Способ получения коэнзима а из дрожжей

Способ получения коэнзима а из дрожжей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

"- w ru +e я

I gaTe нс т,,н,„,осня б юлиэто;;а ц fÃ, ф

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

«»720011

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6t) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 170478 (21) 2605451/28-13 с присоединением заявки Й9 (23) Приоритет—

Опубликовано 050380 Бюллетень ((9 9

Дата опубликования описания 050 380 (51)м. 1(л.2

С 12 D 13/10

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (5Ç) УДК 577 . 1 6 (088. 8) (72) Авторы изобретения

3.А. Виестуре, В.A.Ëèåïè Hÿ и P. ß .Ôóðìàíå (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЭЕНЗИе1А А

ИЗ ДРОЖЖЕ Й

Изобретение относится к области микробиологии и касается способов получения коэяэима А.

Известен способ получения коэнзиМа A из дрожжей путем их суспендиро5 вания с последующим выделением целевого продукта горячей экстракцией, отделением экстракта и его очисткой (1) .

t0

Однако известный способ не обеспечивает получение высокоактивного коэнзима А. Активность коэнзима А составляет 30000 ед/кг дрожжей.

Целью изобретения является повышение активности коэнзима А. 15

Эта цель достигается тем, что дрожжи суспендируют в растворе, содержащем КН РО, К, НРО„и McySO, ° 7Н О, затем суспензию дезйнтегрируют ультразвуком, к дезинтеграту добав- 20 ляют раствор, содержащий 1,4 1

2,75 вес. Ъ смеси аденозин-5 -трифосфата (АТФ), пантотената кальция и циотеина при их соотношении 1: (0,7-1,7): (0,3-0, 4) и 5,5-6,5 вес. Ъ глюкозы, далее полученную суспензию дезинтеграта инкубируют и экстрагируют целевой продукт.

Способ иллюстрируется следящими примерами. 30

Пример 1. В качестве исходного сырья используют биомассу хлебопекарных дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Активность коэнзима 18500 ед/кг биомассы дрожжей.

20 г данной биомассы суспендируют в 100 мл водного раствора, содержащего 2,7 г КН. РО, 3,5 г КНРО и 0,3 г

MgSO ° 7Н

Полученную суспенэию дезинтегрируют на ультразвуковом дезинтеграторе при.силе тока 0,4 А, частоте ультразвуковой волны 20 кгц, рН 6,5-7,0 и температуре +5 +2 С в течение 15 мин получают 110 мл дезинтеграта, содержащего клеточные оболочки, органеллы, отдель ные клетки.

К дезинтеграту добавляют 6, 5 r глюкозы, 1, 5 r па н то тена та кальция, 0,85 r АТФ, О, 4 г цистеина. Реак— ционную смесь инкубируют анаэробно при 37+2 С и рН 6,5-7,0 24 час, после чего коэнзим А экстрагируют, подогревая реакционную смесь до

95+2 С и выдерживают при этой температуре 5 мин.

Реакционную смесь разделяют центрифугированием.

Активность коэнзима А составляет

172000 ед/кг дрожжей.

7 2,0011 формула изобретения

Составитель С.Дубовицкая

Техред И.Петко Корректop B . НЪ ra iредактор H.Bupno

Заказ 10161/18 Тиран 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35„ Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. ужгород, ул. Проектная, 4

Пример 2. B качестве исход. ного сырья применяют спиртовые дрожжи «accharomyces cerevisiae. Активность коэнзима А 27000 ед/кг биомассы дрожжей.

20 г данной биомассы суспендируют в 100 мл водного раствора, содержащег 2 7 г КН PO4 3 5 г K7HPOQ

0,3 г Ngso 7Н о.

Полученйую суспензию дезинтегрируют на ультразвуковом деэинтеграторе ЫЯЕ-500 при силе тока 0,.4 А, частоте ультразвуковой волны 20 кГц, рН 6,5-7,0 и температуре +5 +2 C в течение 5 мин. Получают 100 мл дезинтеграта, содержащего клеточные оболочки, oprанеллы, отдельные клетки.

К дезинтегратору добавляют 6 г глюкозы, 1,02 пантотената кальция, 0,8 г ATC и 0,3 цистеина. Реакционную смесь инкубируют анаэробно нри

37+2 С и рН 6,5-7,0 24 час, после че"о коэнзим А экстрагируют, подогревая реакционную смесь до 95 g 2 С, и выдерживают при этой температуре

5 мин.

Реакционную смесь разделяют центрифугированием.

Активность коэнзима А составляет

184000 ед/кг дрожжей.

Использование изобретения позволит получить высокоактивный коэнзим A.

Способ получения коэнзима А из дрожжей путем их суспендирования с последующим выделением целевого продукта горячей экстракцией, отделением экстракта и его очисткой, отличающийся тем, что, с целью повышения активности коэнзима А„ дрожжи суспендируют в растворе, содержащем КН> РО„, К HpO и

NgSO4 ° 7Н О, затем суспензйю дезннтегрируют ультразвуком,к дезинтеграту добавляют раствор, содержащий

1, 4-2,75 вес,% смеси аденозин-5 —

-трифосфата, пантотената кальция и @истеина при их соотношении

1: (0,7--1,7): (0,3-0, 4) и 5,56,5 вес.Ъ глюкозы, далее полученную суспензию дезинтеграта инкубируют и экстрагируют целевой продукт.

25 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Nethods in En z ymoI, 19 57, vo1.III, р.907. Aced, Press М, Y „