Патент 732381

Штамм 28-3(вкм а-588)-продуцент глюкозоизомеразы

 

1 па;*

О и И С А- Н-И-аИ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

<1ц 732381

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 130477 (21) 2477281/28-13

Р1) М. КЛ.2

С 12 D 13/10 с присоединением заявки ¹â€”

Государственный комитеСССР ио делам изобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 050580. Бюллетень № 17

Дата опубликования описания 080580 (53) УДК 5 7 6 . 872 . 1 (088. 8) И.М. Грачева, В.Д. К„знецов, А.В. Гавристов, М.A. Петрова и М.С. Мосичев (72) Авторы изобретения

Московский ордена Трудового Красного Знамени . (71 ) Заявители технологический инститУт пищевой пРоьыаленности и Институт микробиологии AH СССР (54) ШТАММ ACTINONYCES AZBOGRISEOLUS 28-3 (ВКМ A-588) -ПРОДУЦЕНТ ГЛЮКОЗОИЗОМЕРАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промымпенности и касается получения ферментов.

Известен штамм Streptomyces aIbus

ATCC 21132 — продуцент глюкозоиэомераэы (l j .

Недостатком данного штамма является его невысокая продуктивность и фермент ативная активность (4-5

Гл ИЕ/мл бел к а ) .

Обладающий повышенной способностью к биосинтеэу внутриклеточной глюкоэоиэомераэы и высокой продуктивностью, штамм Actinomyces aIbogriseoIus 28-3 (BKM A-588) выделен из образцов почвы. Хранится в коллекции

МТИПП под номером 28-з и во Всесоюзной Коллекции Микроорганизмов под номером ВКМ A-588.

Культуральчо-морфологические признаки.

Спороносцы спиральные, спирали растянутые от двух до шести завитков.

Споры овальные с гладкой и бородавчатой поверхностью.

Синтетическая среда CP-1 с-глюкозой. Воздушный мицелий скудный, мелово-белый (ДЗ) . Субстратный мицелий палевый (04); пи t мента нет, Среда Ваксмана. Воздушный мицелий- очень скудный, белесоватый (Д1) .

Субстратный мицелий темно-кремовый (06); пигмента нет.

Среда Гаузе Р 1. Воздушный мице- лий развит слабо, мхаино-серый (A4), Субстратный мицелий темно-кремовый (06) пигмента нет

Соевая среда. Воздушный мицелий скудный, мучнистый, палевый (О 4) субстратный мицелий золотисто-желтый (М7); пигмента нет.

Овсяная среда. Воздушный мицелий развит умеренно, темно-пепельный (В4) . Субстратный мицелий темно-кремовый (06); пигмента нет.

Среда .гаузе 9 2. Воздушный мицелий развит отдельными островками, белесоватый (Д1). Субстратный мицелий бледно-медовый (ПЗ); пигмента нет.

Кукурузная среда В 2. Воздушный мицелий отсутствует, штрих сильно развит, складчатый. .Субстратный мицелий темно-кремовый (06); пиrмента нет.

Окраска мицелия дана по-шкале

Бонарцева.

Физиолого-биохимические свойства.

732381

Формула изобретения

Штамм Act i nomy ce s a I bog r i s col us

28-3 (BKN A-588) — продуцент глюко2О зоизомеразы. Хранится н коллекции

МТИПП под номером 28-3 и во Всесоюзной Коллекции Микроорганизмов под номером BKM А-588.

Культурально-формологические признаки.

Спороносцы спиральные, спирали растянутые от двух до шести витков °

Споры овальные с гладкой и бородавчатой поверхностью.

Синтетическая среда CP-1 с глюко30 зой. Воздушный мицелий скудный ме-лово-белый. Субстратный мицелий палевый, пигмента нет.

Среда Ваксмана.,Воздушный мицелий очень скудный, белесоватый. Субстратный мицелий тепно-кремовый; пигмента нет.

Среда Гаузе Р 1. Воздушный мицелий развит слабо, мымрино-серый. Субстратный мицелий темно-кремовый;

40 пигмента нет.

Соевая среда ° Воздушный мицелий скудный, мучнистый, палевый. Субстратный мицелий золотисно-желтый; пигмента нет.

Ов сян ая среда. Воздушный ми цели и развит умеренно, темно-пепельный.

Субстратный мицелий темно-кремовый; пигмента нет.

Среда Гауэе 9 2. Воздушный мицелий развит отдельными островками, белесоватый. Субстратный мицелий бледно-медовый; пи гмент а нет .

Кукурузная среда 9 2. Воздушный мицелий отсутствует, штрих сильно развит, складчатый. Субстратный мицедий темно-кремовый, пигмента нет, Физиолого-биохимические свойства.

Аэрофил, оптимум температуры выращивания около 30 C.

60 Культура не образует меланоидного пигмента, КрахМал гидролизует .

Желатину разжижает.

Молоко не коагулирует и не пептонизирует.

Азрофил, оптимум температуры выращивания около 30 С.

Культура не образует меланоидного пи гмента.

Крахмал гидролиэует (эона гидролиза 3 мм), Желатину разжижает.

Молоко не коагулирует и не пептони зирует .

Отношение к углеводам. Усваинает

Д-глюкозу, сахароэу, Д-ксилоэу, i-инозит, Д-маннит, Д-фруктозу, рамнозу. Не усваивает рафиноэу.

Пример . Штамм Actinomyces а1Ьоуг1 seoIus 28-3 (BKM А-588) выращивают в течение семи суток на скошенном ксилоэо-крахмальном агаре в пробирках. Состав среды, Ъ:

Растворимый картофельный кр ахмал 1,0

Д-ксилоза 1/О

Пептон 1,0

Дрожжевой эк страк т 0,5

MgSOq ° 7Н О 0,1

СоС1 ° 6Н О О, 024

Агар (Difco ) 2,0 рН среды до стерилизации 7,0, стерилизация при О, 5 ати в течение

30 мин, Полученным споровым материалом засевают колбы, содержащие по 35 мл основной питательной среды следующего состава, Ъ: Д-ксилоза 1гО

Пептон 1,0

Дрожжевой экстракт 1i0

К НРО(0,3

MgSOó 7Н О 0,1

Агар (ПхХco ) 0,1 рН среды до ст ерили з ации 5, 5, ст ерилизация при 0,5 ати в течение 30 мин.

Колбы с засеянной питательной средой помещают на круговые Качалки (200 об/мин) . Температура культивирования ЗОО С. Выращенный в течение

48 ч инокулят (5 мл) используют для засева 50 мл свежей основной пита- тельной среды. Культивирование продуцента на второй стадии проводят в течение 24 ч, как на первой стадии °

Полученную культуральную жидкость центрифугируют в течение 15 мин при . 5000 эб/мин; отделенную биомассу дважды промывают дистиллированной водой, разрушают и центрифугируют в течение 25 мин при 8000 об/мин. Полученный супернатант используют в качестве ферментного препарата. )ри определении актинности реакцию иэомеризации пронодят в смеси следующего состава, мл:

0,2 М фосфатный буфер (рН 7, 0) 2,5 2,5

1 М Д-глюкоза 1,0

О, 1 М MgsO<" ° 7Н О 0,5

Ферментный прейарат 1, О

Общий объем смеси доводят дистиллированной водой до 10 мл. Реакцию.проводят в водявой бане при 70С С в течение 60 мин, и останавливают добавляя равный объем О, 5 М HCF . Ко личество образовавшейся Д-фруктозы определяют цистеин-карбазольным методом. 3а единицу активности глюкоэоизомеразы принимают количество фермента, которое приводит к образованию

1 мл Д-фруктозы н течение 1 ч при

70 С в среде приведенного состава.

Удельная активность глюкозоиэомеразы в полученном ITpenapaTe

8-9,5 ГлИЕ/мг белка. Количество биомассы по сухому весу колеблется от

10 до 14 кг/мл среды.

732381

Составит ель Н . Г. Бондаре н ко

Редан гор Т. Шарганова Техред у Петко Корректор E.Ïàïï

Заказ 1ь5 /17 Тираж 522 Подписное

ПНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д..4/5

Л:.:тлиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Отношение к углеводам. Усваивает

Д-глюкозу, Д-ксилозу, сахарозу, 1-иноэит, Д-маннит; Д-фруктозу, рамнозу. Не, усваивает рафинсзу.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент CltIA М 3ol0221, кл. 195-31, опублик. 1971.