Питательная среда для выделения грамотрицательных бактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

iii 712031

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительный к патенту— (22) Заявлено 29.04.77 (21) 2478056/28-13 (23) Приоритет — . (32) 03.05.76 (51) М Кл

С 12 К 1 06 (31) 682654

Гвсударственньа комнтет

СССР аа делам нзабратеннй н аткрмтнй (33) США (53) УДК 576,8. .093.1 (088.8) Опубликовано 25.01.80. Бюллетень № 3

Дата опубликования описания 05.02.80

Иностранка

Сандра Фзй Гибсон (США) (72) Автор изобретении

Иностранная фирма жМакдоинелл Дуглас Корпорейшин (США) (71) Заявитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ

ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине для микробиологических анализов.

Известна питательная среда для выделения грамотрицательных бактерий, содержащая источник азота, источник углерода, ингибиторы посторонней микрофлоры и воду 11).

Одн а хо из вест на я п и та тел ьн а я с реда не позволяет избирательно выделять и идентифицировать Citrobacter freundii.

Цель изобретения — избирательное выделение и идентификация Citrobacter freund I I.

Эта цель достигается тем, что среда содержит в качестве источника углерода палатинозу и рамнозу, в качестве ингибиторов посторонней микрофлоры желчные кислоты, бриллиантовый зеленый и 1%-ный раствор

2-окси-2, 4,4 -трихлордифенилоксида при следующем количественном соотношении ком. понентов, г/л:

Источник азота 4,5 — 5,5

Палатиноза 9,0 — 11,0

Рамноза 9,0 — 11,0

Желчные кислоты 9,0 — 1,0

Брнллиантовыи зеленый 0,052 — 0,055

I I

2-0кси-2, 4,4 -трихлордифенилоксид, мл 14,5 — 15,5

Вода Остальное

Кроме того, в качестве источника азота она содержит гндролизат желатины.

Питательная среда содержит различные питательные вещества, включая палантинозу и рамнозу и разные химические ингибиторы, включая 2-окси-2,4-4-трихлордифенилокснд и бриллиантовый зеленый.

Палатинозу и рамнозу применяют в качестве питательных веществ, которые способствуют избирательному стимулированию роста Citrobacter freundii и осаждению солей желчных кислот при кислом значении

4 рН. 2-окси-2, 4,4 -трихлордифеннлокснд применяют в качестве ингибитора роста К1еЬsiella; а повышение количества бриллиантового зеленого используют для ингибирования роста микроорганизмов Aегоmonas, ShiдеИа н т. п. Присутствие Citrobacter freundii определяют по осаждению солей желчных кислот из среды, которое является след7!203! ствием изменения значения рН среды, которое становится кислым за счет кислоты, продуцируется при ферментации организмов

С. freundii палатинозы илн рамнозы.

Исследуемый бульон содержит примерно

22,5 — 27,5 г питательных веще<.тв на 1 л (аминокислоты или углеводы); примерно,9—

ll г/л смеси солей желчных кислот, играющей роль биологического ингибитора для ингибирования роста грамположительных организмов, которые обычно дают положительный результат в опытах на Citrobacter

freundii; примерно 14,5 — 15,5 мл/л — 2-окси-2, 4,4 -трихлордифенилоксида (в I о/о-ном растворе}, которые способствуют ингибированию,роста организма Klebsiella; и при мерно, 52 — 55 мл/л бриллиантового зеленого для ингибирования роста Aегоmonas, Shigel!a и подобных организмов, Питательная часть среды содержит примерно 4,5 — 5,5 г/л гидролизата желатины (предпочтительно 5 г/л}, примерно 9,0—

ll,0 г/л рамнозы (предпочтительно 10 г/л) и примерно 9,0 — 11,0 г/л палатинозы (предпочтительно 10 r/л).

Смесь солей желчных кислот применяют для ингибрирования роста грамположительных организмов, Смесь солей желчных кислот содержит продукты экстракции желчи и представляет собой смесь поверхностноактивных веществ, ингибирующих грамположительные организмы, такие как S. aureus, энтерококки. Другими подходящими поверхностно-активными веществами являются дезоксихолат натрия, холевая кислота, дезоксизолевая кислота и т. п.

Палатиноза представляет собой сахар (источник углерода); применяемый для усиления роста С. freundii. Палатииоза ферментируется С. freundii с получением кислоты, вызывающей изменение значения рН среды.

Когда исходное значение рН (7,5) становится кислым, т. е. при уменьшении этого значения, из раствора выпадает осадок, который изменяет светопередающие свойства раствора. Это изменение наблюдается и записывается автоматическим анализатором микроорганизмов.

Рамноза представляет собой сахар и ферментируется небольшим количеством организмов Citrobac ter freundii, которые не усваивак!т палатннозу. При ферментации рамнозы происходит продуцирование кисло-. ты, и среда выполняет свою функцию так, как это описано для палатинозы.

Гидроокись натрия используют для доведения значения рН среды до 7,5.

2-Окси-2, 4,4 -трихлордифенилоксид играет роль Hfll ибитора роста организмов К!еЬsiel la, которые дают ложную положительную реакцию при обычных опытах определения

Citrobacter freundii.

Концентрация 2-окси-2, 4,4 -трихлордифенилоксида может составлять примерно

14,5 мл 1 /,-ного раствора íà I л среды до 15,5 мл 1 /р-ного раствора на I л среды.

Предпочтительной и наиболее эффективной концентрацией является 1 мл 10/0-ного раствора на 1 л среды. Если концентрация ка кого-либо ингибнтора оказывается слишком низкой, то наблюдается получение с повышенным выходом нежелательных, дающих положительную реакцию, организмов, При слишком высокой концентрации наблюдает13 ся пониженный выход микроорганизмов, дающих положительную реакцию.

Бриллиантовый зеленый применяют в качестве ингибитора для Aегоmonas, Shigella и подобных организмов, Бриллиантовый зеленый применяют в более высоких концен2э трациях по отношению к обычным, и эти концентрации могут составлять величину в интервале от 52 до 55 мг/л среды, Предпочтительно использовать 53,2 мг/л среды.

Пример.

Для получения двухкратного количества среды по 100 мл приготавливают бульон для определения Citrobacter freundii интенсивным смешиванием следующих компонентов в указанных количествах,p:

Триптиказа 1

Смесь солей желчных кислот 2

Палатн ноз а 2

Рамноза 2

Дистиллированная вода, мл 92

Ингредиенты перемешивают и доба вляют 8 мл раствора бриллиантового зеленого.

Смесь содержит 0,133 г/л твердых частиц.

В отдельной емкости 1 г 2-окси-2, 4,4-трихлордифенилоксида смешивают с 90 мл дистиллированной воды и 10 мл 1 н. раствора едкого натра, и нагревают до растворения с образованием исходного раствора.

3 мл этого раствора добавляют к питательному составу, доводят рН до 7,5 добавлен нием гндроокиси натрия и состав стерили зуют фильтрованием.

Среда имеет двойную по отношению к обычной концентрацию для использования в ячейках анализатора микроорганизмов.

Предлагаемая среда позволяет прово.so дить избирательное выделение и идентифи кацию Citrobacter freundii в присутствии других микроорганизмов.

Формула иэобретемия

1. Питательная среда для выделения грамотрицательных бактерий, содержащая источник азота, источник углерода, ингибиторы, l

7!2031

Составитель С. Малвтимга

Редактор Т. Зубкова Текрсд K. Шуфрии Корректор В Вутига

Заела ЭФ62/4о Тирык Ф32 Пд

ЦН И И и И Государствсииого комитета СССР ео делам изобретений и открытий

l 13030, Москва, Ж вЂ” 30, Рауысквя нвб., и. 4/б

Филиал ППП к патент>, г. Ужгород. ул. Просктнак. 4 посторонней микрофлоры и воду, отличающаяся тем, что, с целью избирательного выделения и идентификации Citrobacter freun4!1, она содер1кит в качестве источника углерода палатинозу и рамноэу, в качестве ингибиторов посторонней микрофлоры желчwe кислоты, бриллиантовый зеленный н !

%-ный раствор 2-окси-2, 4,4 триклордифенилоксида при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Источник азота 4,5 — 5,5 йалатиноза 9,0 — 11,0

Рамноэа 9,0 — 11,6

Желчные кислоты 9,0 — I l,0

Бриллиантовый зеленый 0,052 — 0,055

2-Оксн-2, 4,4 -трихлордифенилоксид, мл l4,5 — l5,5

Вода Остальное

2. Питательная среда по и. 1, отличающаяся тем, что в качестве источника азота она содержит гидролизат желатины.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Блникин С. А. Методы ускоренной диагностики кишечных инфекций. М., 1963, с. 181 — 190.