Способ получения рнк-полимеразы

Способ получения рнк-полимеразы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик у

ИЗОБРЕТЕИИЯ ()734262

«+

;Ф

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 1601.78 (21) 2570757/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет—

Опубликовано 1505.80. Ьюллетень ¹ 18

Дата опубликования описания 150580 (()М К 2

С 12 0 13/10

Государственный. комитет

СCCP по делам изобретений и открытий (53) УДК.557. 15 (088. 8) (72) Авт оры изобретения

В.П. Панкратов, Э.И. Лежнев и С.М. Гайнуллина (71) Заявитель

Институт биологической физики АН СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ!

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения PHK-полимеразы.

Известен способ получения PHK-полимеразы путем глубинного культивирования бактерий Escherichia coIi на питательной среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода, а также источники азота, фосфора и минеральные соли, с последующим выделением целевого продукта {1).

Недостатками известного способа являются невысокий выход и низкая активность РНК-полимеразы.

Пель изобретения — повышение выхода и активности фермента. указанная цель достигается тем, что бактерии культивируют на питательной среде прн исходной концентрации глюкозы 0,35-0,5 г/л до полного ее потребления, выдерживают в течение 20-80 мин, после чего в культуральную жидкость добавляют глюкозу в количестве 0,5-3,5 г/л.

После полного потребления лимитирующего компонента происходит генерация микроорганизмов. Импульсная добавка избытка глюкозы вызывает активное деление клеток. Рост клеток непрерывно контролируют. Во время наиболее интенсивного роста клеток процесс останавливают, понижая температуру и прекращая подачу кислорода. При этом получают культуру клеток, большая часть которых находится в одинакоаом физиологическом состоянии и обладает высокой PHK-полимеразной активностью.

Пример. Бактерии Е. сое1 выращивают на питательной среде следующего состава, г/л: КН РОл- 3;

Na HP04.12Нз0 — 15; МдзОл — О, 2;

ИНтС1 — l; глюкоза — 0,45. Исходная, койцентрация клеток в среде — 1к

15 к10ькл/мп. Культивирование ведут при температуре 37 С, рН 7,0. Аэрацию осуществляют барботировкой газа с одновременным перемешиванием среды и распылением жидкости. С помощью

2О кислородного датчика следят за отсутствием лимита по растворенному кислороду. В момент исчерпания глюкозы в среде концентрация клеток составляет 3 10 кл/мл. Через 35 мин

25 после полного потребления источника углерода в среду добавляют 0,5г/л глюкозы. Рост клеток контролируют непрерывно при помощи проточной кюветы.

Когда концентрация клеток достигает

ЗО 5 -10вкл/мл, прекращают прдачу кисло734262

Формула изобретения

Составитель Т. Мелентьева

Редактор Н. Потапова Техред А.Щепанская

Корректор Г.Решетник

Подписное

Заказ 2007/35 . Тираж 522

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, X-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 рода и быстро понижают температуру среды до +бои, продувая охлажденный до -40ОС азот Клетки отделяют центрифугированием и выделяют PHK — полимеразу известным методом. Выход фермента 12 мг/мл, активность 15000 ед/мг белка.

Предлагаемый способ позволяет получить РНК-полимеразу с хорошим выходом и высокой активностью.

Способ получения РНК-полимераэы путем глубинного культивирования бактерий Escherichia coXi нау. 15 питательной среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода, азота, а также источники фосфора и минеральные соли с последующим выделением целевого продукта, о т л и ч а юй c sl тем, что, с целью повыщения выхода и активности фермента, бактерии культивируют иа питательной среде при исходной концентрации глюкозы 0,35-0,5 г/л до полного ее потребления, выдерживают в течение 2080 мнн, после чего добавляют в культуральную жидкость глюкозу в количестве 0,5-3,5 г/л.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе, .1.6ещ Chcamt)eré еп РМысай audie s on

Rit,onvcQe1с "Асей PoQvmeraee from зcher