Штамм вниигенетика-42-продуцент- -амилазы

Штамм вниигенетика-42-продуцент- -амилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

«< 721484. К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 02.02,78 (21) 2588998/28 — 13 (51) M. К.ч.

С 12 D 13/10

C !2 К 1/00 с присоединением заявки №

Гесудорстееннь<й комитет (28) Приори гет по делам нэобретений и открытий

ОпУбликовано 15.03.80. Вкзллетень ¹ !О

Дата опубликования описания 15.03.80 (53) УДК577.15.07 (088.8) Л. М. Ермакова, 3. Т. Абрамов, Е. А. Максимова, Jl. И. Ерохина и В. М. Степанов (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (71) Заявитель (54) ШТАММ BACI BJS $0ВТ16$ ВНИИГЕНЕТИКА — 42 — Г!РОДУЦЕНТ

А. — АМИЛАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промьшьченности и касается получения штаммов-продуцентов а-амилазы. Препараты, содержащие а-амилазу, используются в хлебопекарной, текстильной, меховой и других отраслях промышленности, Широкое применение препа 5 раты а-амилазы, главным образом бактериального происхождения, находят также в качестве биологически активных веществ в составе моющих средств.

1О

Известны штаммы грибных и бактериальных культур, продуцирующих амилолитические ферменты. Наиболее близким по своей технической сущности к предлагаемому является ппамм Bacillus subtilis G 43 (1), которыи !

5 характеризуется максимальной амилазной активностью. зарегистрированной к настоящему времени в патентной литературе (1).

Уровень ак гив ности а- амил азы штамма

6--43 после 48 час. роста сос1авляет 303 ед/мл (колориметрический метод ОСТ 59-.3 — 71).

Предлагасмый штамм Bacillus subtilis

ВПИИгенетика-42, хранящийся в Музее живых куль1ур института ВПИИгенетика пол регистрационным номером UMHM  — 1498, отличается от прототипа более высоким уровнем активности а-амилазы (в 1,5 раза выше)- сниженной в 1,5 — 2 раза активностью щелочной лротеиназы; возможностью культивирования на более дешевых по составу средах. На среде, содержащей картофельный крахмал, кукурузный экстракт и соли, активность а-амилазы через 48 час ферментации постигает 450 ед/мл.

Штамм Вас. subtil

 — 340, полученного из Музея живых культур

ВНИИгенетика. Снижение активности щелочной протеиназы в культуральной жидкости пролуцента может иметь практическое значение, поскольку при выделении целевого продукта

0 -амилазы будут сокращены возможные потери за счет гидролитического воздействия щелочной протеазы.

Предлагаемый штамм Bac. subtil is ЗНИИгенетика-42 способен расти на менее богатых и сложных (по сравнеHHR) с применяемыми в промышленности для произволства A-амилазы) питательных cpcg и требует значи)ельно

7? меньшее количество основнсго сырья — крахмала (0,9 вместо 8%).

Культурально-морфологические признаки штамма ВНИИгенетика-42.

Морфология. Штамм представляет собой грамположительную, спорообразуюшую па и>ч-! ку размером 2,5 — 4 х 0 5 — 0,8 мкм.

Размер спор: 1,0 — 1,2 0,6 — 0,7 мкм.

Культуральные и физиологические признаки.

Мясо-пептонный агар (МПА). Через 48 час инкубации при 37 С образует желтовато-серые плоские, круглые колонии диаметром 2,5—

3,0 мм с лопастными краями, не врастают в среду. Поверхность гладкая, матовая.

Посев штрихом на мясо-пептонном arape. о

При инкубации в течение 24 час при 37 С рост хороший. Штрих нитевидный с лопастным краем и матовой, гладкой поверхностью. Посев уколом. Рост на поверхности. Культура аэробная.

Мясо-пептонный бульон (МПЬ). При инкубации в течение 24 час при 37 С без встряхивания рост без помутнения среды, на поверхности образуется сухая пленка. При встряхивании на качзлке наблюдается сильное помутнение среды. При стоянии образуется пленка, Агаризированная среда Хоттингера. При инкубации в течение 48 час при 37 С образует желтовато-серые колонии с белым краем, круглые, плоские, диаметром 3 — 4 мм, с лопастными краями. Поверхность шероховатая, матовая.

На синтетической среде с минеральным азотом (среда Спицайзена) . Растет в виде мелких, круглых колоний диаметром 1--1,5 мм, серовато-белого цвета. Поверхность матовая.

Колонии врастают в субстрат, На ломтиках картофеля пигмеи.га не образует, имеет матовую, сухую, морщинистую поверхность.

Желатину разжижает на вторые сутки.

Крахмал гидролизует.

Молоко пентонизирует и пошелачивает. ,Отношение к источникам углерода. Глюкозу, лактозу, фруктозу, сахарозу ассимилирует.

В лабораторных условиях при ферментации в жидких питательных средах цпамм ВНИИгенетика-42 выделяет а-амилззу с активностью, достигающей 450 ед/мл.

Хранение штамма производят в лиофильно высушенном состоянии в стеклянных ампулах.

Примеры использования штамма Sac. subtilis

ВНИИгенетика-42 для получения а-амилазы.

П р и м с р l. Культурой из нескольких типичных шероховатых колоний с агариэованной среды Хоттингера засевают ломтики êçðтофеля. В качестве инокулята используют кусочки пленки, выросшей через 24 <ас при

37 С на ломтиках картофеля. Инокулят вносят

484 в ферментапионную среду следующего состава (4):

Кархмзл картофельный 0,9 ч" «4 NO 3 0,18

Кукурузный экстракт 0,75

СаСОэ 0,2

Вода водопроводная, рН 6,8 доводят до стерилизации 5 КОН. Активность а-амилазы через 48 час. Ферментзция в колбах составляет

450 ед/мл.

Пример 2. Штамм-продуцент, приготовление посевного материала, состав ферментационной среды то же, что и в примере 1.

Отличие состоит в условиях ферментзции. Про15 цесс ферментации проводят методом глубинного культивирования в ферментере "Biofio емкостью 500 мл с 300 мл ферментационной среды при расходе воздуха 1 объем на 1 объем среды в 1 мин и скорости оборотов

«э0 мешалки 500 об/мин. Температура процесса

30 C, рН поддерживается равным 6, 8. Время ферментации 40 час. В среду вносится пеногаситель-пропинол в количестве 2%. Активность а-амилазы составляет Зб0 ед/мл.

25 Таким образом, как следует иэ примеров использования предлагаемого штамма, новый штамм ВНИИгенетика-42 способен продуцировать в лабораторных условиях а-амилазу с максимальной активностью до 450 ед/мл, что

50 превышает активность штамма-прототипа в

1,5 раза.

Для выращивания предлагаемого штамма применяются более простые по составу питательные среды, в которых значительно снижено содержание основного сырья крахмала (в 8 раз . меньше ио сравнению с производственными средами) .

Новый штамм ВНИИгенетика-42 рекомендован институтом ВНИИгенетикз для промыш40 ленного получения а-амилазы.

Формула изобретения

Штамм Bacillus subtilis ВНИИА енетика-42продуцент а-амилазы, хранится в Музее культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под регистрзционным номером ЦМПМ В-1498.

Морфология. Грамположи ельная, спорооб50 с ф разуюшая палочка размером,5 -4х0 — 0,8 мкм, Размер спор 1,0 — 1,"х0,6- 0,7 мкм.

Мясо-пептонный агар (МПА). Через 48 чзс инкубации при 37 Г образует желтовато-серые с

55 плоские круглые колонии диаметром -, 3,0 мм с лопастными краями, не врастают в среду. Поверхность гладкая. матовая. При посеве уколом рост иаблндаегся только нз поверхности.

721

Составитель Н. Паников

Техред Э.Чужик

Редактор Н. Коган

Корректор. В. (.иниикая

Заказ 1152/52

Тираж 522 Подписное

ПНИИПИ Государственного комитета C(СР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал 1И1П "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная. 4

Мясо-пептонный бульон (МПЬ). При инкубации в течение 24 час при 37 С без встряхивания рост без помутнения среды, на поверхности образуется сухая пленка. При встряхивании на качалке сильное помутнение среды.

При стоянии образуется пленка.

Агаризованная среда Хоттингера. При инку. бации в течение 48 час при 37 С образует желтовато-серые колонии с белым краем, круглые, плоские, диал1етром 3 — 4 мм, с лопастными краями. Поверхность шероховатая, матовая.

На синтетической среде с минеральным азотом (среда Спицайзена) растет в виде мелких

484

1 — 1,5 мм диаметром, круглых кодоний, серовато-белого цвета. Поверхность матовая. Колонии врастают в субстрат.

Ha ломтиках картофеля пигмента не образует, имеет матовую, сухую, морщинистую поверхность..

Желатину разжижает на вторые сутки.

Крахмал гидролизует.

Молоко пептонизирует и подшелачивает.

1л Отношение к источникам углерода. Глюкозу, лактозу, фруктозу, сахарозу ассимилирует.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР М 538024, 15 кл. С 12 К 1/00, 1976.