Штамм всти-301-продуцент нуклеотидов

Штамм всти-301-продуцент нуклеотидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

94н ",р„-щ а

a:Ôù Фтеека Г,;Ь4

ОП ИСАНИ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Ресттубпик iii?26161

4r

<

I ";« ." (6! ) Дополнительное к авт. свил-ву (22)Заявлено 13.05.77 (21) 2476202/28 13 (5! )Ы. Кл.

С 12 Э 13/06 с присоелинением заявки РЙ

Гооударотееииыб комитет

СССР ао делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 05.04.80, Бюллетень № 13 (53) УДК,612.398..145. 1(088.8) Дата опубликования описания 08 04 80

В. Ж. Цыренов, И. О, Пинуев, Г, Г. Гончиков, и P. В. Булгадаева (72) Авторы изобретения

Восточно-Сибирский технологический институт

1 (71) Заявитель

„(54) ШТАММ COR1NEBACTERIUIA 5PE CT.Е5 ВСТИ-301— — ПРОДУЦЕНТ НУКЛЕОТИДОВ

Изобретение относится z области микробиологии и может быть использовано для производства нуклеотидов.

Предложенный шта лм является новым и в патентной и научно-технической лите5 ратуре не описан.

Цель изобретения — новый штамтл

Со ът е Ьстс e iu species ВСТИ-301 продуцирующ ий нуклеотиды.

Штамм выделен из экстремента аиста с помошью полуэлективттой среды.

Штамм Corynebaefer щ алесте5

ВСТИ-301 — продуцент нуклеотидов хранится в музее культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгетуети- 1 ка под номером ЦМПМВ-1597, Культурально-морфологические призна- .

/ ки.

Яйцевидные палочки (0,6-0,9) х(1,53) мкм, иногда встречаются более круйные палочки. Заметного плеоморфизма нет. Расположены паралщ под углом друг к другу в пакетной упаковке, иногда по одной. Споры и капсулы отсутствуют. Неподвижные.

Мясо-пептонный агар. После 2-х суо ток роста при 30 С образует круглые колонии диаметром 3 — 4 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф вы— пухлый, аморфные, светонепроницаемые, мягкой маслянистой консистенции, ивет желтый.

Рост по штриху умеренный, снизу затягивающийся сверху ограниченный рельефный, блестяший, поверхность гладкая, маслянистой консистенции, цвет желтый.

-- Глюкозо-картофельный агар. После

3-х суток роста при 30 С образует

P круглые колонии диаметром 2-3 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф выпуклый, аморфные, светонепроницаемые, мягкой маслянистой консистенции, цвет желтый.

Среда Чапека с 30 rëêã/ë биотина.

В

После 3-х суток роста при 30 С образует круглые >солощ1и апти т ю1 1,0 726161

Физиолого-биохимические признаки.

Грамположительный микроаэрофил.

Растет при температуре 20-37 С, оптиЮ 15 мум 30 С.

Усваивает глюкозу, мальтозу, инозит, сахарозу. Слабо усваивает дульцит, ксилозу, арабинозу. Не усваивает маннит, сорбит, рамнозу, лактозу.

Глюкозу,- сахарозу, мальтозу сбраживает до кислоты.

Ацетилметилкарбинол не образует.

Крахмал не гидролизует.

Желатину не разжижает.

Индол не образуется. Сероводород не образуется.

Нитраты редуцирует до нитритов.

Молоко не изменяет.

Целлюлозу не гидролизует.

Каталазная активность положительная.

Ур еаза — поло жительная.

Примерь. использования штамма Cîró ie35

5acteriuw орес еь ВСТИ ЗО1 °

Пример 1. Посевная среда, вес.%:

Пептон 1,5

Глюкоза 2

К НРО„ 0,1

МД 504 7 Н О, 0,03

НаС8 0,3

Га &04 7Н О О,О1

Био тин 30 мкг/л рН 7,3

Среду разливают по 20 мл в Эрленмейеровские колбы емкостью 250 мл и стерилизуют при давлении 1 ати 15 мин, Мочевину стерилизуют отдельно при давв

К ПРО 1

К1-) 2 Р04

1.

Пептон 0Ä5

Био тин 30 мкг/и

30 пении 0,5 ати 15 мин, и добавляют колбы (0,2%) после стерилизации. ог 1

Ферментационная среда (вес. );

Глк коза 10

Mq 504 ° 7Н О 1

С а СР ° 2Н О 0,0 1

1,5 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельф выпуклый, аморфные, мягкой маслянистой консистенции, цвет желтый.

Сусло-агар. После 4-х суток "роста образует точечные колонии желтого цвета, Картофель. Рост скудный. Ивет желть й.

Мясо-пептонный бульон. Пятисуточная культура образует слабую равномерную муть. Пленку на поверхности не образует, Осадок желтый, легко взмучиваюшийся, 10 образует равномерную муть. .

Среду разливают по 15 мл в Эрленмейеровские колбы емкостью 250 мл, добавляют 5н.f4@OH до рН 7,6 и стерилизуют при давлении 1 ати 15 мин. Мочевину стерилизуют отдельно при давлении 0,5 ати 15.мин и добавляют в колбы (0,6%) после стерилизации. Витамины — Са — пантотенат и тиамин-HBr стерилизуют, пропуская через стеклянный фильтр % 4, и добавляют также в колбы после стерилизации из расчета соответственно 5 мг/л и 3 мг/л.

Ферментация. Культуру са yneHacferium

6peeie5 ВСТИ-301 с двухсуточного коо сяка (рыбный гидролизат РПА; 30 С петлей переносят в колбы с посевной средой, которые помешают на круговую качалку. Спустя 24 час культивирования на посевной среде при 30 С этой средой (10%) инокулчруют колбы с ферментационной средой. Ферментацию на круговой качалке проводят в течение 3-х суток и

„ вносят в колбы по 30 мг аденина и

О, 15 сл ксилола. Затем ферментацию продолжают еше сутки.

Определяют нуклеотиды в культурапьной жидкости.

Клетки удаляют центрифугированием, флоккулируюшие белки — нагреванием в кипяшей водяной бане в течение 5 мин после подкисления до рН 4. Затем нуклеотиды экстрагируют 0,6 н. НС10 . Обработанную таким способом культуральную жидкость подвергают хроматографи— ческому анализу. Нисходяшая бумажная. хроматография в системе изомасляная кислота: ледяная .уксусная кислота:

1 н. NH OH = 10: 1: 5. Пятна нукле-

4 отидов на бумаге просматривают в УФ на ультрахемископе, эпюируют 3 мл воды в кипяшей водяной бане в течение

30 мин . Количественное определение нуклеотидов производят no E a меренном на спектрофотометре, с помо— шью переводных коэффициентов. Ионообменную хроматографию проводят на смоле AB-17 (С1-) в системе НС1: ЫС1 в линейном градиенте.

Выход АТФ, АДФ, АМФ составляет соответственно 1,5, 0,55 и 1,5 мг/мл.

При робавлении гуанина — 0,92 мг/мл

ГТФ, 0,42 мг/мл ГДФ и 0,7 мг/мл

ГМФ. При добавлении оснований искусственного происхождения, таких как 6-мер-каптопурин, 8-азаденин, 4-тиоурацил, сумма нуклеотидов в виде нуклеозидмоно-! фосфата составляет 1-2 мг/мл.

i2Af желтыи.

Составитель С. Малютина

Редактор Н. Вирко Техред М. Петко Корректор M. Шароши.

Заказ 604/22 Тираж 522 " Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r, Ужгород, ул. Проектная, 4

Нсполь:зопацие предлагаемого штамма позволит упростить технологию получения различных нуклеотидов в производственных условиях для получжптя препаратов, используемых в медицине. 5

Формула изобретения

Штамм Са у адас1епим Э еС И о

ВСТИ-301- продуцент

A ТФ вЂ” аденозинтрифосфат А ДФ вЂ” аденозиндифосфат АМФ вЂ” аденозинмонофосфат

ГТФ вЂ” гуанинтрифосфат нуклеотидов. Хранится в Музее культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика" под номером

ЦМПМВ- 1597.

Культурально- морфологические признаки.

Яйцевидные палочки (0,6-0,9) х(1,53) мкм, иногда встречаются более крупные палочки, Заметного плеоморфизма нет. Расположены парами под углом друг к другу в пакетной упаковке, иногда по одной. Споры и капсулы отсутствуют. Неподвижные.

Мясо-пептонный агар. После 2-х суток роста при 30 С образует круглые колонии диаметром 3-4 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф выпуклый, аморфные, светонепроницаемые, мягкой маслянистой консистенции, цвет желтый.

Рост по штриху умеренный, снизу затягиваюшийся, сверху ограниченный, рельефный, блестяший,,поверхность гладкая, маслянистой консистенции, цвет желтый.

Глюкозо-картофельный агар. После

3 — х суток роста при 30 С образует круг6f 6 лые колонии диаметром 2-3 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф вы— пуклый, аморфные, светонепроницаемые, мягкой маслянистой консистенции, цвет

Среда Чапека с 30 мкг/л биотина, о."

После 3-х суток роста при 30 С образует круглые колонии диаметром 1,01,5 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф выпуклый, аморфные, мягкой маслянистой консистенции, цвет желтый.

Сусло-агар. После 4-х суток роста образует точечные колонии желтого цвета.

Картофель. Рост скудный. Цвет желтый.

Мясо-пептонный бульон. Пятисуточная культура образует слабую равномерную муть. Пленку на поверхности не образует..

ОсадоК желтый, легко взмучиваюшийся, образует равномерную муть.

Физиолого-биохимические признаки.

Грамположительный, микроаэрофил.

Растет при температуре 20-37 С, оптимум — 30 М.

Усваивает глюкозу, мальтозу, инозит, сахарозу. Слабо усваивает дульцит, ксилозу, арабинозу. Не усваивает маннит, сорбит, рамнозу, лактозу.

Глюкозу, сахарозу, мальтозу сбраживает до кислоты.

Ацетилметилкарбинол не образует.

Крахмал не,гидролизует.

Желатину не разжижает.

Индол не образуется.

Сероводород не образуется.

Нитраты редуцирует до нитритов.

Молоко не изменяет.

Целлюлозу не гидролизует.

Каталазная активность положительная.

Уреаза — положительная.