Способ получения меченых тритием оптически активных антиподов -аминокислот

Способ получения меченых тритием оптически активных антиподов -аминокислот

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскик

Социалистических

Республик (n> 71 701 ?

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (512 М Кл (22) Заявлено 130778 {21) 2644643/23-04 !

< с присоединением заявки NP

С 07 В 23/00

С 07 D 209/04

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 2502,80. бюллетень HP 7 (53) УДК 547.466.07

{088.8) Дата опубликования описания 280280

Н.Ф. Мясоедов, В.A. Даванков, Ю. A. Золотарев, О. 5. Кузнецова и О.В.Петреник (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

{54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ ОПТИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ АНТИПОДОВ с-АМИНОКИСЛОТ

Изобретение относится к ócîâåðшенствованному способу получения меченных тритием оптически активных антиподов <-аминокислот высокой удельной активности, используемых в биохимических и медико-биологических исследованиях.

В патентной и научно-технической литературе известны различные спосо- 0 бы выделения оптических изомеров -Из полученных синтетическим путем меченых рацематов аминокислот. Они бснованы на использовании стереоспецифических ферментов, в частности ацилаэ (1 ), Наиболее близ ким по т ех- 15 нической сущности к описываемому способу является способ разделения ранематов -аминокислот, заключающийся в использовании оксидаз L- u D,аминокислот, гидролизующих один из 2О энантиомеров (2) °

Недостатком этого способа является многостаднйность, значительная потеря исходной активности и значительное ингибирование энзиматичео-" кой активности высокорадиоактивными . субстрат ами .

Целью изобретения является устранение укаэанных недостатков и повы2 шение удельной активности целевого продукта.

Указанная цель достигается описываемым способом получения меченных тритием оптически активных антиподов w-аминокислот, включающим хроматс графическое разделение рацемической смеси меченных тритием с-аминокислот, проводимое методом лигандообменной хроматографии на диссиметрическОм "сорбенте с груйпировка- ми L-оксипролина, связанными по аминогруппе через метиленовый мостик с полистирольным каркасом, насыщенным на 20-90% ионами двухвалентной меди, с элюировайием индивидуальных

Ьптических изомеров раствором аммиака. В качестве смолы, как правило, Используют диссиметрический сорбент, который был получен взаимодействием хлор-метилированного макросетчатого полимера стирола {степень сшивки

0,5-11%,ìoë.е, сшивающий агент -монохлордиметиловый эфир) с метиловым эфиром L-оксипролина с последующим щелочным гидролизом сложноэфирных группировокт сорбент содержит 3,44 мМ

Ь-оксипролиновых групп на 1 r cyxoго вещества.

717017 мйноки слота,Фенил- 46 ..100 мКи алании (0, 38 мг) .65 0,2 22,5 19

35,5 36, О (О, 130 мг) (О, 132 Mr) 80 0,1 130 5 9 80 8,8 (О, 016 мг) (О, 018 Mr) Иэо- 106 30 мКи лейцин, (О, 06 мг) Тирбэин19, 5 20, О мКи (О, 14 мг) 65 0,1

Формула изобретения

ЦНИИПИ Заказ 9749/27

Тираж 495 Подписное

Ужгород, ул. Проектная,4

Воздушно-сухой диссиметрический сорбенТ в количестве 3 r -с размерами частиц в .набухшем со. стоянии < 64 мкм полностью насыщают ионамн меди в 100 мл 0,2 М . (cu(NHg)4 1 so4 при перемешивании в течение 2 ч при комнатной температуре. После насыщения ионами меди сорбент йромявают 0,1 í. NH4OH; затем водой на стеклянном фильтре ° переносят в РаствоР 1 н. NH4OH< содержащий КС1 для вытеснения ионов меди до оптимальной для дайной агыно кислоты степени насыщения 40%, промывают водой и переносят на колонку 8х150 мм. Сорбент уравновешивают

0,2 H. Раствором NH4OH. Ка колонку заводят 20,4 мКи (-704 ) меченного тритием препарата Ot -трийтофайа с удельной актйвностью 48 Ки/мИ. Элюирование проводят, 0,2 н. Раствором аммиака со скоростью 25 мл/ч. хро- 20

" матограгвла содержит три пика активнбсти: первый пик (6,2 мКи) состав-. ляют нелетучие продукты радиолиза, Аналогично приведенному примеру случают индивидуальные оптически активные антиподы w- аминокислот, данные для которых приведены в табЛйце.

Способ получения меченных тритием оптически активных антиподов о.-аминокислот разделением рацемата, о т л и ч а ю щ и и с"я тем, что, с целью повышения удельной активности целевого продукта, разделение рацемической смеси с -аминокислот проводят методом лигандообменной хро-. Филиал ППП Патент, r. второй пик -L -триптофан (5,1 мКи), третий — D -триптофан (4,5 мКи) .

Продукты радиолиэа выходят в объеме

10 мл элюирующего раствора, L-триптофан выходит в объеме 12 мп (после пропускания через колонку 12 мл элюента), Э -триптофан — в объеме

28 мл (после элюировання 32 мл раст-. вора) и до конца не собирается. Выход L-триптофана с 99Ъ-ной оптической частотой 85%. Очистку меченного тритием L-триптофана от меди проводят пропусканием раствора через колонку 5х80 мм со Смолой АтЬег11

7RC=50 в деформе. Выход продукта после очистки от меди составляет 92Ъ.

Радиохимическая чистота меченного тритием <-Триптофана, определяемая тонкослойной хроматографией на

S1lufol UV-254 в системе изобутанол: ацетон: аммиак (12%-ный)- 15:9:6, составляет 984. Оптическая чистота препарата 1. -триптофана, определен-. ная при помощи фермента оксидазы

1--аминокислот, составляет 99%.

7,0 1,6 8,7 5,6 (О, 05 мг) (О, 03 мг) матографии на дйссиметрическом сорбенте с группировками Ь-оксипролина, свяэаннымн по аминогруппе через метиленовый мостик с полистирольным каркасом, насыщенным на 20-90% ионами двухвалентной меди, элюируя индивидуальный оптический изомер раствором аммиака.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Пигарева Н.С. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Л., 1974.

2. Evans E.A., Green Б .M., Spafiner j.Í., Naterfield W.R. Nature, 1963, 198, 1301 (прототип).