Способ определения способности микроорганизмов использовать различные углеводные субстраты

Способ определения способности микроорганизмов использовать различные углеводные субстраты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

кюсж хe » ":

ЗВтеетио-";ex : :"-. -:: .кое аи .:и "Л

Союз Советских

Социалистических

Республик

О П -И" Е

ИЗОБРЕТЕН Ия

<" 707963

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свкд-ву (22) Заявлеко22.03.78 (21) 2601051/28-13 с присоединением заявки М (51)M. Кл.

С 12 К 1/04

Веудерстеенньй комитет

СССР (23) Приоритет но делам изобретений н открытий

0публиковако р5.0 1.8р. Бюллетень,% 1

Дата опубликования описания 09.0 1.80 (53) УДК 576.8..093(088.8) (72) Автори изобретения

В. М Никитин и Ф. И. Георгица (71) заявители (54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПОСОБНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ РАЗЛИЧНЫЕ УГЛЕВОДНЫЕ СУБСТРАТЫ

11редложенное изобретение относится к микробиологии и предназначено для быстрого и экономичного определения ферментативных свойств микроорганизмов.

Известны способы определения ферменБ тативных свойств микробов, в частности, их способности усваивать те или иные углеводы, предусматривающие использование питательных сред с испытуемыми углеводными субстратами и кислотно-основной индикатор 1 1.

Общим недостатком конкретных методических приемов, используемых при реализации указанных способов, является их недостаточная экономичность, так как они относительно сложны и применяются с. использованием питательных сред, а также характеризуются сравнительно низкой скоростью определения ферментативных свойств микробов (через 18-24 час).

Наиболее близким по своей технической сущности к предложенному являе гся способ идентификации микроорганизмов, который предусматривает использование бумажного диска диаметром чашки Петри из пропитывающей бумаги, который разделен на 6-8 зон. В каждую зону наносят каплю субстрата и индикатора, а затем быстро высушивают (2).

Бу-мажный диск с зонами, пропитанными различными субстратами и индикатором, кладут на поверхность агаровой пластинки, засеянной микробной культурой в чашке Петри и инкубируют 24 час при 37 С.

Способ идентификации микроорганизмов основан на том, что субстрат и индикатор из импрегнированных зон .диффундируют в питательной среде с засеянной микроб ной культурой. Учет результатов ферментации су-бстратов производят по изменению цвета индикатора в этих зонах.

Однако описываемый способ недостаточно экономичен и не позволяет быстро определить ферментативные свойства микробов непосредственно в популяции микробных клеток без использования питатель3 707963 ных сред и стерильных материалов, при- р чем спектр определяемых биохимических ( признаков ограничен 6-8. и

Белью изобретения является повышес ние экономичности и быстроты определе5 ни я.

Поставленная цель достигается тем, что на поверхность бумажного диска наносят гидрофобное покрытие, а субстраты и индикатор размещают в виде точек в количестве 20»36 с последующей их фиксацией водорастворимым,клеем, предпочтительно поливиниловым спиртом. При этом для придания бумажному 1иску гидрофобных свойств применяют силиконовую жидкость или используют бумагу с полимерной пленкой.

Гидрофобное покрытие позволяет использовать микроколичества субстрата и индикатора фиксированными в виде точки клекяцим полимером на поверхности диска.

Тем самым увеличивается количество ис-: пытуемых субстратов, снижается расход ингредиентов, поскольку исключается возможность пропитывания и . диффузии субстрата и индикатора в бумагу и увеличивается скорость разложения микроколи- честв субстрата микробными культурами,. взятыми в высокой концентрации.

На чертеже изображен бумажный диск

1 с гидрофобным покрытием, разделенный на квадратные зоны 2, в которых фиксирован субстратно.:индикаторно-клеющий раствор 3, где Ар-.арабиноза; Га- галактоза; Гл-глюкоза; Дк-декстроза; Кс-ксилоза; Мн-манноза; Рм-рамноза; Рб-рибоза; Фр —; Лк-лактоза,„Мл-мальтоза;. Сх-сахароза; Рф-рафиноза; Кр-крахмал; Гт-глицерит; Дт-дульцит; Ит-инозит;

Кт ксилит; Мт-маннит; Ст-сорбит .

1Для определения ферментативных свойств микробов . готовят бумажный диск с гидрофобным покрытием 1, диаметром чашки Петри, приготовленный из листа бумаги, например, ватман, который силиконируют, например, жидкостью ГКЖ-94, или из бумаги, покрытой полимерной пленкой (материал, комбинированный для упаковки молока и молочных продуктов в пакеты тетраэдальной формы. ОСТ 49112-76). На гидрофобной поверхности диска 1 наносят 20-36 квадратных зон

2 площадью 1,5х1,5 или 1,0х1,0 см. К центру каждой зоны фиксированы в виде точек субстрат и индикатор, которые приклеены водорастворимым клеем.

Пример . Из листа бумаги ват ман вырезают диск диаметром 9-10 см, 4 асчерчивают 20-36 квадратных зон площадью 1,5х1,5 см или 1,0х1,0 см) обозначают сокращенно название субтрата. Затем волосяной кисточкой наносят слой силиконирующей жидкости

ГКЖ-94 и подвергают диски термообработке в сушильном шкафу при 90-100 С в течение 3-5 час.

В фарфоровую ступку берут навеску

10 порошков субстрата (например, моно-, ди-, три-, полисахариды и многоатомные спирты) — 1 r, фенолрота — 0,0 1 поливинилового спирта - 1 r и растворяют до получения мелкодисперсной пудры красного цвета, которую растворяют в 99 мл фосфатного буферного раствора рН 8,0 на водяной бане при 70-100 С и получа ют субстратно-индикаторно-клеющий раствор.

Затем в центр каждой зоны пипеткой с тонко оттянутым. капилляром наносят по 0,01 мл. субстратно-индикаторно-клеющего раствора, подсушивают при 15-45 С до полного высыхания и приклеивания микр окапель.

Готовый диск хранят при 15-25 С в полиэтиленовых мешочках, помещенных в картонные коробки, в течение 1 года (срок наблюдения).

По мере надобности их используют для определения ферментативных свойств микробов. С этой целью в крышку чашки Петри укладывают готовый диск.

З5

На каждый специфический субстрат нанс сят пипеткой по одной капле микробной взвеси концентрацией 5-10 млрд в 1 мл физраствора. Чашку закрывают; тем самьв прижимая по окружности диск и иякубио

40 руют при 37 С. Учет результатов производят через каждые 30 мин до 5-7 час.

При расщеплении субстрата микробной культурой окраска капли переходит из красного цвета в желтый.

Формула изобретения

1. Способ определения способности

Я микроорганизмов использовать различ. ные углеводные субстраты, предусматривающий размещение на бумажном диске субстратов и индикатора, о т л и ч а ив ш и и с я тем, что с целью повышения точ55 . ности упрощения и быстроты бпределейия, на поверхность бумажного диска наносят гидрофобное покрытие, а различные субстраты и индикатор размещают а аиде

20-36 точек с последующим фиксирова5 707963 6 нием их водорастворимым клеем - поли- Источники информации

t в н овым спиртом. виниловым спи том. принятые во внимание при экспертизе

2. Способ по и. 1, о т л и ч à ю - 1. Патент СШЛ М 3830703, шийся тем, что в качестве гидрофоб- кл. 195/103.5 R, опублик., 1974. ного покрытия используют силиконирующую s 2. Патент США Ns 3856628, жидкость или бумагу с полимерной плен- кл. 195/103.5 R, опублик., 1974

K ой б (прототип).

Составитель Н. Паников

Редактор И. Марховская Техред И. Асталощ Корректор В. Синицкая

Заказ 8436/23 Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва Ж-35,.Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4