Штамм n563 ,используемый для выявления лизогенных штаммов молочнокислых стрептококков

Патент 721487

Авторы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских .

Социалистических

Республик

487 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 030576 (21) 2357583/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 150380, Бюллетень ¹ 10

Дата опубликования описания 18.0380

/02

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий

9/02

° 13

8.8) А,В, Гудков, Ю,К. Фомичев, А.H . .Сельсков и В.М, Докукин (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт маслодельной и сыродельной промышленности (71) Заявитель (5 4) ШТАММ STREPTOCOCCUS DIACETl.LAC%15

9 563-Ь, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ

ЛИЭОГЕННЫХ ШТАММОВ МОЛОЧНОКИСЛЫХ

СТРЕПТОКОККОВ

Изобретение относится к микробиологической проьыаленности, а точнее к получению нового штамма молочнокислых стрептококков, используемого для выявления лиэогенных штаммов молочнокислых стрептококков в производстве молочных продуктов, Известны различные штаммы из рода i Ыгер ососсое diacetiRact\s и спользуемые для выявления лизогенных штаммов молочнокислых стрептококков (1., 2) .

Лизогенные культуры в составе зак о васок в сыроделии постоянно содержат бактериофаги, Попадая в производство, эти культуры выделяют фаги, что приводит к лиэису других штаммов молочнокислых стрептокков и потере закваской своей активности, Определение лиэогенных штаммов путем выявления в культуральных жидкостях фаговых частиц осуществляют с помощью индикаторного штамма, который должен лиэироваться максимальным количеством типов фагов, продуцируемых лиэогенными культурами, Белью изобретения являет "я получение штамма, обладающего чувствительностью к умеренным фагам, и тем самым предотвращение попадания бактериофагов с лизоген ными культурами в состав заквасок.

ыгер ососсие сбасеЖасИе

Р 563- 5 хранится в коллекции Всесоюз ного н аучно-и сследов атель ского института маслодельной и сыродельной промышле н н ости .

Морфологические признаки. Величи-. на клеток суточной культуры на агаре из гидролизованного молока 0,91,0 мк, Форма клеток слегка зллипсоидная, цепочки клеток короткие по

- 2-4 клетки, Физиологические признаки, В бульоне из гидролизованногo молока в стадии интенсивного размножения образуют равномерную густую взвесь, Суточная бульонная культура равномерно мутная с небольшим зернистым осадком. При взбалтывании осадок легко вэмучивается, При пересеве 18-ти часовой

25 бульонной культуры в свежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1% наблюдается Рад -фаза 2030 мин. Максимальная концентрация клеток 5-6 10 достигается за 7 ч о

3р инкубирования при 30 С, 721487

60 б5

Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ед/мл, При посеве в молоко 1% 18-ти часовой бульонной культуры сгусток образуется за 16-18 ч. Сгусток плотнйй, равномерный, консистенция колющаяся.

При посеве уколом в мясопептонную желатину слабый рост по линии укола, Разжижения среды нет.

При посеве на агар из гидролиэо« ванного молока в чашки Петри через два дня образуются гладкие, круглые белые, блестящие, с ровным краем колонии, Размер колоний 1,0-1,2 мм.

Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в среде до 1000 ед/мп, Отношение к углеродам, Сбраживает глюкозу, галактозу, лактозу,мальтозу с образованием кислоты, Маннит не сбраживает. цт амм Streptococcus diacet_#_actis

563- 5" может быть легко идентифицирован и выделен при определении чувствительности штаммов молочнокислых стрептококков к бактериофагам, при этом штамм str, diu=eti9actis 56 3- 5 чувствителен ко всем 10 умеренным бактериофагам.

Для повышения частоты мутации штамм Str. diace6eactis Р 563 облучают ультрафиолетом, после чего проводят отбор стрептомицин-резистентных мутантов, в результате чего определяют штамм Str. Жасе аасбь

9 563-S", обладающий фазочувствительностью штамма дикого типа.

Выявление лиэогенности штаммов молочноки слых стрептококков с пог мощью штамма str. dtacetR.actus,9 563-S проводят следующим образом, Исследуемый на лиэогенность штамм молочнокислых стрептококков .пересевают перед опытом с чашки

Петри (6-8 колоний) в бульон из гидролизованного молока и инкубируют 18 ч, 0,1 мл 18-ти часовой бульонной культуры пересевают в

10 мл стерильного бульона. и культивируют при 30 С 5 ч, о

Индикаторный штамм Str diacetitactts

Р 563- S" пересевают с чашек Пет ри (6-8 колоний) в бульон из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина и инкубируют 18 ч.

0,1 мл 18-ти часовой культуры переносят в 10 мл стерильного бульона со стрептомицином (200 ЕД/мл) и инкубируют 5 ч при 30 С, 3а 4-5 ч до постановки опыта в . чашки Петри разливают по 25-30 мл

1,5Ъ-ного arapa иэ гкдролизованного молока, содержащего 200 ЕД/мл стрептомицина, После застывания агара чашки подсушивают 3-4 ч, В пробирки предварительно разливают по 2 мл

1О

2О

ЗО

0,6%-ного агара иэ гидролизованного молока с 200 ЕД/мп стрептомицина, Перед использованием пробирки подогревают в водяной бане при 100 С до расплавления агара и охлаждают до 45 С, Затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл 5-ти часовых культур индикаторного и исследуемого штамма, содержимое пробирки быстро перемешивают и выливают на поверхность 1,5Ъ-ного агара из гидролизованного молока со стрептомицином в чашки Петри с одновременным равномерным распределением и последующим выдерживанием до застывания верхнего слоя.

Опыт проводили с двумя контролями °

1, В пробирку с расплавленным и охлажденным до 45 С 0,6%-ным агаром из гидролизованного молока с

200 ЕД/мл стрептомицина вносят 1 мл

5-ти часовой индикаторной культуры, содержимое пробирки выливают на

1,5%-ный.агар из гидролизованного молока со стрептомицином 200 ЕД/мп в чашки Петри.

2. В пробирку с расплавленным и охлажденным до 45 С 0,6%-ным агаром иэ гидролизованного молока (200 ЕД/мл стрептомицина) вносят

1 мл 5-ти часовой культуры испытываемого на лизогенность штамма, и содержимое пробирки выливают на поверхность 1,5%-ного агара из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина.

Опытные и контрольные чашки инкубируют при 30 С 18 ч, В контрольной чашке с посевом индикаторного штамма должен образоваться мутный бактериальный газон, B контрольной чашке с посевом испытываемого штамма питательная среда должна оставаться прозрачной, В случае, если контроли соответствуют ожидаемым, проводят учет опыта, Если индикаторная культура растет в виде равномерно мутного газона, то испытываемый штамм не. является лиэогенным.

Если индикаторная культура не растет и среда остается прозрачной или на фоне мутного газона индикаторного штамма образуются мелкие прозрачные пятна с диаметром от

0,2 до 2,5 мм, то испытываемый штамм является лизогенным и его удаляют иэ числа производственных штаммов.

В том случае, если контроли не соответствуют ожидаемым, опыт повторяют с новым раствором стрептомицина и индикаторным штаммом, пересеянным иэ пробирки со столбиком иэ

0,6Ú-ного агара иэ гидролизованного молока.

Новый штамм Str, diocet ас Оэ Р 563S" отличается от известных по фаго-.

721487

Формула из обретения

Составитель И, Привалова

Редактор Л, Батанова Техред И.Асталош Корректор Г. Назарова

Заказ 84/23 Тираж 522 Подпи сн ое

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 типу и характеру негативных колоний, которые образуют бактериофаги при культивировании на данном штамме,обладает чувствительностью к умерейным фагам и способствует предотвращению попадания бактериофагов с лизогенными культурами в состав эаквасок °

Штамм Str eptococcus сИасеМРас0з

9 563-S, используеьый для выявления лиэогенных штаммов молочнокислых стрептококков, Хранится в коллекции

Всесоюзного научно-исследовательского института маслодельной и сыродельной промышленности, Морфологические признаки. Величи« на клеток суточной культуры на агаре из гидролизованного молока 0,91,0 мк, Форма клеток слегка эллипсоидная, цепочки клеток короткие по

2-4 клетки, Физиологические признаки. В бульоне иэ гидролиэованного молока в стадии интенсивного размножения образуют равномерную густую взвесь.

Суточная бульонная культура равномерно мутная с небольшим зернистым осадком. При вэбалтывании осадок легко вэмучивается. При пересеве

18-ти часовой бульонной культуры в свежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1В наблюдается

0оц-фаза 20-30 мнн. Максимальная концентрация клеток 5-6 10 достигается эа 7 ч инкубирования при 30 С, Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ед/мп, При посеве в молоко 1В 18-ти часовой бульонной культуры сгусток образуется за 16-18 ч, Сгусток плотный, равномерный, консистенция колющаяся.

При посеве уколом в мясопептонную желатину слабый рост по линии укола, Разжижения среды нет, При посеве на агар из гидролизованного молока в чашки Петри через два дня образуются круглые, гладкие, блестящие, с ровным краем колонии.

Размер колоний 1,0-1,2 мм. Способность к росту сохраняется при кон20 центрации стрептомицина в среде до

1000 ед/мл, Отношение к углеродам. Сбраживает глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу с образованием кислоты.

25 .Маннит не сбраживает, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

Зо М 600179, кл. A 23 С 9/12 1976, 2. Авторское свидетельство СССР

9 555133, кл, A 23 С 9/12, 1976 (прототип) .