Питательная среда для выращивания продуцентов литических ферментов

Питательная среда для выращивания продуцентов литических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Сани Соеетскнк

Сонналнстнческнх

Реслублнк

o n и с А -Й И еИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву-(22) Заявлено 25.09.78 (21) 2667837/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опуоликовано 23.12.81. Бюллетень № 47 (45) Дата опубликования описания 23.12.81. (51) М. Кл.

С 12 D 13/10

Гасударственный ком нтет аа делам нзоаретеннй н аткрытнй (53) УДК 577.15.07 (088.8) (72) Авторы изобретения

А, П. Шпокене, М. П. Гуреева, В. Д. Кузнецов, Ю. Ф. Василяускас и А. П. У>ккуренас

Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии и Институт микробио,погии

АН СССР (71) Заявители (54) ПИТАТЕЛЪНАЯ СРЕДА ДЛЯ

ВЫРАЩИВАНИЯ ПРОДУЦЕНТОВ ЛИТИЧЕСКИХ

ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к питательным средам для выращивания продуцентов литических ферментов.

Известна питательная среда для выращивания продуцента литических ферментов Actinomyces ce))u)osae, содер>кащая продукты пищевого сырья: глюкозу, крахмал, пекарские дрожжи (Ц.

Недостатком указанной питательной среды является длительность культивирования продуцеита на используемой среде (четверо суток), а также использование продуктов пищевого сырья.

Наиболее близкой по своей технической сущности к прсдложенной является питательная среда для выращивания Act, cincгозиз. За, содержащая в своем составе соевую муку, пекарские дрожжи, дрожжевой автолизат и минеральные компоненты: калий фосфорнокислый двузамегценный, магний сернокислый, хлористый аммоний (2).

Недостатком данной срсды является наличие в ес составе пищевого сырья: соевой луки, пекарских дрожжей. Она мало пригодна для выращивания продуцсятов, литических ферментов в производственных масштабах, где требуются значительныс количества сырья.

Цель изобретения — спи>кение себестоимостп и повышение активности лнтпчсских ферментов.

Эта цель достигастся тем, что питательная среда, включающая магний сернокислый и воду, дополнительно содержит белково-витаминньш концентрат (БВК) . xëoðt4стый натрий, аммоний сериокислый и хлористый калий при следующих соотношениях компонентов, всс. %:

10 Белково-витаминный концентрат (БВК) 1,00 — 1,10

Магний сернокислый 0,08 — 0,09

Хлористый натрий 0,25 — 0,30

Аммоний ccpHQKHcлый 0,16 — 0,18

)я Калий хлористым 0,16 — 0,17

Вода Остальное

П р и м с р 1. Приготовление гштатсльной среды для глубинного культивирования продуцсптов литичсскпх фсрмснтов в колер бах.

В 500 мл дистиллированной воды при постоянном псрсмешивании последовательно растворяют 0,8 г kgSO; 7НоО; 2,5 г.

КаС); 1,6 r (ХН4) ЬО4, 1,6 г КС). Затем в

25 водный раствор солей добавля1от )0,0 г

БВК,, хорошо перемешивают, обп ий объем доводят до 1000 мл. В среде устанавливают рН 7,8 при помощи 2%-ного раствора едкого патра, разливают в качалочныс колбы зу объемом 750 мг по 50 мл среды в ка>кдую

707124

1,00 — 1,10

0,08 — 0,09

0,25 — 0,30

0,16 — 0,18

0,16 — 0,17

Остальное

1. Авторское № 358360, кл. С

50 2. Авторское

¹ 439512, кл. С тип).

Изд. № 520

Заказ 8758

Т раж 530

Подписное

Загорская типография Упрполиграфиздата Л!особлисполкома о и стерилизуют прп 1,3 атм 40 мип. Охлажденную питательную среду засевают водной суспензией семисуточной культуры Ас1.

rutgersensis ¹ 88, выращенной при 28 С на стандартной кукурузной среде Х 2 следующего состава, %: кукурузный экстракт 1,0: глюкоза 0,5; аммоний сернокислый 0,35; натрий хлористый 0,5; крахмал 2,0. Споры смывают с косяка 15 мл стерильной дистиллированной воды и в каждую колбу вносят по 3 мл споровой суспснзии (10з спор в одном мл). Выращивани- культуры Act.

rutgerscnsis ¹ 88 в колбах проводят на качалках со скоростью вращения 220 об/мин при 28 С в течение 24 — 30 ч.

После культивирования мицелий остатки среды отделяют цснтрифугированисм при 3000 об/мин 15 мин. В надосадощой жидкости определяют литическую активность, которая составляет 275 ед/мл.

С литра культуральной жидкости с мицелием Act. rutgersensis № 88 получается

19 г фермснтного препарата с лизирующей активностью 22000 сд/г.

Лизирующую активность опрсделяют турбидиметрпчсскпм методом. К 1 мл субстрата (суспснзии дрожжей Candida) добавляют 1 мл трас-буфера 0,2 М при pI-1 7,0 ——

7,2 и 2 мл культуральной жидкости илп ферментного раствора, разведенного так, чтобы за 1 ч инкубации при 40 С оптическая плотность реакционной смеси снизилась на 25 — 40%. Измеряют оптическую плотность реакционной смеси до и после инкубации при длине волны 537 мм в кювете с оптическим сечением 1 см. Расчет проводят по формуле % лизиса субстрата = . 100, а где а — начальная экстинкция;

b — конечна я экстивкция.

Перечисление % лизиса субстрата па единицы активности HB 1 мл культуральной жидкости: лизирующая активность =

G !> лизиса . разведепие — — сд/мл, D где D — количество ферментного раствора в реакционной смеси.

Пример 2. Приготовление питательной среды для культивирования продуцентов литических ферментов в 20-литровом лабораторном ферментере «Биолафит».

В 5 л водопроводной воды при псрсмсшивании последовательно растворяют 8,0;

rV!gSO4 ° 7НЗО; 25 Г iUaC1; 16 Г (NH4) з X

Х SO4, 16 г КС1, Затем в водный раствор солей добавляют 100 r БВК, хорошо псрсмешивают, общий объем среды доводят до

10 л водопроводной водой. В среде устанавлпвают рН 7,8 прп помощи 20%-ного раствора едкого патра. Стерилизуют среду при 1,3 атм. 1 ч. Стерильную питательную среду охлаждают до 30 С и засевают 24-х

5 часовой глубинной культурой Act. rutgerscnsis № 88 в количестве 1,5% от об.ьема среды, выращенной по способу, описанному в примере 1, Выращивание культуры в лабораторном ферментере ведут в течение

24 ч при 28"С перемешивают постоянно (250 oo/Mèí), расход воздуха 5 — 6 л за

1 мин в течение 18 ч культивирования, затем 8 — 10 л за 1 мин. Активность лизирующих ферментов культуральной жидкости

15 при выращивании Act. rutgcrsensis № 88 в лабораторном фермсптерс составляет

265 ед/мин.

На предлагаемой среде штамм Act.

rutgersensis № 88 за 24 — 30 ч культивиро20 вания накапливает литичсские ферменты культуральпой жидкости с активностью на

25", большей (250 — 275 сд/мл), чем на питательной среде-прототипе (200 — 225) .

Стоимость 1 м предлагаемой среды для

25 культивирования продуцента литичсских фсрментов составляет 6 руб, а стоимость

1 м известной срсды — 9 руб. По предварительным подсчетам годовая экономическая эффективность при использовании предлагаемой среды в производстве дрожжелитических ферMåHTHûõ препаратов составит свыше 100000 руб.

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания продуцентов литических ферментов, включающая магний сернокислый и воду, отл и ч а ю:ц а я с я тем, что, с целью снижения себестоимости и повышения активности литических ферментов, она дополнительно содержит белково-витаминный концентрат, хлористый натрий, аммоний сернокислый и хлористый калий при следующих соотноше45 ниях компонентов, % вес.:

Белково-витаминный концентрат

Магний сср окислый

50 Хлористый натрий

Аммоний сернокислый

Хлористый калий

Вода

Источники информации, принятые во внимание при экспсртпзе свидетельство СССР

12 D 13/00, 1972. свидетельство СССР

12 1.> 13/10, 1975 (прото