Способ культивирования содержащих н-антиген

Способ культивирования содержащих н-антиген

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Q g g li T (: "

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву(22) Заявлено 140478 (21) 2603 460/28-13

Р1) М. Кл. с присоединением заявки МоС 12 К 1/04

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 3(10180. Бюллетень Но 4

Дата опубликоваиия описания 3 (10180 (53) УДК 576.8. .093 .1(088 .8) (72) Автор. изобретения

Ю.A.Ðàòèíåð (71) 3a яв ител ь

Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ESCHERICHIA COLI, СОДЕРЖАЩИХ Н-АНТИ ГЕН

Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии.

Известен способ культивирования

Escherichia coIi, содержащих Н-антиген, путем их выращивания на питательной среде в присутствии стимулятора флагеллированности (.1).

Однако Escherichia coIi, выращенные известным способом, характеризуются недостаточно высоким содержанием Н-антигена, Целью изобретения является повышение содержания Н-антигена в культуре Escnerichia coIi, 15

Эга цель достигается тем, что в качестве стимулятора флагеллированности используют глицерин в концентрации 1-5%.

Способ иллюстрируется следующими 2О примерами.

Пример 1. Плотную питательную среду, приготовленную на основе перевара Хоттингера и содержащую

1, 5Ъ агар-агара, ра=тапливают на 25 водяной бане, добавляют сгерильно

2% предварительно обработанного автоклавированием глицерина, разливают в бактериологические пробирки по 5 мл и скашивают. На поверхность скошенной среды засевают подвижные штаммы эшерихий, не подвергавшиеся предварительному пассированию через полужидкий агар в пробирках Крейджи и выращивают при 37о 18-20 ч. Выросшие культуры смывают дистиллированной водой и готовят контрастированные 1%-ным раствором уранилацетата препараты для электрон.ной микроскопии. Препараты просматривают в электронном микроскопе и сосчитывают в различных участках количество клеток со жгутиками и без жгутиков.

В каждом препарате просматривают

100-200 бактериальных клеток.

- Для сравнения готовят и просматривают в электронном микроскопе препараты культуры Escherichia coIi, выращенной на хоттингеровском агаре, в которую добавляют 0,2% глюкозы или без добавок как глицерина, так и глюкозы. Для сравнения также готовят препараты культур Escherichia coIi, пропассированных предварительно 5-7 раз через полужидкий агар в пробирках Крейджи и выращенных на хоттингеровском агаре без добавления глицерина или глюкозы.

712440

1 Количество обладающих жгутиками клеток

Штамм, в Ъ к общему числу клеток, просмотренных

9 в препарате культуры эшерихий,.не пас сированных предварительно, через полужидкий агар выращенные на среде без добавок культуры эшерихий, предварительно многократно пропассированных через полужидкий агар! выр ащен -выр ашенные на ные на выращенные на среде с глицери ном (2Ъ) бреде с глюкозой (О, 2Ъ) среде без до-! бавки

89,1

82,0

4309 28, 5 73, 5

4389 16, О 69, 3

4392 11 О 81 5

45,0

68,9

91,3

48,6

Среднее 18,5 74,76

87,46

54,23

Формула изобретения

Результаты приведены в таблице.

Пример 2. Используют два штамма, пропасеированные предварительно через полужидкий агар в пробирках Крейджи. Один из них

011:К10:H10 — характеризуется отно сительно хорошей флагеллированностью при выращивании на плотных средах, а другой - 0151;Н10 — слабой. Оба штамма обладают жгутиковым антигеном

Н10, íî c„ несколько различным парциальным составом, Адсорбции этими штаммами подвергают Н-сыворотку к штамму 3-236 обладающему также антигеном Н10, но отличающимся по парциальному составу от Н-антигенов двух вышеуказанных штаммов. Такой подбор штаммов сделан с. целью сравнить уровень остающихся в сыворотке Н-агглютининов, которые не имеют сродства с Н-антигену адсорбента и которые необходимо сохранить в сыворотке.

Готовят 3 варианта плотной среды, приготовленной на основе перевара

Хоттингера и содержащей 1,5Ъ агарагара; первый с добавлением 2% предварительно обработанного автоклавированием глицерина, второй с добавлением 0,2Ъ глюкозы и третий без добавок глицерина или глюкозы.

Среды до 20 мл разливают в чашки

Петри и после застывания засеивают сплошным газоном бактерий (на чашку по 0,25 мп бульйонной культуры, которую растирают по поверхности среды шпателем). После выращивания при

Способ культивирования Escherichia coIi, содержащих Н-антиген, 37 в течение 20 ч бактерии смывают изотоническим раствором хлористого натрия и убивают добавлением 0,5Ъ формалина. Адсорбцию ведут традиционным способом. В каждом опыте объем адсорбируемой сыворотки (предварительно разведенной 1:25 в случаях адсорбции культурами штамма

0151:Н10 и 1:20 в случае адсорбции культурами штамма 011:К10:H10) составляет 5 мл. Для адсорбции используют количества адсоррбента, соответствуют,ие урожаю бактерий с двух, трех, четырех и шести чашек при использов ан ии шт амма О, 15 1: Ч10 и с одной, полутора, двух, двух с половиной, трех, четырех и пяти чашек при использовании штамма 011:К10:H10.

Добавление глицерина значительно снижает расход питательной среды для пригОтовления адсорбента в количестве, достаточном для адсорбции. Титры агглютининов, не имеющих сродства к

Н-антигену штамма-адсорбента и сохраняющихся в адсорбированных сыворот25. ках, не зависят от способа выращивания адсорбента.

Введение глицерина в среды с различной питательной основой увеличиЗО вает урожай бактерий и выход Н-антигена. °

Использование изобретения позволяет улучшить бактериологическую диагностику заболеваний, вызываемых

З5 эшерихиями. путем их выращив ания на пит ательной среде в присутствии стимулятора Флагеллированности, о т л и ч а ю m и й65 с я тем, что, с целью повышения

712440

Составитель Е.Дубовицкая

Техред О.Легеза Корректор,М.Шароши

Редактор З.Ходакова

Заказ 10023/8 Тираж 552 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 7(-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 содержащая Н-антиген в культуре

Escherich1a coI1, в качестве стимулятора флагеллированности используют глицерин в концентрации 1-5Ъ.

Источники инФормации, принятые во внимание при экспертизе

1, Авторское свидетельство СССР

9578339, кл. С 12 К 1/04, 1977.