Питательная среда для производства бактериальных инсектицидов на основе

Питательная среда для производства бактериальных инсектицидов на основе

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскик

Социалистических

Республик >72ОО13 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 050978 (21) 2666441/30-15 (51)hh. КЛ. с присоединением заявки М

С 12 К 1/Об

Государственный комитет

СССР по дедам изобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 050380. Бюллетень 89 9

Дата опубликования описания 050380 (53) УДК 63: 57 6. 8 (088,8) (72) Авторы изобретения

М,М.Файбич, В.A. Ширшов „В. П.Моторная, Л.П. Синицина, Т.Ф.Костенко, Л.А.Солодянкин, Н.A.Острогская, В.A.Ëàðèoêîâà и Е.В.Васильева

Всесоюз ный науч но-исследов ательский инс ти тут микробиологических средств защиты растений и бак териальных препаратов (71) Заявитель (54 ) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА

БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНСЕКТИЦИДОВ НА ОСНОВЕ

BACILLUS THURING1EVБ1Б

3,0

Изобретение относится к сельскохоз яйств енной мик робиологии.

Известна питательная среда для производства бактериальных препара— тов на основе Вас, thuringiensis содержащая кукурузный экстракт, маль тозу, хлорис тый н атрий и . воду (1), Известна также питательная среда для производства бактериальных ин— сектицидов на основе Bac thuringiensis, которая содержит кормовые дрожжи, кукурузную муку и воду (2) .

С целью расширения ассортимента сырья предлагается питательная среда, включающая кормовые дрожжи как источник азота, источник углерода спирт С. — С и воду при следующем их соотношении, вес.Ъ:

Кормовые дрожжи 2,0 -3,0

Спирт С вЂ” С, 0 1 2,0

Вода Остальное

Для изучения эффективности предлагаемой питательной среды в сравнении с известной (2) используют среды следующих составов, вес,%:

Предлагаемая с-.реда:

Дрожжи кормовые

Спирт (этиловый, 30 бутиловый или амиловый) 0,1-3,0

Водопронодная вода До 100 мл рН после стерилизации 6,8-7,2

Контрольная среда без источника углерода:

Дрожжи кормовые 3,0

Вода в одопрон одна я До 10 О .мл

Рн 6, 8 -7, 2

Контрольная дрожжеполисахаридная среда (прототип):

Дрожжи кормовые 3,0

Кукурузная мука 1,0

Водопроводная вода До 100 мл рН 6,8-7,2

Результаты исследования показали, ч то опытная среда, содержащая

3,0Ъ дрожжей, 0,1 и 0,25% этанола, обладает такой же продуктивностью, как и известная (2), Среды, включающие,о О, 5 и 1,0 Ъ этанола, повышают количество живой биомассы до 16-19%.

Дальнейшее увеличение в среде коли— честна э танола (свыше 1, О Ъ) не дает положительных результатон.

Такнм образ ом, оптималь ное количе c T но этанола н комбинации с кормовыми дрожжами О, 5 и 1, О %. Однако среда, 7. 2001 3

;одержащая О, 1 и О, 25Ъ этанола, может быть использована вместо кукурузной муки или других продуктов, включающих полисахариды.

При введении в дрожжевые среды: вместо кукурузной муки бутанола .Установлено, что оптимальными дозами его являются О, 5-2,0 Ъ, которые дают оптимальный эффект продуктив— ности — до 17-19Ъ. Бутанол в коли— честве 0,1-0,25Ъ дает такой же эффект, как и кукурузная мука. Опти— мальными дозами амилового спирта в среде являются О, 25-0, 5Ъ. Дозы выше или ниже указанных не вызывают повышения продуктивности.

Одновременно с этим проведено исследование эффективности питатель— нЫх с ред, в к лючающих 2 Ъ к ормовых дрожжей и такое же количество спиртов, которые прибавляют к среде с ЗЪ 20 кормовых дрожжей,и при этом получены вполне сходные результаты.

Таким образом, установлено, что культура Bac,thuringiensis, выращенная в средах состава, Ъ: кормовые 25 дрожжи 2-3, з танол О, 5-1, О, бута— нол D, 25-2, О или амиловый спирт

0,25-0,5, в сравнении с культурой, полученной в известной среде, которая включает источник азота, кормовые дрожжи и источник углерода — кукурузную муку, содержит живых спор на

15-10Ъ больше, а в сравнении с куль— турой, выращенной в среде с кормовыми Дрожжами без кукурузной муки, на 4б-80Ъ больше. 35

Приведенные данные свидетельствуют о том, что наличие в среде кормо— вых дрожжей и спиртов создает благоприятные условия для развития продуцен тов бак тери аль ных и нс ек ти — 40 цидов. Кроме того, они свидетельствуют о том, что полисахариды (кукурузная мука) в известной (2) среде могут быть заменены на спирты.

Установлено также, что в культуре

Вас, thur ingiens is, выращенной в среде с кормовыми дрожжами и спиртом, накапливается на 10-20Ъ больше кристаллов (эндотоксина), чем в культуре, полученной в дрожжеполисахаридной

cðårå, что указывает на ее высокую активность. Морфология спор и кристаллов для Вас. thuringiensis является вполне типичной. Выращенная культура легко осаждается при стоянии и центрифугировании, давая рыхлую массу. Активность (вирулентность) для насекомых С15о составляет не более 1Ъ. Указанные показатели свидетельствуют о том, что биомасса, полученная в дрожжеспиртовой среде, 60 высокого качества и может быть использовано для производства бактериальных инсектицидов и что полисахариды (кукурузная мука) в питательной среде могут быть заме- 65 нены на спирты. Для этой цели пригодны спирты неочищенные, технические, что значительно снижает стоимость производства в сравнении с применением полисахаридов.

Способ приготовления среды.

Для производства бактериальных инсектицидов используют питательные среды составов (г/л), приведенных в примерах 1-4.

Пример 1. Состав применяемой среды, г/л:

Дрожжи кормовые 3,0

Спирт этиловый 1,0

Вода водопроводная До 1000 мл рН после стерилизации 6,8-7, 2 .

Для приготовления среды в ферментере отвешивают кормовые дрожжи в нужном количестве и прибавляют к ним

1/3 необходимого объема водопроводной воды, смесь тщательно перемеши— вают, нагревают до 90-100 С в течение 5 мин, после чего к ней приливают водопроводную воду до нужного объема, перемешивают и устанавливают рН с таким расчетом, чтобы после стерилизации он был равен б,8-7,2.

Стерилизуют при 120 С в течение

45 мин или путем пропускания через установку непрерывной стерилизации (УНС) . Простерилизованную среду в ферментере охлаждают до 30-34 С, поспе чего, строго соблюдая стериль— ность, прибавляют расчетное количество спиртов. В процессе роста в случае необходимости концентрацию спирта поддерживают равной 0,1Ъ.

Биомассу продуцентов бактериальных инсектицидов выращивают при 28-30 С глубинным способом. Эта среда харак— теризуется такой же продуктивностью, что и известная.

Пример 2. Состав приготовляемой среды, г/л:

Дрожжи кормовые 3,0

С пир т э ти лов ый 2,5

Вода водопроводная До 1000 мл рН после стерилизации t,8-7,2.

Условия приготовления среды и стерилизации те же, что в примере 1.

Эта среда характеризуется такой же продуктивностью, как и известная (2), Пример 3 . .Состав среды, г/л:

Дрожжи кормовые 30,0

Спирт этиловый 5,0

Вода водопРоводнаЯ До 1000 мл рН после старилизации б,8-7, 2.

Условия приготовления среды и стерилизация те же, что в примере 1.

В сравнении с известной (2) средой в этой среде продуктивность повышается на 1бЪ.

Пример 4. Состав среды,r/л:

Дрожжи кормовые 3,0

Спирт этиловый 1Q,О

7 20013

Формула изобретения

Составитель М. Дранишников

Техред М.Петко Корректор Г.Назарова

Редактор Бородкина

Эаказ 10161/18 Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР и э делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Вода водопроводная До 1000 мл рН после стерилизации 6,8-7, 2, Условия приготовления среды и стерилизации те же, что в примере 1.

В сравнении с известной (2.) средой в этой среде продуктивность повышается на 193.

При введении в питательную среду этанола больше 1% продуктивность значительно ниже, чем при использовании среды с 1%.

Среда, содержащая меньше 0,1Ъ этанола, характеризуется значительно меньшей продуктивностью, чем известная (2) .

В технико-экономическом отношении использование в питательных средах спиртов вместо полисахаридов и других углеводов дает воэможность повысить продуктивность среды на 15-18В, снизить потери биомассы при концентрировании, улучшить качество культуры (повьпаение кристаллического эндотоксина), а также расширить ассортимент источников углерода.

Питательная среда для производства бактериальных инсектицидов на основе BaciIius thuringiensis, содержащая кормовые дрожжи, источник углерода и.воду., о т л и ч а ю щ а . я с я тем, что, с целью расширения ассортимента сырья, она содержит в качестве источника углерода спирт

С, — C> при следующем соотношении компонентов, вес.З:

Кормовые дрожжи 2,0-3,0

Спирт С вЂ” С 0 1-2,0

Вода Остальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

2Î 9485149, кл ° С 12 К 1/06, 1974.

2. Авторское свидетельство СССР

Р362048, кл. С 12 К 1/06, 1970 (прототип).