Способ дифференциации холерных вибрио-hob ot негазообразующих аэромонад

Способ дифференциации холерных вибрио-hob ot негазообразующих аэромонад

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

<и>722242

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 04.09,78 (21)2б 58740/28-13 с присоединением заявки Мо . (23) Приоритет

Опубликовано 15,0381. Бюллетень М2 10

Дата опубликования описания 180381 (51)М. Кв.з

12 К 1/04

Гоеударственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (53) ЮК ь616-07 (088.8) (72) Авторы изобретения

Э.А, Яговкин и B.Н. Таранова (71) Заявитель

Ростовский-на-ДОну государственный научноисследовательский противочумный институт (54) СПОСОБ ДИФФЕР

ОТ НЕГАЗОО

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно, дифференциации холерных вибрионов от близкородственных микроорганизмов.

Известен способ дифференциации холерных вибрионов от негазообразующих аэромонад путем выращивания микробов на плотной питательной среде с последующей обработкой полученной суспензии микроорганизмс химическими реагентами (1).

Однако известный способ не всегда позволяет отдифференцировать холерные вибрионы от негазообразных аэромонад и сроки микробиологического анализа длительны (до 4-5 суток), Целью изобретения является повышение чувствительности и ускорение способа.

Эта цель достигается тем, что микробы выращивают на плотной питательной среде с последующей обработкой полученной суспензии микроорганизмов химическими реагентами, суспензию микроорганизмов обрабатывают

1Ъ-ным раствором формалина, доводят концентрацию микробных клеток до

400 млрд клеток/мп, добавляют 0,15 М фосфатный буфер, содержащий 0,3ЕНЦИАЦИИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ

БРАЗУВЩИХ АЭРОМОНАД

В i!

"" » г

0,5 мг гл:окозооксидазы, затем выделяют О-антиген и при наличиии в нем фруктозы дифференцируют холерные вибрионы.

Пример . Берут штамм холерного вибриона 2913 и штамм не образующий газ аэромонады Р 6021 засевают на обычные твердые питательные среды. Через 18 ч выращенные при

37 С культуры смывают физиологическим раствором и обезвреживают путем добавления в суспензию клеток формалина до 1%-ной концентрации и клетки трижды отмывают физиологическим раствором. B суспензиях определяют концентрацию клеток. В опыт берут по

400 млрд клеток, которые еще раэ отмывают физиологическим раствором прк центрифугировании. Осадки клеток сус20 пендируют в 3 мл 0,15 М фосфатном буфере рН-7,4, содержащем фермент глюкозооксидазу (0,3-0,5 мг íà пробу). Смесь инкубируют 5 ч при 37 С.

После инкубирования из клеток экстрагируют специфический О-анткген, путем добавления 3 мя 70в-ного вод. ного раствора фенола. Экстракцию ведут в течение 1 ч при комнатной температуре, встряхивая через 10-15 мин.

После экстоакции пробы центрифугк722242

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Т. Морозова Техред Т.Маточка Корректор С. атомах

Заказ t006//Þ

Тираж 528 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППН "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 руют при 5000 об/мин в течение 20 мин.

Образующийся верхний слой декантируют и используют в реакции. К каждой пробе добавляют по 2 мл 0,1%-ного раствора уезорцина в 95%-ном этаноле и 6 мл концентрированной соляной кислоты. Пробы выдерживают на водяной бане при 80 С до положительной реакции в контрольных пробах с фруктозой и с типичным контрольным штаммом холерного вибриона. Положительные пробы, содержащие фруктозу и относящие-. ся к виду холерных вибрионов, окрашиваются в красный цвет в отличие от негаэообразукицих аэромонад, которые не окрашиваются по сравнению с контролями. Опыт сопровождают следующи- 15 ми контролями: одна проба с Фруктовой 25 мкг, одна проба с заведомо типичным штаммом холерного вибриона и проба, не содержащая клеток микроорганизмов и фруктозы. 20

Предлагаемый способ повышает чувствительность и достоверность дифференциации холерных вибрионов от негазообразующих аэромонад, сокращает время дифференциального анализа на

3-3,5 суток, однотоновое изменение окраски улучшает регистрацию результатов.

Способ дифференциации холерных вибрионов от негаэообразующих аэромонад путем выращивания микробов на плотной питательной среде с последующей обработкой Полученной суспензии микроорганизмов химическими реагентами, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и ускорения способа, суспензию микроорганизмов обрабатывают 1%-ным раствором формалина, доводят концентрацию микробных клеток до 400 мпрд клеток/мл, добавляют 0,15 M фосфатный буфер, содержащий 0,3-0,5 мг глюкозооксидазы, затем выделяют О"антиген и при наличии в нем фруктозы дифференцируют холерные вибрионЫ.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Либинзон A.Е. и др. О возможных ошибках при бактериологической диагностике холеры. — Лабораторное дело", 1977, 9 6, с. 356-358.