Патент 707320

Способ получения низина

 

4196AAQTi9gg Ц Д

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТИЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Реслублик (ii) 707320 (61) Дополнительное к авт. саид-ву— (22) Заявлено 050678 (21) 2628122/28-13 (51)M. Кл.3

С 12 D 9/22 с присоединением заявки ¹â€”

Государственный комнтет

СССР по делам изобретеннй н открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 30.11.81. Бюллетень № 44

Дата опубликования описания 30.1181

I (53) ПЖ615. 779. .925 (088.8) М.Н. Силева, N.Н. Литвинова, Л.Н. Воронина, Г.И. Буленков, Г.Д. Страхова и М.М. Возлинский (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НИЗИНА

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно производству низина, используемого в пищевой промышленности.

Известен способ полу чения низина путем выращивания продуцента в питательной среде на основе молочной сыворотки с последующей экстракцией целевого продукта из микробных клеток, отделением экстракта, его концентрированием, высаливанием, фильтрацией и высушиванием (11.

Однако препарат, полученный известным способом, нестабилен при хранении.

Цель изобретения — стабилизация активности низина в процессе хране-. ния.

Это достигается тем, что продуцент выращивают на среде, содержащей молОчную сыворотку и экстракт кормовых дрожжей, выращенных на растительных отходах, очищенную культуральную жидкость концентрируют с сорбиталем С ,20, фильтрацию осуществляют через фильтр-перлит, полученную пасту нйзин-перлит растворяют в 0,02 н.растворе НС8, затем проводят повторную фильтрацию и концентрат высушивают в присутствии хлористого натрия напылением на казеинат натрия при их соотношении 1-2: 2,3-1,3 °

Кроме того, выращивание ведут при рН 6,8-7,0 °, A с целью утилизации отходов ферментации, осадок после отделения культуральной жидкости подвергают гидролизу пектофоэтидином П10Х или амилоризином и вводят в состав питательной среды в качестве источника азота при повторной ферментации..

Способ осуществляют следующим образом.

Приготавливают экстракт кормовых дрожжей. Для этого 250 г сухих кормовых дрожжей заливают 2,5 л теплой во- допроводной воды, настаивают 2 ч, кипятят на слабом огне в течение 15 мин, фильтруют и стерилизуют в автоклаве при 0;7 атм 20 мин. Добавляют в среду

18-20% экстракта. до содержания в среде 60-70 мг/% аминного азота.

Гидролизат отходов готовят следую- щим образом.

Отходы (биомасса, молочные белки . с перлитом) получают фильтрацией через перлит культуральной жидкости предыдущей .ферментации, выход с 20 л составляет 500-600 г. Отходы разбавляют водопроводной водой в соотношеЙ йжжммьь

3 - — : . 707320

4 нни 1:5, тщательно перемешивают до подвергают вакуум-Фильтрации и прооднородной массы и подогревают до рывке. Объем полученного жидкого

45 С лучаемый РН 2,5 -3, О соответ- концентрата 400 мл, активность ствует оптимуму действия пектофоэти- 442) мкг/мл, общая активность 1,77 дина П10Х; в случае амилоризина оп- II10 Mar, выход от пены 96% или 90 7% ти м Н 4 5 7 О му р, —,О. Фермент добавляют от Фильтрата, содержание сухих ве-

1 и и, 1 в количестве 0,20-0,25% к гидролизуе- ществ 3%. мому объему (ферменты преггварительно Пример 2. К 18 л молочной растворяют в небольшом объеме воды). сыворотки добавляют 2,1 л ферментивГидролиз проводят в течение 24-30 ч ного гйдролизата отходов полученных о

I при 45 С с антисептиком хлороформом — о У азанным способом, среду стерилизуют, 5 мл/л. По окончании гидролиза смесь охлаждают до 28-30ОС, РН доводят до кипятят 20-30 мин до исчезновения эа- 6,8-7,0 и засевают 3-5% инокулята

IIаха. хлороформаг твердую фазу удаляют 18-20.часового возраста str. gactis. фильтфацйей или центрифугированием; Культивируют при постоянной asioгидролиэат стерелизуют при 0,7 атм матически регулируемой кислотности

20 мин. Добавляют в среду 10-12% 5 среды в пределах 6,8-7,0 путем ввегидролизата до содержания s среде дения 40% щелочи (NaOH или KOH).

60-70 мг/% аминного азота. Ферментацию заканчивают в момент заП р и м- е р 1. К 18 л молочной сы- медления сдвига кислотности, автомароворотки добавляют 4 л (20%.) зкст- . тически отмечаемого прибором. длиракта кормовых дрожжей, полученного 2О тельность ферментации 12-16 ч. Актив>писанным способом. Среду стерилизуют ность к. ж. 150 мкг ф/мл, общая ак.— при 120 С. 20 мин, охлаждают до тивность 3 10 мкг. После фильтрации

28-30 С, доводят РН до 6,8-7,0, за- через фильтро-перлит и промывки осад, севают 3-5% инокулята 18-20 часбвого ка водой с РН 2,3 объем фильтрата равозраста низинообразующего штамма 25 вен 20 л с активностью 145 мкг Дlмл., Strv6actis. Культивируют при 28-30 С общая активность фильтрата 2,9> с постоянно автоматически регулируе- «106мкг, выход активности от куль.мой кислотностью среды в пределах РЯ турной жидкости 97% ° Одноступенчатым

6,8-7,0 введением 40% щелочи (НаОН вспениванием получают 2 л пенного или КОН). Ферментацию заканчивают в продукта с 140 мкг я/мл активностьюг момент замедления сдвига кислотности, ЗО. общая активность пены 2,80- 10 мкгд.. автоматически регистрируемого прибо-; --"="После высаливания сухим НаСС прово ром. длйтельность ферментации 12-16ч. - дят Фильтрацию через перлит; раствоАктивность . культуральной жидкости . Ряют и фильтруют срезанную пасту нидостигает 4-6 тысяч ед/мл,. или зина с перлитом, получаютуобъем

100-150 мкг/мл. . З5 концентрата К в количестве 400 мл ментациH nH c azTHHHOCTIIO 2,78 10 мкг чтс

".табельной средой--Служит молочйая сы- составляет 96% от фильтрата. Содерворотка с 10-12% гидролиэата отходов жанне суких.веществ 2,5%. учитываем (от 1-й и каждой последующей фермен- потери при высушивании (8-10%), т.е. тации), полученного укаэанным спосо- 4() 2,78 "10 — 0,28 10 = 2,50 10 . бом. Культуральную жидкость 1,2 и всех последующих ферментаций подвер- . Для получения .количества порошка гают переработке по операциям. Так 2,50" lp :20 (стандартная активность культуральную жидкость, содержащую

100 мкг/мл низина (общая активность них 10 г падает на сУхой вес (2,5%)

2 ° 106 мкг) закисляют 18% НС до рН 44 125 r — 10 r = =115 r. Общего напол2,2-2,5 и прогревают в течение нителя должно быть задано 115 г, т.е.

3-5 мин до 95»1000С охлаждают до . 57,2 r NaC6 и столько"же казеината

500С и фильтруют через перлит. 1вер- натРия (115:2=57,2), МаСС добавляют:

pyIo Фазу (отходы) направляют на гид- в 400 мл концентрата низина — Kg H ролиз. Объем фильтрата 20 л, актив- 30 напылЯют на 57,2 г белкового в псевность 97 мкг/мл (общая активность . . Доожиженном слое. СУхого пРепаРата

94 .106 г), „„ 97% П,л, нный получают 125 г с активностью 20 мкг, Фильтрат с активностью 97 мкг/мл () в мг сУхого вещества, что составляподвергают вспениванию при РН 4,р-4 5 ет 86% от активности фильтрата.

1 с сорбиталем С-20 0,03%. Объем пен- В таблице представлена активность ного"продукта 2 л, активность препарата низина при хранении в услб920,1 мкг/мл, общая активность виях холодильника (4 — 8 с) в течение

1,84 lp 6 мкг; выход активности в пе- года. (Определена методом диффузии в иу от фильтрата 95%;----- --- - ---- -= :- - агар с тест-культурой Bacvcoagufans

Из пенного продукта низин ЙЫсали- 4() Р 15. Погрешность метода 10-12%). вают сухой НаС6 (25%), РН 2,2-2,5.=

Высоленный антибиотик подвергают ва- Предлагаемый способ позволяет искуум-фильтрации .через перлит. Отде- пользовать недорогие и недефицитные йенную пасту низин-перлйт раствб- ферменты, используемая, среда дешевле,-"-. ряют в 0,02 и.. растворе НС8, и "снова д известной в 5-6 раз, получаемый пре707320

99 образца

Активность, ед/мг сухого препарата

Сроки хранения в месяцах

0 - .3 6 9 12

1 804+80 800+64 792+52 784+56 800+76

2 820+5 2 804+56 792+84 820+72 820+6 8

3 1040+76 976+76 936+96 984+88 984+84

Формула изобретения

СоСтавитель С. Малютина

Техред М.Рейвес Корректор М. Демчик

Редактор Л. Письман

Заказ 10626/1 Тираж 531 Подписное

BHHHIIH Государственного комитета СССР

-по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 й», Филиал ППП Патент r. Ужгород, ул. Проектная, 4. парат обладает стандартной активностью s 20 мкг/мл сухого вещества и

1. Способ получения низина путем выращивания продуцента в питательной среде на основе молочной сыворотки, с последующей экстракцией целевого продукта из микробных клеток, отделением экстракта, его концентрированием,высаливанием, фильтрацией и высушиванием, отличающийся тем, что, с целью стабилизации активности низина в процессе хранения, продуцент выращивают на среде,-содержащей молочную сыворотку и экстракт кормовых дрожжей, выращенных на рас- 30 тительных отходах, очищенную культуральную жидкость концентрируют с сор.биталем С-20, фильтрацию осуществляют через фильтр-перлит, полученную пасту низин-перлит растворяют в 0,02 н. 35 растворе HCg,çàòåì проводят повторстабилен при хранении в течение 2 нет. ную фильтрацию и концентрат высуши- " вают в присутствии хлористого натрия напылением на каэеинат натрия при их соотношении 1-2: 2,3-1,3.

2. Способ по п. l, о т л и ч а ю- . шийся тем, что выращивание ведут, при рН.6,8-7,0.

3. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью утилиза" ции отходов ферментации, осадок после отделенйя культурййййо»й жидкости подвергают гидролиэу пектофоэтндйном

П10Х или амилоризином и вводят в со- став питательной среды в качестве источника азота при повторной фермеитации.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент СССР Р 427516 кл С 12 D 9/12 1976