Штамм вниигенетика-6,продуцирующий глюкоамилазу

Штамм вниигенетика-6,продуцирующий глюкоамилазу

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

CoIo3 Советских

Социалистических

Республик ря734263 (61) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 280278 (21) 2585685/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 150580. Бюллетень 8918

Дата опубликования описания 150580 (51)М. Кл.

С 12 П 13/10

С 12 К 1/00

Государственный комитет

СССР по дедам изобретений и открытий (53) УДК 57 7 . 15.. 07 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Л.И. Ерохина и В.В. Иванова

Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (71) Заявитель (54) ШТАММ А5РЕЙ6111 О5 NIGE R ВНИИГЕНЕТИКА-6, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ ГЛЮКОАМ ИЛА 3 У

Изобретение относится к микробиологической промышленности„ а именно, к производству ферментов, и касается получения штаммов, продуцирующих глюкоамилазу.

Глюкоамилаза используется для гидролиэа крахмального сырья и находит широкое применение в народном хозяйстве, главным образом, в хлебопекарной, крахмало-паточной, пищевой, текстильной промышленности. Известны способы производства глюкоамилазы, основанные на микробиологическом синтезе этого фермента, осуществляемом различными штаммами культуры

Аерет-дИРоз гнрет .

Наиболее близким по технической сущности к изобретению является штамм

A s gi Q Qvs, т 1сте Т-3 3 продуцирующий глюкоамилаэу с активностью в пределах 50-80 ед/мл на 144 ч роста (по глюкозооксидаэному методу). Штамм

Т-33 хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под регистрационным номером ЦМПМ Р -95 |1)

Одним из недостатков использова- . ния известных штаммов Kspe q)eeu

niger при промыаленном получении глюкоамилаэы является обильное спорообразование, которое загрязняет"культурную жидкость и окружающую среду конидиями.

Использование олигоспорогенных (со значительно ослабленным образованием конидий) штаммов позволит совершенствовать технологию выделения и очистки глюкоамилазы иэ культурной .жидкости, улучшит качество готовых препаратов и уменьшит загрязненность окружающей среды.

Цель изобретения заключается в создании высокоактивного, олигоспорогенного отечественного штамма, обра15 зующего глюкоамилаэу в количестве, достаточном для ее производства методом микробиологического синтеза в промышленном масштабе.

Предложенный штамм ВНИИгенетика-б

20 Aspergi1Ius niger является олигоспорогенным мутантом исходного штамма и получен в результате применения генетико-селекционных методов. Штамм хранится в Центральном

25 музее промышленных микроорганизмов и имеет регистрационный номер ЦМПМ

Р— 104.

Новый штамм ВНИИгенетика-6 отличается от прототипа морфологией ко3О лоний, интенсивностью гидролиза

734263 крахмала и желатины, скоростью роста на ломтиках картофеля и более высокой глюкоамилаэной активностью при сокращении времени культивирования.

Исходный штамм Т-33 характеризуется обильным конидиеобразованием, черным цветом колоний, крахмал гидролизует на 3-и сутки, желатину на 15-е сутки, на ломтиках картофеля слабый рост на 5-е сутки, максимальный уровень образования глюкоамилаэы составляет 50-80 ед/мл к

144 ч ферментации при выращивании на среде, содержащей 10% крахмала.

В отличие от прототипа заявленный ,штамм ВНИИгенетика-б характеризуется ослабленным конидиеобраэованием, светло-коричневым цветом колоний„ крахмал гидролиэует на 2-е сутки, желатину — на 12-е сутки, на ломтиках картофеля хороший рост на 2-е сутки, () .спороношение на 5-е сутки, максимальный уровень образования глюкоамилаэы составляет 80-110 ед/мл к 120 ч ферментаций при выращивании на среде, содержащей 7Ъ крахмала. 25

Культурно-морфологические свойства.Синтетическая среда Чап1ека с сахароэой. На 10-е сутки роста при

ЗЗ C диаметр колоний 63-70 Ьм.tlosepxность колоний сильно складчатая плоская, край ровный. Воздушный мицелий олигоспоровый,слабо развит;цвет колонии коричневато-серый по краям желтый.Конидии светло-коричневого цвета,локализованы в основном в центре колонии. Среда не окрашена. 35

Синтетическая среда Чапека с крахмалом. Диаметр колоний 78-80 мм. Поверхность колоний плоская, ровная, в центре складчатая, край колонии ровный.

Воздушный мицелий олигоспоровый, 4() слабо развит, цвет колонии сероватожелтый. Конидии светло-коричневого цвета, расположены в основном в центре колонии. Среда не окрашена.

Сусло-агар. Диаметр колоний 62-68мм

Поверхность колонии сильноскладчатая, в центре выпуклая, край колонии неровный; цвет коричневато-серый, по краям колонии желтый. Воздушный мицелий олигоспоровый, развит слабо. Конидии светло-коричневого цвета, расположены в основном в центре колонии в радиусе 13-15 мм.

На ломтиках картофеля на 2-е сутки роста субстратный мицелий хорошо развит, желтого цвета, на 5-е сутки 55 роСта конидии в небольшом количестве светло-коричневого цвета. Ломтики не .окрашены.

Физиологические признаки. Желатину разжижает послойно на 12-е сутки. 60

Молоко пептонизнрует к 12-м суткам.

Нитраты не восстанавливает. Крахмал гидролиэует на 2-е сутки °

Отношение к источникам углерода, Глюкозу, галактоэу, лактоэу, фрук1 (ед. А с/r крахмала) Ортофосфорная кислота 0,05

РН доводится водным раствором аммиака до 5,6. Культуру выращивают в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл, ссдержащих 100 мл среды, на качалкЕ (220 об/мин) в течение 18 ч при 28ОС. Инокулят (в количестве 5Ъ) переносят в ферментационную среду следующего состава,Ъ|

Крахмал кукурузный 7,0

Мука кукурузная 7,0

Мука соевая 1,5

БВК l 5 (Н4) нро, 0,1

Бактериазная амила за

1 (ед.A c/r крахмала) Вода водопроводная (РН 5,6) Остальнае.

Процесс ферментации проводят в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл при объеме среды 100 мл на качалке (220 об/мин) при 33 С. Через 120 ч ферментации уровень активности глюкоамилазы при определении глюкоэооксидаэным методом составляет

80-110 ед/мл.

Таким образом, предлагаемый штамм

ВНИИгенетика-6 характеризуется также способностью синтезировать более высокий уровень фермента эа более короткий срок ферментации.

Формула изобретения

Штамм AspergÆÐU niger ВНИИгенетика-б, продуцирующий глюкоамилазу.

Хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов института

ВНИИгенетика, регистрационный номер

ЦМПМ F-104.

Морфологические признаки.Синтетическая среда Чапека с сахарозой.На

10-е сутки роста диаметр колоний

63-70 мм, поверхность колонии сильно складчатая, плоская, край ровный. тозу, мальтоэу, ксилозу, маннозу, рамнозу, сахарозу, арабинозу, сорбит, глицерин ассимилирует.

Пример. Использование штамма

ВНИИгенетика-6 для получения глюкоамилаэы., Для получения исходного посевного материала культуру выращивают на скошенном агаре (среда сусло-агар) при

33 С в течение 14 сут.

Со скошенного сусло-агара культуру переносят в жидкую питательную среду следующего состава Ъ:

Крахмал кукурузный 10,0

Кукурузный экстракт 2,0

Дрожжи пивные 1,0

Бактериальная амилаэа

4263

Составитель Н. Паников

Редактор Н. Потапова Техред .Я.Бирчак

Корректор Г. Решетник

Подписное

Заказ 2007/35 Тираж 522

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППН Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Воздушный мицелий слабо развит. Цвет колоний коричневато-серый по краям желтый. Мицелий олигоспоровый, конидии светло-коричневого цвета, локализованы преимущественн э в центре

Молонии. Среда не окрашена.

Синтетйческая среда Чапека с крахмалом. На 10-е сутки роста диаметр колоний 78-80 мм, поверхность колонии плоская, ровная, в центре складчатая, край ровный. Воздушный мицелий слабо развит, цвет колонии серовато-желтый. Мицелий олигоспоровый, конидйи светло»коричневого цвета, локализованы в основном в центре. Среда не окрашена.

Сусло-агар. На 10-е сутки роста диаметр колоний 62-68 мм. Поверхность колонии плоская, сильно складчатая, в центре слегка выпуклая, край колонии неровный. Воздушный мицелий слабо развит. Мицелий олигоспоровый, конидии светло- коричневого цвета„ локализованы в основном в центре колонии. Среда не окрашена.

Среда Сабуро. На 10-е сутки рооста диаметр колонии 58-60 мм.Поверхность колонии плоская,слабоскладчатая,край колонии ровный.Воздушный мицелий плохо развит, белого цвета,в центре колонии окрашен в желтовато-корйчневый цвет.Мицелий олигоспоровый,цвет конидий светло-коричневый.

Ломтики картофеля. На 2-е сутки роста субстратный мицелий хорошо развит, желтого цвета, на 5-8 сутки роста конидий в небольшом количест1 е светло-коричневого цвета. Ломти-!

О и не окрашены

Физиологические рнэнаки Жлатину

Разжижает.Молоко пептониэирует.Нитраты не восстанавливает Крахмал гидро пизует.

Отношение к источникам углерода.

Глюкозу,галактозу,лактозу,фруктозу, мальтозу,ксилозу,маннозу,рамнозу,сахарозу, арабинозу,сорбит,глицерин, ассимилирует.

Ъ

Источникй информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Штамм Abpe iHvs niger Т-ЗЗ. Хранится в Центральном музее промышленных,микроорганизмов института

ВНИИгенетика под регистрационным номером ЦМПМ Р-95.