочевиной в концентрации 0;1

2О 0,5 мг/мп и отбирают мутанты по ко- ричневой окраске колоний.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Проблемы особо опасных инфекций, 1972, в, 4(26), стр; 95-99.