Способ получения целлюлозы

Способ получения целлюлозы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 090877 (21) 2516757/28-13 с присоединением заявки Ng— (23) Приоритет

Опубликовано 050380. Бюллетень 9 9

С 12 D 13/10

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (53) УДЫ 576.1 5 (088. 8) Дата опубликования описания О 50380 (72) Авторы изобретения

A.Ã. Лобанок, P .Ï. Зелтин ь, И.N.Ýäæèíüø, P. Я. Карклинь, N.E.Áåêåð и B.Õ.Êèðñèc (7i) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛАЗЫ

Изобретение относится к микробио логической промышленности, а именно к способу получения и выделения фермента целлюлазы. 5

Известен способ получения целлюлазы, предусматривающий культивирование гриба рода Trichoderma концентрирование культуральной жидкости и последующее выделение, фермента осаждением сульфатом аммония и иэопропиловым спиртом .(1) „

Недостатками известного способа является низкая активность препарата целлюлаэы, составляющая 120 ед/г, а также сложность процесса.

Целью изобретения является повышение активности фермента и упрощение процесса.

Цель достигается тем, что в качестве продуцента используют гриб

Trichoderma Iignorum ON 534-6-2, а осаждение ведут в соотношении иэопропиловый спирт:концентрат культуральной жидкости 0,08-0,20:1.

Способ осуществляют следующим образом.

Гриб Trichoderma Iignorum OM 534-6-2 выращивают на питательной среде, =одержащей молочную сыворотку в качестве источника углерода и фосфора, азотнокислый натрий и сернокислый аммоний в качестве источника азота и сернокислый магний — источник магния.

Через 50-60 ч культивирования биомассу отделяют фильтрованием, а культуральную жидкость концентрируют в вакууме в 6-10 раз. Фермент выделяют из концентрата при охлаждении осаждением 45-65% суль— фата аммония, а затем изопропилового спирта, который добавляют к концентрату культуральной жидкости в соотношении 0,08-0,20:1 . Образовавшийся верхний слой, содержащий осадок фермента, центрифугируют. После диализа лиофильной сушки получают препарат фермента, целлюлолитическая активность которого составляет

1700-2500 ед/ч.

Описанные штамма гриба Trichoderma lignorum ON 534 — 6 — 2.

Штамм гриба Trichoderma lignorum

ON 534-6-2 — продуцент целлюлолити— ческих ферментов. Хранится в музее лаборатории регуляции биосинтеэа ферментов Института микробиологии

AH Белорусской ССР °

720010

Формула изобретения

11НИХПИ Заказ 10161/18

Тираж 522

Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул . Проектная,4

Культураль но-морфологические при- наки.

Сусло агар: на 4-е сутки роста при 29 С диаметр колонии 6-7 см, возцушный мкцелий белый, равномерно приподнят по краю колонии, конидии в центре, центр сплошной, уплотнен, зеленого цвета, втянут, в агаре не врастает, рост концентрический.

Среда Чапека с сахарозой: колония на 4-е сутки заполняет всю чашу, мицелий белый, стелющийся, быстро растущий, конидии н виде отдельных плот— ных образований без хохолков, темнозеленого цвета, расположены на кон— центрической окружности на некотором расстоянии о1 центра.

Синтетическая среда с кукурузным экстрактом: рост активный на 3 — H сутки колония на всю чашку, воздушный мицелий войлочный, белый или сероватый, TIo краю колонии припод- .О нят, конидиеобразование обильное, конидии н центре, центр колонии уплотнен, сплошной, темно-зеленого цвета, ограничен концентрически.

Картофельно-декстрозный агар: 25 колонии на 4-е сутки 9-10 см, край ров ный, воздушный мицели и пушистый, белый, конидии в центре объединены в густо расположенные подушечки, среда не пигментирована. ЗО

Цитология на сусло-агаре.

При 29ОС набухание конидий 4-5 ч, прорастание с обоих концов 7-8 ч, нетвление гифов через 18-20 ч, мице-. лий септиронан, не дифференцирова.н, в клетках несколько ядер, разме клеток мицелия 3-5х15-20 мк, кон";::диеносцы формируются на 32-34 ч в н.де боковых ответвлений гиф,. ди†или трихотомически разветвленные, бес— цветные; стеригмы буть»льчатые„ утол4Я ценные посередине, супротивные или мутон чатые, ра змеры 3-5хб — 10 ыс, конидии окончательно формируются к

42-46 ч, округлые или эллипсовидные, размеры 2, -3,5 мк и 2,.5- 45

2,9х3,7-3,9 мк соответственно, с вдним ядром, в массе зеленого цвета.

Физиолого- биохимические свойства,.

Активно гидролизует крахмал, молоко свертывает на 4-5 сутки (рП $Q

5,8-.6,0), пептониэирует его медленно к 20-25 суткам (pH 7,8-7,9); жела— тину не разжижает; исгользует ам»онийную, нитратную, белковую формы азо "а," ассимил%рует глюкозу, галактозу, мальтозу, иноэит, ксизолу, глйце",»»н. маннит, рамноэу, сорбит, особенно активизирует лактозу, с «харозу, арабинозу. (»)тамм обладает высоким уров нем си нтез а целлюла эы, a KTHB Ho продуци)руе r Ферме..т при росте на отходе мол оч ной» ромышл е н» ости — мол оч н ой сыворотке (лак тозе), имеет сокра— щенный период ферментации — 56-64 ч.

Пример 1. Д».я приготовления среды молочную сынсротку отделяют от белка антокланированием при 120. C н течение 30 мин. Осадок белка от— деляют Фи. ьтронанием, а раствор разбавляют водой в соотношении 1:2.

Гриб Triohocierma 7igr»orum ОМ 53 4—

6-2 выращивают на среде следующего состава

Молочная сыворотка (раз— банлен ная водой ) 33

Азотнокислый натрий 0,3

Сернокислый аммоний 0,05

Сернокислый магний 0,05

Культивирование ведут гри 28 С н течение 50 ч. Биомассу отделяют фильтрованием, а культуральную жидкость концентрируют н вакууме уменьшая в 8 раз по объему. К 10 л охлажденного до 10"С концентрата добавляют 5 кг сернокислого аммония. Отстаивают 10 ч, добавляют 1,3 л изопропи— лового спирта, размешивают, отстаива— ют 15-20 мин, разделя»от слои и нерхний слой центрифугируют при

3000 об/мин н течение 20 мин, Осадок растворяют н демннерализованной воде и диализу»ст против деминерализованной воды н течение 20 ч. Высуши— нают лиофильнс. Выход 0,-6 г препа та с» л филь трата культу.раль ной жид:o ти. Актин ность 2500 ep/ã„содержа— ние белка 80%, Та,:.м ocpaçoì, данный спосо= поэ— золяет повысить активность целлюлазы в ) 5-17 раз по сравнению с изнестньм способом, а также упростить и ускорить процесс биосинтеэа и выделения фермента.

Способ получения .целлюлазы, гредусматрив аю»»»ий куль тин и ров а»»ие гриба рода Т -ichocierma, концентрирование культураль ной жидкости и ;Qcëедующее выделение фермента осажде;- ием суль—

Фатом аммония и иэопропилон»ым спиртом, отличающийся тем» что„, с целью повышение «ктнвност:-» фермента и упрощения процесса, н качестве продуцента используют гни=.

Trichoderma 11спогц»»» ОМ 534-6-2, а осаждение Eедут н соо-.-.ношении иэопропилоный спирт: концентpaт культуральной жидкос."и 0,08 -0,20:1,, Источники информации, принятые во внимание при зкспер-.изе

1. Авторское свидетельство

9495347, кл. С 12 D 13/10, 1973.