Модифицированный террилитином декстран, обладающий фибринолитической активностью

Модифицированный террилитином декстран, обладающий фибринолитической активностью

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ноя петен но тмлн 1,.С1

ОП ИСAЙИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

c-". Я

Союз Советски к

Социалистических

Республик й17730694

Ф

C

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (б! ) Дополнительное к ввт. свид-ву— (22) Заявлено 05.07.76 (21) 2385858/23-05 с присоединением заявки РЙ (23) Приоритет— (51) М. Кл, С 08 В 37/02

Гасударстееннмй комитет

Опубликовано 30.04.80. Бюллетень Ж 16 (53) УДК547.458 .58 (088.8) аа делам изобретений н открытий

Дата опубликования описания 30.04.80

A. Г. Алексеева, Г, Е. Гринберг, Г. М. Линденбаум, О. А. Миргородская, Б, В. Москвичев, P. С. -Садуллаев, А. А. Селезнева и,И. М. Терешкин (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (7I ) Заяви1ель (54) МОДИФИЦИРОВАННЫЙ ТЕРРИЛИТИНОМ ДЕКСТРАН, ОБЛАДАЮЩИЙ ФИБРИНОЛИТИт1ЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к области производных декстрана, обладающих ферментативной активностью, в частности фибринолитической, которые могут быть использованы в качестве лекарственных препаратов в медицине.

Известны производные поливинилпирролицона, обладающие протеолитической активностью 1)

Однако указанные производные поли- винилпирролидона при парзнтеральном введении из-за отсутствия биосовместимости накапливаются в тканях и органах, приводя в дальнейшем к патологическим изменениям в них.

Наиболее близкими к изобретению являются производные декстранов, представляющие собой продукты модификации декстранов низкомолекулярными физиологически активными веществами — биоло- 20 гическими аминами, такими как норадреналин общей формулы (СИ О) (СН 0И Нор) (СБ ()) где Нор — норадреналин, х = 20-80 4 — доля неокисленных звеньев декстрана, QqZ = 20 - 80Ъ вЂ” доля окисленных звеньев декстрана.

Производные декстранов получают обработкой декстранов физиологически активными веществами и водном растворе

12

Однако известные производные декстранов не обладают энзиматической акти вн ос тью, 11ель изобретения — получение физиологически .активных водорастворимых производных декстранов, обладающих энзима тической, в частности фибринолити,ческой

GKT H BHOC TbIO.

Поставленная пель достигается получением протеолитического фермента террилитина, присоединенного к окисленному. декстрану азометиновой связью с последующим восстановлением этой связи и избытка альдегидных групп полимера-носителя.

Взаимодействие лекстрана с молекулярной массой от 0 тыс. цо 110 п>с. 1 окисленного до степени окисления 6-48 с террилитином, осуществляют в водном буферном растворе при рП 7,5-10,0, температуре 15-25 С, в течение 15-180 мин при соотношении реагентов в реакционной смеси (цекстрана и фермента) от

10: 1 до 1 2: 1.

Модифицированные террилитином про- 1о изводные декстрана после очистки диализом выделяют вместе с полимером или отделяют от избытка не вступившего в реакцию фермента с помощью гель-хроматографии и высушивают лиофильно известными способами. Orrrr имеют общую формулу (Сьй4оО ) х(С H() О Р4 (C 1о 4 22! гце Тер — протеолитический фермент террилитин; 20 х = 52 — 94" . — доля неокисленных звеньев цекстрана;

gsz= 6 — 48" — доля окисленных звеньев цекстрана.

Пример. 165 мг цекстрана с молекулярным весом 20 тыс., растворенного в 3,3 мл воды (концентрация

50 мгlмл) и окисленного цо степени окисления =24, смен;ивают с 4,9 мл раствора террилитина в 0,1 M боратном буфере с рН 8,5, содержащего 82 мг сухого фермента с удельной активностью

20 ПЕ/мг и общей активностью 1640 ПЕ;

Реакционную смесь перемешивают при о

21+1 С в течение 2 ч при рН 8,5. Затем добавляют 1 мл 0 1 М раствора боратного буфера, содержащего 40 vò боргидрида натрия, и перемешивание провоо дят при 21+1 С в течение 40 мин.

П олуче нный препарат м оцифици рова нного ферментом декстрана циализуют на о холопу (4+2 С) против дистиллированной воды в течение 48 ч и лиофильно вь>- 4 сушивают. Получают 235 мг сухого препарата с удельной активностью7,4ПЕ/мг и общей активностью 1740 ПЕ. Выход

730604 > пролукта состаrvrяст .100" от»>еленной энзи мати ческ ой акти вности.

Пол степенью окислен«и (g ) понимают число окисленных звеньев цекстрана, приходящееся на 100 элементарных звеньев декстрана.

В таблице приведены ца>шь>е по фибрин >литической активности и степени ингибирования сывороткой крови человека нативных протеолитических ферментов (трипсина, террилитина) и моцифииированных протеолитическим ферментом (тер рилитином) производных цекстрана.

Предлагаемые физиологически активные воцорастворимые производные цекстранов, облацаюшие энзиматической, в том числе фибринолитической активностью, могут быть использованы в медицинской практике при лечении гнойных ран, ожогов, воспалительных заболеваний и в качестве тромболитических препаратов.

Препараты могут также найти применение при разработке технологических процессов гицролиза белков под действием модифицированньrx гицролитических фермен— тов, позволяюших эффекти вно провоцить эти процессы в мембраннь>х реакторах.

Модифицированные террилитином .производные цекстранов являются физиологически активными препаратами, причем в процессе модификации протеолитическая активность террилитина практически rre изменяется, в то время как увеличение молекулярного веса получаемых препаратов B сравнении с натив ым ферментом обуславливает меньшу-ю скорость его выведения из организма.

Моди>1>ицированные террилитином про— извоцнь>е цекстранов ингибируются сывороткой крови в значительно меньшей степени, чем нативные фермент»> (трипсин, террилитин), что является их преимушеством.

Лля промышленного получения препаратов аппаратурное оформление процесса не требует каких — либо новых (в сравнении с известными способами) элементов оборудования.

730694

Трипсин

0,06

1,0

Террилитин

0,25

4,2

Лекстран модифициро ванный террилитином

1,02

17,0

J OE- количество сыворотки, необход«мое для ингибирования одной ед аониды протеол— тической казеинолитической) акти вност на 50" х = 52",— 94" — доля неокисленных звеньев декстрана;

Составитель Т. Мартинская

Редактор Т. Киселева Техред H. Бабурка Корректор . Веселовская

Заказ 1451/8 Тираж 549 По дни с ное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по.делам изобретений и открытчй

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. д. 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

Модифицированный террилитином декстран общей формулы (С Н О ) (1 1 30 ИН-1еР)y(C Н(0 ) где Тер — протеолитический фермент тер— рилитин;

У Z = 6 -48", — доля окисленных звеньев декстрана; обладающий фибринолитической активностью.

Источники информации, 35 принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР № 522198, кл. С 08 F 271/02, 1975, 2, Патент ГДР ¹ 90197, кл.

40 кл. 30 H 2/30, опублик. 1973 (прототип) .