Способ получения убитой синегнойнойполивалентной корпускулярной вакцины

Способ получения убитой синегнойнойполивалентной корпускулярной вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП

И.З О Б Р Е Т Е и И Я

Союз Советских

Социалистических

Республик

<„,704183

К АВТОРСКОМУ СВИ ИТИЗЬСТВУ (22) Заявлено 12.1277 (21) 2549001/28-13 (5()+ с присоединением заявки Йо

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий

С 12 К 5/00 (23) Приоритет

Опубликовано070781, Бюллетень N9 25 (53) УДК 815. 371/

/372 (088, 8) Дата опубликования описанйя 070781

А.Ф.Мороз, H.Ã.Анциферова, H.C.Áðîäèíîâà и С.А.Радкевич (7?) Авторы изобретения

Ордена Трудового Красного Знамени научно исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.почетного академика Н.Ф.Гамалеи (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УБИТОЙ СИНЕГНОЙНОЙ

ПОЛИВАЛЕНТНОЙ КОРПУСКУЛЯРНОЙ ВАКЦИНЫ

Изобретение относится к области медицинской промышленности, а именно, к производству вакцинных препара тов.

Известен способ получения убитой синегнойной поливалентной корпускулярной вакцины путем раздельного выращивания вакцинных штаммов Pseudomonep .erug (nose с последующим их смешением (1„. .

Однако вакцина, полученная йэвестным способом, не обладает высоким протективным свойством и срок длительности создаваемого иммунитета не превышает 2-3 недель. 15

Цель изобретения — повышение протективных свойств и длительности создаваемого иммунитета.

Это достигается тем, что выращивают штайн Pseudomonas авг uginosa 20

Р 1311, 9 1312, 9 1313, Р 1314, Р 1315, Р 1316 и Р 1317.

Способ осуществляют следующим образом.

Вакцинные штамма Ps.aerug!поза 25 выращивают раздельно на различных плотных питательных средах (мясопептонном агаре, агаре Хоттингера, синтетических средах с казеиновым пептоном и др.) в течение 18-24 ч.„ 30

Из этих культур приготавливают суспенэии, содержащие 1 млрд. микробных тел в 1 мп (по оптическому стандарту мутности ЦГНКИ или спектрофотометру СФ-40) в физиологическом растворе или бактерициднбй жидкости Гор- гиева (эктерицид). Затем для приготовления поливалентной вакцины суспенэии всех 7 штаммов,смешивают в равных объемах. В случае приготовления вакцины на Физиологическом растворе в смесь добавляют консервант (0,053 мертиолята или 0,5% формалина). Полученную таким образом вакцину выдерживают в термостате при 37 С в течение 18-24-ч,после чего производят контроль на стерильйость, апирогенность,апатогенность для экспериментальных животных (белых мышей) и иммуногенность.

Полученная таким способом корпускулярная убитая поливалентная синегнойная вакцина должна обладать следующими медико-биологическими свойствами: стерильностью>апирогенностью, атоксичностью для белых мышей при введении 0,5 мл подкожно, иммуногенностью, кеторая выражается в 801003 выживаемости животных (зараженных 0 штаммов, входящих в состав

400

704183 вакцины через 5-7 суток после вакцинации.

Для проверки иммуногенных свойств вакцину вводят белым мышам весом

18-20 r подкожно однократно и двукратно с недельным интервалом в дозе 0,5 мл с последующей проверкой ее

)прот ективной активности, Заражение животных осуществляют через 7 суток после последней вакцинации: для этой цели каждый из штаммов синегнойной палочки, входящих в состав вакцины, а также штаммы серотипов,011 и 09 вводятся животным внутрибрюшинно в дозе 0,5 10 микробных тел/мл, вызывающей 100% гибель,(ЕО„О ) контрольных животных (без. предварительной вакци- 15 нации).

Для проверки длительности защитного эффекта вакцины иммунизированных животных инфицируют культурами синегнойной палочки через различные сроки щ последней вакцинации: на 7, 21 и 56 сутки.

Эффект защитного действия вакцины оцениващт на основании вычисления процента выживших иммунизированных животных после заражения гомологичными штаммами синегнойной палочки.

Результаты экспериментального изу- чения полученной поливалентной вакцины, приготовленной из 7 штаммов синегнойной палочки, показали, что при однократной иммунизации животных с последукщим заражением гомологичными штаммами синегнойной палочки (О„а ) наблюдается в отношении большинства культур достаточно высокий защитный эффект уже на седьмые сутки после. иммунизации (табл. 1). Так, для штаммов Ps. aerugi nosa -9- 1314 и 1317 защита от гибели имеет место в 100% случаев, для штаммов 9t) 1312 и 1315 ф} от 80% до 100%, для штамма Р 1316

80% и только в отношении штамма

9 1311 наблюдается низкий защитный эффект (0-20%). Высокое защитное действие вакцины проявлялось в отношении большинства штаммов Ps,àåruginosa (99 1313, 1314, 1315," 1316 и

1317) и через 21 день после иммунизации и через 8 недель, В отношении штамма Ps. aeruginosa Р 1312 наблюда- ® лось снижение защитного эффекта через 21 день и 8 недель после вакцина-, ции им животных.

Наряду с однократной проводилась и двукратная подкожная иммуниза ция животных. После двукратной вак- О5 цинации мышей с последующим заражением теми же дозами тест-культур синегнойной палочки и по той же схеме защитный эффект вакцины был в целом сходен с полученным после що однократной вакцинации животных.

Имели место незначительные колебания процента выживших животных после заражения и только в отношении штамма Ps aeruginosa Р 1312 процент защиты животных от гибели сохранялся на достаточно высоком уровне, особенно через 8 недель после вакцинации. Если при однократной иммунизации через S,недель выживаемость опытных животных составляла 0-20%, то после двукратной иммунизации с интервалом в 7 дней выживало 60-80% животных (табл. 2).

Параллельно с экспериментами по выявлению выживаемости животных проводилось излучение сроков образования агглютинирующих антител, определяемых по реакции агглютинации с формалиниэированными штаммамн Ps. ae rug i nosà входящими в состав вакцины. Как при двукратной, так и при однократной иммунизации агглютинины определялись у вакцинированных незараженных жинотных в различные сроки после иммунизации (1, 7, 14, 21, 56 сутки) и у животных, выживших после заражеI ния (1, 2, 3 сутки)

При однократ ной подкожной иммуниз ации в сыворотках мышей наблюдается . увеличение титра агглютининов к синегнойной палочке уже к 7 дню после введения вакцины (в отношении всех

7 штаммов). Иная картина наблюдается в отношении штамма Ps аеr ug i nosa

Р 1312, нарастание агглвтинирунших антител к которому прои, сходит уже на первые сутки по сравнению с уровнем естественных антител у чистых невакцинированных животных. На 14 день после иммунизации наибольший титр агглютининов наблюдается к штамму

Ps.aeruginosa Р 1313 (1:640) титры антител к остальным шести штаммам колеблются к пределах 1:40-1: 160.

Самые высокие уровни титров специфических антител обнаруживаются на

21 сутки после иммунизации (титр антител к штаммам Ps,aeruginosa

t) 1313 и 1317 составлял 1:1280, к штамму 9 1311 - 1:640, к штаммам

99 1315 и 1316 — 1:320, в отношении штаммов 99 1312 и 1314 — не превышал

1:160) В дальнейшем наблюдается снижение уровня специфических антител: к 8 неделям у штаммов 99 1314, 1311, 1315, 1316 они сохранялись на довольно высоком уровне (1:160 — 1:320), тогда как для штаммов РР 1312, 1313 и 1317 наблюдается их снижение почти до исходного уровня (1:40-1:20)

При двукратной подкожной иммунизации нарастание титра агглютинирующих антител было идентичным, с той лишь разницей что, начиная с первого дня после последней вакцинации, уровень, антител ко всем семи штаммам Ps ° aeruginosa значительно. превышал уровень после однократной вакцинации, т.е. титры агглютининов нарастали значительно быстрее и наблюдался более высокий уровень антител. Так, уже на первые сутки после последней иммунизации титр агглютининов к

704183 штаммам Ps. ae rug i nosa РР 1313, 1312,!

1311, 1317 и 1314, 1315 и 1316 составил

1:640, 1: 320, 1; 160 и 1: 80 соответственно. В дальнейшем происходило увеличение титров антител и к 21 суткам наивысший уровень агглютининов к четырем штаммам — 99 1311, 1312, 5

1313 и 1314 — достигал 1:1280, к трем остальным 1: 640. К восьмой неделе после вакцинации происходило незначительное снижение уровня антител у штаммов Ps .ae rug i nosa 99 1311., 1314, 1315 и 1316, тогда как в отношении штаммов И, 1312, 1313 и 1317 наблюдалось снижение уровня специфических антител до 1:40.

При изучении титров агглютининов 15 иммунизированных животных после заражения на 1, 2, 3 сутки было обнаружено, что инфицирование вакцинированных мышей стимулирует увеличение тит20

Таблица 1

Контроль

Опыт

Мтаммы, и с пользо ванные для за ражейия ротип Число живо ных ичество % выживае ивших мости отных

20

1311

100

20

1312

18

1313

100

20

1314

100

20

1315

100

20

1316

100

017

1317

20

1323

20

011

1320. Таблица 2

Контроль

Опыт исло животных оличество % выживае количество %выживабыживших мости . выживших мости кивотных животных

30

10

1311

100

30

1312

93,3

03

1313

100

30

1314

100

30

1315

Штампы, исполь Серотип зованные для заражения ра антител уже на первые сутки с последукщим их нарастанием.

Приготовленная таким образом синегнойная поливалетная корпуснулярная вакцина обеспечивает хороший протективный иммунитет и наблюдается длитель" ное его сохранение в ьтношении гомологичных штаммов при подкожной иммунизациии живстных. Кратность вакцинации не имеет решакщего значения для проявления протективного эффекта, но, оказывает влияние на уровень специфических антител.

Вакцина может быть использована для иммунопрофилактики раневых и ожоговых инфекций,,а также в качестве иммунизирующего препарата для получения гипериммунной антисинегнойной плазмы, предназначенной для иммуHoтерапии болЬных с синегнойным сепсисом. количество % выживаеыживших мости ивотных

1 . I

Продолжение табл. 2

Опыт

Штаьвеа,исполь зованные для заражения

Серотип

Число живот ных

Контроль количество % выживаевыживших мости животных количество Ъ выживае выживших мости животных

1316

30

28 93,3

30 100

15 50

1317

017

30

1323

1320

011

50, «4» Ю М у(°

Формула изобретенияI

Составитель С. Малютина

Редактор Т. Кслодцева Техред 3...Чужик Корректор Н. Швыдкая

Заказ 4557/16 Тираж 528 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ получения убитой синегной- 2О ной поливалентной корпускулярной вакцины путем раздельного выращивания вакцинных штаммов Pseudonloпаs аегнgtпоеа с последук цим их "смешением, о т л и ч а ю щ н и с я тем, что, с целью повьыения IIpoTekTHBHHx свойств

1. и длительности создаваемого иммунитета, выращивают штаммы Pseudomonas аегнд!поза МР 1311, 1312, 1313, 1314, 1315» 1316, 1317.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Латент ФРГ В 1667908, кл. 30 h 6, опублик. 19 70 ..Э