Способ получения циклического тетрадекапептида или его солей

Способ получения циклического тетрадекапептида или его солей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРКтЕНИЯ "" ЗО2

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (6! ) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 2004,78(21) 2607708/23-04 (23) Приоритет (32) 21.04.77 (51) М. Кл.

С 07 С 103/52//

A 61 К 37/02

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (33) СШд (3! ) 789472 (5З) УД 547 ° 964. 4, .07(088.8) Опубликовано 250480. Бюллетень 36 15

Дата опубликования описания 2804.80

Иностранец

Джеймс Эдвин Шилдс (CttIA) (72) Автор изобретения

Иностранная фирма

Эли Лилли энд Компани (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИКЛИЧЕСКОГО ТЕТРАДЕКАПЕПТИДД

ИЛИ ЕГО СОЛЕЙ

Изобретение относится к способу получения нового циклического .тетоа— декапептида формулы H-D-Вал-Гли-)-Цис-) -Лиз-L-Лсп- L-Фен-t -Cez- Ь-Tpn-l, -Лиз-L-Tpe- — Фен — L-Tpe-Ь -Cep-)4 5

-Цис-ОН (Д-Вал -соматостатина) или

tro солей — биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине ..

Известен способ замыкания дисульфидного мостика между двумя сульфигидрильными группами, присутствующих в молекуле полипептида цистеинов путем окисления кислородом воздуха, "широко использующийся в пептидной химии (11, !

Ь

Цель изобретения — получение нового циклического тетрадекапептида или его солей, обладающих интересными фармакологическими свойствами.

Это достигается известным способом получения циклического тетрадекапептида формулы 1: H-D-Вал-L-Гли-!.-Цис-L-Лиз-L-Añï-L-Фен-Ь-Фен-!—

Ж

-ТРп-L-Лиз-! -Tpe-! -Фен-L-Tpe-L-Ñåð— -Цис-ОН или его солей, заключающийся в том, что соответствующий прямоцепочечный тетрадекапептид формулы П: Н-D — Вал — Гли-!.-Цис-!.—

-Лиз — L-Асп-1, -Фен — L- em-L-Трп-! -Лиз-L-Tpe-L — Фен-L — Тре-)„-Cep-L-Цис- ОН подвЕргают взаимодействию с окисляющим агентом.

Кроме того, в качестве окисляющего агента. используют кислород воздуха.

Для получения продукта формулы I тетрадекапептид с линейной цепью обрабатывают в условиях, которые вызывают его окисление, путем превращения двух сульфгидрильных групп, присутствующих в молекуле по одной у каждой цистеинильной половины, в дисульфидный мостик. Это может быть осуществлено путем обработки разбавленного раствора линейного тетрадекапептида любым из разнообразных окисляющих агентов, включая, íапример, йод и ферроцианид калия. Воздух также. может применяться в качестве окисляющего агента, рН смеси при этом обычно от 2,5 до 9,0 и предпочтительнее от

7,0 до 7,6 ° Когда в качестве окисляющего агента применяют воздух, то концентрация раствора пептида составляет обычно не более 0,4 мг пептида на миллилитр раствора и обычно около

50 мг/мл.

Фармацевтически приемлемые нетоксичные аддитивные кислотные соли включают соли органических и неорганичес730295

Формула изобретения

Составитель В.Волкова

Редактор C.Ñóðêîâà Техред И.Аcтaлoш Корректор В.Бутяга

Заказ 1345/57 Тираж 495 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д. 4/5

Филиал ППП Патент ., r.Óæãopoä, ул. Проектная, 4 ких кислот, например, хлористоводородной, серной, сульфоновой, винной, фумаровой, бромистоводородной, гликолевой, лимонной, малеиновой, фосфорной

l янтарной, уксусной, азотной бензойной, аскорбиновой, пара-толуолсульфоновой, сульфобензоловой, сульфонафталиновой и пропионовой. Предпочтительнее аддитивные соли, получаемые из уксусной кислоты. Любая из перечисленных солей" может быть получена обычным методом.

Пример. Окисление в Д Вал-соматостатин.

Раствор восстановленного Д-Вал

-соматостатина (374 мл, теоретически

175 мг) разбавляют 147 мл 0,2 М уксус- ной кислоты и 2967 мл дистиллированной воды для достижения концентрации 50 мкг/мл. Для доведения рН смеси до 6,7 добавляют концентрированную гидроокись аммония. Раствор переме- 20 шивают при комнатной температуре в темноте 64 ч. Титрованием по Эллману показывают окончание окисления.

Смесь концентрируют в вакууме до

10 мл. Концентрат разбавляют 10 мл ледяной уксусной кислоты и обессоливают, пропуская через колонку с Се=фадесом С-25 Г (размеры колонки

5,0х90 см); продукт элюируют при температуре 26 С дегаэированной 50%-ной уксусной кислотой, скорость элюирования: 246 мл/ч, объем собираемых фракций — 16,4 мл, За ходом очистки следят по поглощению фракций при

280 мкм, Фракции РУ 49-64 (7871050 мл) собирают, лиофилизуют в темноте ° Сухой продукт растворяют в

15 мл дегазированной 0,2 М уксусной кислоты и раствор помещают в колонку с сефадексом С-25 г. Хроматографирование ведут в следующих условиях: раст- 40 воритель — дегазирования 0,2 N уксусная кислота, температура 26 С, скорость потока 475 мл/ч, объем собираемых фракций — 16,6 мл, размер колонки 5,0х150 см. За ходом хрома- 4с тографии следят слектрофэтометрически при 280 ммк. Собирают фракции

РУ 157-172 (2590-2855 мл), пик 2667 и 280 ммк, объединенные фракции лиофилизуют досуха в темноте. Методом ультрафиолетовой спектроскопии показано присутствие в сухой массе 95 мт продуКта (выход из восстановленной формы 54, 3%), Полученный продукт растворяют

55 в 5 мя 50%-ной уксусной кислоты и вновь хроматографируют в колонке с сефадексом C-25 г, В следующих условиях: дегаэированная 50%-ная уксуснаяя кислот а, температура 26 С скорость потока 53, 2 мл/ч, объем фракций 8, 87 мл, размеры колонки

2,5х180 см.

Мера поглощения света при 280 ммк каждой фракции, нанесенная в зависимости от номера фракции, показывает на кривой один большой пик. Фракции

99 58-60 (488-532 мл), пик 505 при

280 ммк объединяют, лиофилиэуют в темноте. досуха.

26 о

Получают продукт с (> -42,1 (c-=1Ъ, в уксусной кислоте), аминокислотный анализ: 0,98 Вал, 1,1 2 Цис, 1,81 2 Лиз, 0,95 Асп, 2,94 3 Фен, 0,80 Трп, 1,91 2 Тре,,0,85 Сер. Отношение (Гли+Лиэ):3=1.

Проведены следующие три 21 часовых гидролиэа:

1) в присутствии диметилсульфоксида для окисления цистеина в цистеиновую кислоту;

2) удаление тиогликолевой кислоты

3) без удаления или окисления

Все полученные величины — средние значения трех гидролиэов, за исключением следующих: Пис и Сер только

1/ и 2/; Трп только 2/, Фен только

2/ и 3/, 1. Способ получения циклического тетрадекапептида формулы 1: И-Э-Вал-Гли-) -Цис-L -Ли з - L-Асп-) -Фен — )-Фе н-)-Трп-L Ëèç-L-Tpe-L-Фен-Ь-Тре-1-Cep-Ь-Цис - ОН или его солей, о тл и ч а ю шийся тем, что соответствующий прямоцепочечный тетрадекапептид формулы П: Н-D-Вал-Гли-Ь-Цис-)-Лиэ-1 -Асп-(.-Фен-1 -Фен-1 -ТРп — 1,-Лиз—

-L-Тре-L -Фен-L-Tpe-L-Cep-L-Цис-OH подвергают взаимодействию с окисляющим агентом.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве окисляющего агента используют кислород воздуха.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Шредер 3. и Любке К. Пептиды, ч,1, М.1 Мир, 1967, с. 350.