Способ получения питательной среды для выращивания бактерий тифо-паратифозной группы

Способ получения питательной среды для выращивания бактерий тифо-паратифозной группы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

3 .

tttt 707326

Cotoa Советскнх Соцналнстйчесних

Фесиубвнк и АЮ ОРСК©МУ С1 МЛЬСТВ3 г (бт) Дополнительное к авт. свид-ву(51)м. Кл З

С 12 К 1/06 (22) Заявлено200778 {21) 2667360/28-13 с присоединением заявки Ме есударствеянмй комитет

СССР

«е дмам изобретен«6 я открыт«1 .. (23) ПриорйтетОпубликовано070981. Бюллетень Hе 33 (53) УДК 576. 8. .093.33(088.8) Дата опубликования описания 07.0981

Р2):Авторь изобретения!

H.H; Синяшин, A.À. Абидон и С.С. Хаха ова Я Д Т -::

Ташкентский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (У 3 ) Заявитель.

{ 54 ) СНОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ ПЩГАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ БАКТЕРИЙ ГИФОПАРАТИФОЗНОЙ ГРУППЫ

Изобретение относится к микробиологической промьхаленности, а .именно:

; к полученив питательной среды для

:ПРОНЭВОДСтэа бактернальных препара- тов.

Иэвестен способ получения пита- тельной среды для выращивания бактерий тнфо паратифоэной группы путем гидралиэа исходного сырья Фериентами .:.псджелудочиой железы с последующей. очисткой целевого продукта (1 .

Однако известная среда сложна по составу, так как требует включейия дополнительных обргатителей; наутример дрожжевого аутолизата, вы..ход биомассы tt средйем составляет (по.оптическому стандарту мутности)

35."Млрд. клеток/мп.

Белью изобретения является:упрощение споСоба и повышение выхода био массы

Эта цель достигается тем;.что: в качестве исходного сырья используют . пбджелудочиую.жeлeэy, фермен1ативный гидролиэ ведут при температуре 4042О С, затем отделяют надосадочную жидкость от осадка, далее осадок повторно подвергают ферментативному гид.ролизу,:отделяют надосадочную жидкость, объединяют ее с ранее получен- 30

2 йой надосадочной жидкостью, и смесь гидролиэатов очищают раствором соли алюминия при рН 4,2-4,3.

Способ осуществляют, следующим образом.

Поджелудочную железу (1 кг) осво бождают от жира и пленок, измельчают на мясорубке, заливают 3,5 л дис- тиллнрованной воды, устанавливают рН 3,9 — 4,0, и выдержизают в течение суток,при,комнатной температуре (18-20 ).За .это время основная масса ферментов поджелудочной железы экстрагируется в жидкую фазу. Субст-. рат центрифугируют или сепарируют.

В центрифугат добавляют 5% раствор соляной кислоты и устанавливают рН

2,9-3,0 (температура при этом 10-15 ),.

Осадок ресуспендируют.в 1 л дистиллированной воды, устанавливают рН 8, 1-8,2 . и ведут аутолиз тканей поджелудочной железы при 40-42 С, выравнивая каждые 15 мин реакцию среды до рН 8,1«8,2 5% раствором ецкого натрйя. Через 45:мин аутоли- за ферментат кйпятят 40 мин.и центрифугируют. Осадок 2 ресуспендируют в 300 мп дистиллированной воды, соединяют с комплексом ферментов, экстрагированных из поджелудочной желеЭ 707326 с

Таблица 1

Пирогенность питательных сред и густота микробной суспензии, полученной на контрольной и опытной средах при выращивании бактерий в реакторе с аэрацией

Извест- Пиро- 35 35 30 30 40 ная . генна а

Предла- Не пи гаемая " рогенна

50 60 . 50 46

50 зы (центрифугат 1), устанавливают рН - 8,1-8,2 и ведут протеолиэ

45 мин при 40-.42 . По завершению протеолиза ферментат центрифугируют, освет н::ый субстрат соединяют с центри фугатом 2, перемешивают и добавляют

1 М раствор хлористого алюминия до рН .- 4,2-4,3. Смесь оставляют для формирования осадка, который затем отделяют на центрифуге и отбрасывают. В филътрате устанавливают рН вЂ” 7,2-, 7,4 5% .раствором едкого натрия, кипятят 5-8 мин, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через фильтро.вальную бумагу и стерилизуют в автоклаве при 105 30 мин.

Полученную питательную среду ис.польэуют для культивирования бакте,рий кишечной группы.

В питательной .среде:

Общий азот, мгЪ . 480-500

Аминный азот, мгЪ 150-185 20

Зольность, %- 0,18-0,2

Редуцирующие вещества, мгЪ 100-120 рН 6, 9-7, 1

Для получения сравнительных дан- 25 ннх в полупроизводственных условиях культивировали бактерии кишечной группы (тиф и парафит А и В) на производственной среде из казеинового гидролизата с дрожжевым аутолизатом и опытной, состоящей из ферментата к шт. 1691 — свежевыделенный. йоджелудочной железы. Качество питательных сред оценивали по ряду биологических показателей. Основные показ ател и биоло гиче ских свой ст в анти гейов, полученных на новой питательной среде, представлены в табл. 1.

Полученные предлагаеьые среды не пирогенны. При культивировании на йих бактерий кишечной группы достигается высокая урожайность биомассы.

Приготовление из субнатанта культур известным производственным методом антигенные препараты имеют преимущества перед контролем: они малотоксичны и вйсокоиммуногенны (данные представлены в табл.2).

Токсичность опытных антигенов в

10 раз ниже, а иммуногенность во столько же раз выше, чем контрольных.

Использование предлагаемого спо- соба получеиия питательной среды для выращивания бактерий кишечной группы позволяет получать беэбалластные непирогенные питательные субстраты из одного вида природного сырья, что не только удешевляет, но и способствует получению бакпрепаратов с более выраженными полезными свойствами (высокая иммуногенность и низкая токсичность).

70732ф

Таблица 2

Иммуногенность и токсичность антигенов тифозных и паратифозных бактерий при культивировании микроорганизмов на различных питательных средах .(по 10 сериям опытов) ТИФ шт. 4446. Известная 0,002

0,3

4000

Предлагаемая

40000

О, 0002

2,3

Паратиф. В шт. 50506

Известная 0,053

0,4

3000

Предлагаемая

0,025

2 25

40000.Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Т. Глазова Техред М. Рейвес

° é В

Заказ 6 722/6 2 Тираж 528 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб. д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. ужГорОд, ул. Проектная, 4

Корректор М-. Лемчик

Способ получения питательной среды @ для выращивания бактерий тифо-пара тифозной группы путем гидролиза исходного сырья ферментами поджелудочной железы с послЕдующей очисткой целевого продукта, о т л и ч а ю -. у шийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения выхода биомассы, в качестве исходного сырья йспользуют поджелудочную железу, ферментативный гидролиз ведут при температуре 40-42 С, затем отделяют надосадочиую жидкость от осадка, далее осадок повторно подвергают ферментативному гидролиэу, отделяют надосадочную жидкость, объединяют ее с ранее полученной надосадочной жидкостью, и смесь гидролизатов очищают раствором соли алюминия при рН 4,24,3.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М.О. Биргера, М., 1973, с. 51.