Способ выделения ферментного комплекса

Способ выделения ферментного комплекса

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик п11727681

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 031077 (21) 2528511/28-).3 (5 )М. Кл

С 12 D 13/10 с присоединением заявки ¹

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 150480. Бюллетень Н9 14

Дата опубликования описания 150480 (53) УДК 577,15.08 (088. 8) 1

И. П .Галич, Т.А. Ковальчук, А. П, Пелещук, Н. Я.Фурсова, И.С.Чекман и С.Г.Черноморец (72) Авторы изобретения

Институт биохимии иМ, А.В.Палладина (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ФЕР1лЕН1НОГО КОМПЛЕКСА

Изобретение относится к технологии получения ферментных препаратов, из микробиологического сырья и может быть использовано в ферментной провиыленности, a получаемый комплекс - 5 для. лечения заболеваний печени и желудочно-кишечного тракта.

Известен способ получения ферментного комплекса с протелоитической и амилолитической активностью, вклю- 16 чающий двухступенчатое глубинное культивирование плесневы. грибов Aspergillus oryzae 3-9-15 на питательной среде с добавками карабоната и бикарбоната натрия в количестве 1,5-2Ъ с по-15 следующим отделением мицелия от культуральной жидкости, которую после фильтрации и сгущения используют в пищевой промышленности для улучшения качества мяса и ускорения брожения 2О теста (1) .

Однако получаемый технический препарат-концентрат культуральной жидкости, имеющий протеолитическую активность 20 ед/мл, амилолитическую 25

50 ед/мл, недостаточно очищен и не пригоден для медицинских целей, Наиболее близким к изобретению tIo технической сущности является спОсоб получения ферментного комплекса гриба30

Aspergillus oryzae 8F„, культивируемого при глубинном выращивании в контролируемых условиях (2) .

Способ включает концентрирование фильтрата культуральной жидкости путем вымораживания до содержания сухих веществ бВ, осаждение ферментов этанолом при рН4,8-5,2 и сушку методом сублимации.

Ферментный комплекс, полученный по этому способу, содержит в основном кислую протеиназу и обладает слабой амилолитической активностью. При этом он загрязнен значительными количествами высокомолекулярных органических веществ, что делает непригодным этот комплекс для )применения в медицине.

Целью изобретения является интенсификация процесса, повышение качества целевого продукта и обеспечение возможности использования его в качестве лечебного(препарата.

Поставленная цель достигается тем, что в способе выделения ферментного комплекса с протеолитической и амилолитической активностью", из концейтрата культуральной жидкости плесневого гриба Aspergillus oryzae, предусматривающем осаждение комплекса этанолом и сушку, перед сушкой осажденный

727б 81 ферментный комплекс растворяют в во- " ряют в 32 л ледяной (0-2 С) воды, о де при 1-2 С и доводят рН раствора до доводят рН раствора до 6,9-7,0 при

6,9-7,0, после чего Ферментный комп- осторожном добавлении 2N раствора лекс осаждают из раствора сульфатом едкого натра, после чего прибавляют аммония 0,75-0,80 насыщения с после- равный объем (32 л) 0,25М уксуснодующим диализом водного раствора фер- кислого кальция Выпавшие взвешен5

1 ментного комплекса против 0,005М раст= ные примеси отделяют центрифугиро вора уксуснокислого кальция. ванием и в надосадбчную жидкость при этом сушку ферментного комп- добавляют сухой .сульфат аммония— лекса осуществляют лиофилизацией. 54,5 кг до 0,75 насыщения, При этОм

Сущность изобретения поясняется осаждают ферментные белки, которые примером выполнения способа выделе- .через 1,5 ч отделяют центрифугирония Ферментного комплекса с проте- ванием йри 7000 об/мин. Осадок растолитической и амилолитической актив- воряют в ледяной воде и диализуют но стью, против О, 005М раствора уксуснокислоПример. Исходным сырьем для ro кальция при 4 С до исчезновения выделения .Ферментного комплекса слу- 15 реакции на сульфат-ион. Полученный жат технические препараты типа -раствор ферментов сушат лиофилиза1!

Амилоризин П10х или Амилоризин цией. Поскольку полученный ферментР 10х из плесневого гриба Asper-. ный комплекс предназначен для медиg1llus oryzae. цины, то к нему добавляют сахарозу

10 кг сырья обрабатывают семикрат- Щ в соотношении 1:7, которая одновре. ным количеством воды при комнатной менно стабилизирует препарат и разтемпературе и перемешиванйй в тече- бавляет его для:,гого, чтобы амилоние 2 ч для экстракции ферментов, литическая активность препарата была

К 70 л экстракта при 2 С добавляют порядка 10000 ед/г и протеолитическаяо

162 л охлажденного до 7 С этанола д 220 ед/г препарата, до конечной концентрации 75% для Характеристика и выход очищенного одновременного осаждения протеазы ферментного комплекса из исходного и амилаэы, Выпавший осадок раство- сырья представлены в таблице.

Лмйлолйтйческая

Протеолйтйческай активность активность

Препарат

Выход, г по весу, на l кг сырья ед/г В от исходной ед/г Ъ от исходной

Исходное сырье

170

6200

Очищенный комплекс амилазы и протеазы

105000

20-30

44-50

23-32

1280

100000

Медицинский препарат из комплекса

270-320

44-50

212

Получейййй очищенный Ферментный комплекс с протеолитической и амилолитической активностью предназначен для компенсации .Ферментов кишечника.

При изготовлении из него лечебной форьы лиофилизированный комплекс с добавкой сахароэы помещают в желатиновые капсулы, дважды покрйтые

5Ъ-ным раствором ацетофталатцеллюлозы. такое покрытие обеспечивает сохранность капсул в желудочном соке более 2 ч, а в кишечнике они растворяются в течение 20 мин.

Клинические и лабораторные исоледования Фармакологических свойств полученного .Ферментного комплекса подтверждают его нетоксичность и соот ветствие требованиям, предъявляемым, к лечебным Препаратам.

Формула изобретения;

1. Способ выделения ферментного комплекса с протеолитической и амилолитической активностью из концентрата культуральной жидкости плесневого гриба Asperglllus oryzae, предусматривающий его осаждение этано-. лом и сушку, о т л и ч а ю щ и и е я тем, что, с целью интенсификации процесса, повышения качества целевого продукта и возможности использования его в качестве лечебного препарата, перед сушкой, осажденный ферментный комплекс растворяют в воде

N при 1-2 С и доводят рН раствора до

6,9-7,0, после чего ферментный комп:лекс осаждают из раствора сульфатом . аммония 0,75-0,80 насыщения с после )дующим диализом водного раствора щ,Ферментного комплекса против 0,005M раствора уксуснокислого кальция.

2. Способ по п.1 о т л и ч а юшийся тем, что сушку ферментного комплекса осуществляют лиофилизацйей .

727681

Составитель И.Галич

Редактор Т.Девятко Техред М.Кузьма Корректор М-Демчик

Заказ 1076/26 Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

° 4

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Авторское свидетельство СССР

Р 320528, кл. С 12 D 13/10, 1969.

2. Веселов И.Я., Воронов В.И. и Ильина О..П, Получения ферМентног комплекса гриба Азрегд111из oryzae

8F . Микробиологическая промышленность . . вып.7 (103), 1973, с.22-25.