Штамм 75продуцент -галактозидазы

Штамм 75продуцент -галактозидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

i1т,,;Уу, g I — — < ена

ОПИСАН=ИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик н>727685

1 / =--;

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 150977 (21) 2526193/28-13 (51) м. Ка.2 с присоединением заявки ¹

С 12 К 1/00

С 12 D 13/10

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 15.0480 Бюллетень № 14

Дата опубликования описания 1504.80 с (53) УДК 577. 15 (088. 8) (72) Авторы изобретения

И.К.Лапина, Р,A.Æóêoâà, Б,Е,10абунов, В.A.Ãàëûíêèí, В.Ф.Эттингер, В.К.Грекова, А.С.Тихомирова,.Н.Н,Момот и И,Н.Куликова

Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (71) Заявитель (54) )ШТАММ Curvular ia inaequa 1 is 75 — ПРОДУЦЕНТ

Р-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности, к получению гидролитических ферментов, Предлагаемое изобретение касается штамма — продуцента фермента В-галак- 5 тоэидазы, обладающего способностью расщеплять лактоэу на глюкозу и галактозу и предназначается для лечения заболеваний, вызванных отсутствием или недостаточностью в организме 1О р-.ãàëàêòoçèäàsû, что особенно часто встречается у грудных детей.

Наиболее близким IIo техчической сущности к заявленному является штамм 7 Curvularia inalqualis, кото- 15 ..рый обеспечивает уровень активности в культуральной жидкости 1,4-1, 8ед/мл при росте на среде с лимонной кислотой (1).

Культурально-морфологические и 20 физиологические признаки штамма, Размер спор варьирует от 12 до

26 мкм. Преобладают споры с 4-мя поперечными перегородками. Споры изогнуты, концы спор округлые. Кони- 25 диеносцы коричневые, септированные, простые, иногда. разветвленные, коленчатые на концах.

Агаризованная среда Чапека с глюкозой: 30

Колонии на 7-mac сутки роста 6 см в диаметре, круглые, с ровным краем, зональные — от мраморно-розовых по краю до бледно-серовато-фиолетовых (по шкале,Бондарцева, 1954 г). Воздушный мицелий обильный. Обратная сторона колонии бледно-песочная. Среда не окрашена.

Органическая с переваром Хоттингера:

Колонии круглые 9,5-10 см с ровным краем, Окраска колонии тональная: от малиновой по краю до мышино-серой в центре. Воздушный мицелий прижатый войлочный. Обратные стороны колонии от малиновой до темно-оливковой.

Среда не окрашена, Дрожжевая с лактозой:

Колонии круглые, 6,5-8 см, с ровным краем, от розовато-лилового цвета по краю до белесоватого к центру, Воздушный мицелий слаборазвитый, прижатый, Обратная сторона колонии желтовато-буроватая. Среда не окрашена.

Пептонно-кукурузная:

Колонии круглые, 4,5-6 см, с неровным краем, складчатые, эональные— от бледно-розового по кран, до бледносеровато-фиолетового к центру. ВоэдушНый мицелий прижатый, войлочный. Об727685

Активность р-галактозидазы, ед/мл

1 80 80,0

3,2

72,0

),8 ратная сторона колонии охряно-желтая ;

Среда не окрашена, Сусло-агар, .

Колонии круглые, 8,5-10 см, с ровным краем, зональные, от темно-серых до мышино-серых. Воздушный мицелий прижатый, войлочный, Обратная сторона черного цвета,. Среда не окрашена, Минимальная с лактозой, Колонии 4,5-6 см, круглые, плос кие, с ровным краем, бледно-серовато- !О фиолетовые. Воздушный мицелий слабо развит, Обратная сторона колонии зональная — от темно-песочного до темно-дымчатого. Среда не окрашена, Физиолого-биохимические признаки. )5

Молоко пептонизирует, крахмал не гидролиэует, желатину разжижает, нитраты восстанавливает. На клетчатке рост слабый. На среде ПридхэмаРоттлиба с 1% углеводов хорошо растет с глюкозой, сахароэой, рамноэой, ксилозой, фруктоэой, иноэитом и маннитом, Однако, в связи с необходимостью интенсификации процесса производства р-галактоэидазы и удешевления его, очень существенным является выведение более продуктивных штаммов-продуц/нтов, способных обраэонывать

pi-галактозидазу на средах без дороГостояших компонентов, С этой целью селекцинирован новый штамм 75 Curvularia inaequalis, полученный иэ штамма 7 методом пассажей.

Селекционированный штамм Curvularia inaequalis 75 существенно отли1 чается от исходного штамма 7 по ряду

" морфолого-культуральных и физиологических признаков, а гланное тем, что штамм 75 образует р-галактозидаэу на среде беэ лимонной кислоты следуюшего 40 состава, Ъ: соевая мука 3; Na

Размер колоний на 2-е сут роста

3,5-4,5 см, колонии круглые, с неровным краем, зональные. Воздушный мицелий обильный, шерстистый, от мышино -серого до пепепьно-серого цвета, 40 обратная сторона колонии от охристого до темно-оливкового. Среда не окрашена.

Органическая с переваром Хоттин;гера.

Колонии круглые, 2-3 см, с неровным краем, зональные — от темно-серых по краю до темно-пепельных к центру.

Воздушный мицелий войлочный, обильный, обратная сторона колонии темнооливкого цвета, Среда не окрашена. дрожжевая с лактозой.

Колонии 3,5-5 см, круглые, с ровным краем, зональные — по краю бледно-серовато-фиОлетовые, к центру— темно-серые. Воздушный мицелий обильный, войлочный, обратная сторона колоний — темно-умбровая, Среда не окрашена °

Сусло-агар.

Колонии круглые, 2,5-3 см, с неровным краем, сильно выпуклые, складчатые, мышино-серого цвета. Воздушный мицелий войлочный. Обратная сторона колонии складчатая, шиферного цвета, Среда не окраиена.

Минимальная с лактозой, Колонии круглые 5,6-7 см, круглые с ровным краем, темно-пепельные, плоские. Воздушный мицелий слабо развит. Обратная сторона колоний зональная — от темно-умбрового до темно-дымчатого. Среда не окраиена.

Физиолого-биохимические признаки.

Молоко не пептонизирует. Крахмал гидролизует хорошо, желатину разжижает, Нитраты восстанавливает. На клетчатке рост слабый. Хорошо растет на средах с инозитом, глюкозой, рафиноэой, рамнозой, ксилоэой, сахароэой, арабинозой, фруктозой. Слабо— на среде с маннитом.

Средняя актинность штамма 75 в колбах емкостью 750 мл со 100 мл среды следуюшего состава, Ъ: соевая мука 3,0, Na

ЯО4 0,015, На 4 сутки составляет 3,0 ед/мл.

Пример 1 ° Ферментацию продуцента Р -галактоэидазы шт, 75 проводи- ли н сто литровых ферментаторах опытной установки ВНИИТИАФ на среде с З,ОЪ соевой муки, 2,5-3,0%

Na

Результаты операций приведеныв табл.1.

Таблица l

Результаты по культивированию

Curvularia inaequa1 is штамма 75 в аппаратах

727685

Т ..1

4,2

Объем питательной среды, мл

) 4,0

100

90

3,5

2,0

3,0

2,5

0i 3* Тираж 522 Подписное

Ужгород, ул. Проект на я, Продолжение таблицы1

4 †— 100,0, 3,0

5 †- 84,Ь " 2,8

Пример 2, Биосинтез 1-галактоэидаэы штаммом 75 Сйгчл1аг1а 1.naequalis приводили.в качалочных колбах на 750 мл, содержащих rio 100 мл питательной среды аналогичного состава. рН 3,0-3,2 после стерилизации. Процесс культивирования проводили при

28оС в течение 72-96 ч. Посевной материал выращивали в течение 72-96 ч на качалке с числом оборотов 200220 об/мин (табл,2) .

Т а б л и ц а 2

Длительность Активность ферментации, р-галакточ зидазы, ед/мл.* Ферментация штамма Curvularia, inaequalis на среде без лимонной кислоты, Экономический эффект может быть

:получен при использовании разработанной оптимальной питательной среды, не содержащей дорогостоящего сырья лимонной кислоты (6 руб/кг).

Таким образом, стоимость 100 ед.

Р-галактоэидазы на стадии ферментации снижается в 7-7,5 раз.

Формула изобретения

Штамм Curvularia inaequalis 75— продуцент Р -галактозидазы хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения под номером Т-139.

Культурально-морфологические признаки.

Размер спор 12-26 мкм, Преоблада.ют споры с четырьмя перегородками—

ЦНИИЛИ Заказ 1076/26

Филиал 1iilI1 Патент, г.

55,0%, встречаются споры с двумя и пятью перегородками. Споры изогнуты> концы спор круглые, Конидиеносцы коричневые септированные, простые, иногда разветвленные, коленчатые на концах, Агариэованная среда Чапека с глюкозой;:

Колонии 3,5-4,5 см в диаметре, круглые, с неровным краем зональные.

Воздушный мицелий обильный, шерстистый,,,от машино-серого до пепельносерсгл цвета, Обратная сторона колонии бт охристого до темно-оливкового, Среда не окрашена.

Дрожжевая с лактоэой.

Колонии круглые 2,5-5 см, с ровным краем зональные 1по краю бледносеровато-фиолетовые, к центру — темно-серые. Воздушный мицелий прижатый, войлочный, с обратной стороны колонии темно-умбровый, Пигмента нет.

Пептонно-кукурузная.

Колонии 3-3,5 см, круглые, с неровным краем, зональные, от темнопепельных по краю до серовато-фиолетовым к центру. Воздушный мицелий войлочный, обильный. Обратная сторона колонии темно-серая. Среда не окрашена.

Органическая с переваром Хоттингера.

Колонии 2-3 см, круглые, с неровным краем, зональные, от темно-серых по краю до темно-пепельных к центру.

Воздушный мицелий войлочный, обильНый, обратная сторойа колонии темнооливкового цвета. Среда не окрашена, Сусло-агар.

Колонии 2,5-3 см, круглые с неровным краем, сильно выпуклые, складчатые, мышино-серые. Воздушный мицелий войлочный, Обратная сторона колонии складчатая, шиферного цвета, Среда не окрашена, Минимальная с лактоэой.

Колонии 5,6-7 см, круглые, с ровным краем, темно-пепельные, плоские, воздушный мицелий слабораэвитый. Обратная стброна колоний эональная— от темно-умбрового до темно-дымчатого. Среда не окрашена.

Физико-биохимические признаки.

Молоко не пептонизирует. Крахмал гидролизует хорошо. Желатину разжижает. Нитраты восстанавливает, На клетчатке растет слабо, На среде

Придхэма-Готтлиба с 1% углеводов хорошо растет в присутствии инозита, глюкозы, рафинозы, рамнозы, ксилоэы, сахаровы, арабинозы, фруктозы. Слабо растет на среде с маннитом.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1, Авторское свидетельство СССР

Ф 480759, кл, С 12 D 13/10, 1972 (прототип) .