Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов

Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Э. М. Коган, Г. A. Платонова, Н. С. Сидорова, A. Л. Тимковский, С. E. Бреслер, О. А. Аксенов и А. А. Смородинцев (72} Авторы изобретения

Ордена Трудового Красного Знамени институт Высокомолекулярных соединений АН СССР, Ленинградский институт ядерной физики им. Б. П. Константинова и Всесоюзный научно-исследовательский институт гриппа (7l ) Заявители,А:1«Л, ф,>v, Т} ь, с. (54) СПОСОБ ТЕРА1ОАКТИВАВИИ ДВУИИТЕВМХ

ПОЛИРИБОНУКЛЕОТИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ

Изобретение относится к способу тер моактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов, обладающих интерфероногенными и противовирусными свойствами.

Известен способ термоактивации двунитевых полнрибенуклеотидных комплексов (комплексы полиинозиновой и полипитидиловой кислот, полиуридиловой и полиадениловой кислот), заключающийся в прогреве

1О растворов комплексов в культуральной среде, состоящей из набора.20 аминокислот, с добавкой ионов двухвалентного металла (например, Са + или Мр <+) при 3256 С в течение 1 Msa - 5 ч Щ, Недостатками известного способа термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов являются плохая воспроизводимость термоактивации, получение препарата, содержащего токсичные высокоактивные полирибонуклеотидные комплексы, введение в водный раствор комплексов ионов двухвалентного металла, что приводит к нежелательным побочным аффектам

2 л ля жиВых органи змоВ * ÎÅÌ8íêÎ при Внут ивенном применении, использование культуральной среды, состоящий из набора 20 незаменимых аминокислот.

Целью изобретения является разработка способа термоактивапии полирибонукле- отидного комплекса, расширяющего арсенал воздействия на живой организм.

Поставленная цель достигается испол зованием в качестве двунитевого долирибонуклеотидного комплекса нетоксичного полйрибонуклеотидного комплекса полирибо гуаниловой (поли-Г) и полирибоцитидиловой (поли-U) кислот с молярным соотношением полимеров в комплексе 1:1 и молекулярным весом 300. 000-600,000 дальтон и проведением процесса путем прогревания при 90-100 С в присутствии

0,05-0,3 М раствора хлористого натрия в фосфатном уфере в течение 2-ЗО мин, что позволяет получить препарат, не содержащий токсичных комплексов н вредныл для живого организма ионов Са или

Дф

Mg + среда же (хлористый натрий в фос. 71387 фатном буфере) является физиологической по ионному составу и применение ее не вызывает побочных явлений в живом организме, прогревание при 90-100 С исключает стадию стерилизации, необходимую при биологических Вкспериментах на животных и в культуре ткани.

Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов заключается в прогревании раствора двунитевого полирибонуклеотидного комплекса поли-Г и Поли-U с молярпым соотношением пот.:имеров в комплексе 1:1 и молекулярным весом 300.000-600.000 дальтон при

90-100 С в присутствии 0,05-03 М 5 раствора хлористого натрия в фосфатном .буфере в течение 2-30 мин, предпочти тельно 5-15 мин.

: Пример 1. Растворы поли-Г и пали-1L в калийфосфатном буфере (КФБ) 2а с :рН 7,4, содержащем 0,15 М хлористый натрий, сливают и оставляют до получения комплекса поли Г ° поли-U на 1 6 ч при комнатной температуре. Концентрация получ енного комплекса 1, 63 мг/мл. 1 мл раствора комплекса поли-Г поли-Ц соотношением полимеров в комплексе 1 1 и молекулярным весом 300.000-600,000 дальтон помещяютв ампулу, зяпяивяют ее к выдерживают при 90ОС в течение 10 мин, охлаждают до комнатной температуры, разбавляют до концентрации 0,5 мг/мл в

О, 005 М натрий-фосфатном буфере (НФЬ} рН 7,4, содержанием 0,1 М хлористый натрий, и исследуют профиль гель-хроматографии комплекса ня сефярозе 2В и стандартных условиях. Исследуют противовирусную активность термоактивировянного комплекса при интраназальном введении белым мышам. Полученные результаты сопоставляются с профилем гель-хроматографии и противовирусной активностью исходного комплекса до термояктивации (контроль). Кумулятивная выживаемость мышей 8 7%, в контроле 60%.

Пример 2-23. Результаты термоактивации ксмплекса поли-Г поли-Ы при концентрации комплекса 1,63 и 0,5мг/мл, концентрации хлористого натрия 0,050,30 М, температуре 90-100 С, времени прогрева 2»60 мин после предварительного хранения поли-Г или комплекса при

sS

-14 С в течение различного времени приведены в таблице.

1 йва, д я о

a> o

n,ö

Q) ф ф (ч о о д О о о о а о з-1 о о

О О л) о

:4 ж

Яыи 2

«1

EQ о

tQ о

o". g о

cQ Q Q A le ! ао„, а

1Дв

®л ж а агав о

< U ж и а

NRхс2с, „Я

Э д х м

Ж (I

Ф и

Й о ц

< o

71387i а o o o

DJ С ) l (О Ж c0 t

А

Ц о а ч

М о о

С4 с1 о

С4 г о"

Щ о

Я

o" о"

o" о Ъ о

713871 о

С9 Щ

° Ю r4 лч! ( (Al

О

Ц о о

:х . л о о

t t (. (О! .Я ч я о в

11 71387)

Кроме НФБ и КФБ используют калий- 0,3 М раствора хлористого натрня в фосн атр ий-фосфатны и буфер (КНФБ ) . фатном буфере в течение 2-30 мин.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юформула изобретения щ н и с я тем, что комплекс прогрева1. Способ термоактивации двунитевых 5 ют в течение 5-15 мин. полнрибонуклеотидных комплексов, о т- Источники информации

У ли ч а ющи йс я тем, по комплекс принятые во внимание при экспертизе полнрнбогуаниловой и полирнбоци<ндн»вой 1 E.ЭЮ СМ с< R:Ú.ÔÎÊ R.с-&гскб кнслот с молярным соотношением полнме- ТС.MC04Qсэ ТФ6 МОС activation О%-the маров в комплексе 1:1 и молекулярным î ОПОм "дС actiwits О gwn49e4jc Д() ф 300.000 600.000 дальтон прогре- -Ыга аЕ6 Рогач ЬОПОССЕОИЛЕЭ Л М О. о

9 . О веют при 90-100 С в присутствии 0,05- 94ОС. 56,93 10ОО971) Составитель Л. Никулина

РеАВКТоР Г. 1uapI анова Техред M. Петко КоРРектоР M. NycK

Заказ 9210/18 Гираж 495 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4