Штамм продуцент кормогризина

Штамм продуцент кормогризина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

В

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Совещании

Социалистических

Республик л11734271 (61) Дополнительное к авт. саид-ву— (22) Заявлено 191278 (21) 2697758/30-02

Р1 М К 2

С 12 К 1/02 с присоединением заявки N9 (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 1505.80. Бюллетень И9 18

Дата опубликования описания 3005.80 (53) УДК 63 ° 576.8 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Н ° К. Джангалина и N. Х. Ши гаева (71) Заявитель

Институт микробиологии и вирусологии

AH Казахской CCP (54) ШТАММ ACTINONYCES GRISEUS P-42-110

ПРОДУ1(ЕНТ КОРМОГРИЗИНА

Изобретение относится к микробио )логической промышленности, а именно к получению нового штамма актиномицета, продуци рующе ro кормо вой ан т и би отик — гризин, названный кормогризином.

Известно, что многие виды актиномицетов могут быть использованы для получения антибиотических веществ (1) .

В настоящее время в промышленном производстве кормогризина используют штамм Actinomyces-griseus ВНИИгенетика-115, продуцирующий 9,600 ед/мл антибиотика (2). Недостатком известного штамма является относительно низкая антибиотическая активность.

Целью изобретения является получение такого штамма, который обладал бы повышенным уровнем накопления

20, гриэина и был бы устойчив к литическому действию фагов Pg 56 и Pg 57.

Штамм Actinomyces griseus P-42-110 является мутантом штамма Actinomyces

griseus ВНИИгенетика-115. Получен в результате многоступенчатой селекции по признаку антибиотикообразования при обработке спор штамма рядом химических мутагенов с последующей селекцией с помощью антибиотика гриэи.ЫЛ на и фагов Pg 56 и Pg 57. Полученный штамм продуцирует антибиотик гризин в количестве 12400 — 18430 ед/мл и устойчив к актинофагам Pg 56 и Pg

57.

Штамм Actinomysec griseus P-42-110 хранится в коллекции Ин сти тут а микробиологии и вирусологии АН Казахской

ССР, регистрационный 9 48.

Морфологические признаки.

Клет ки мицели я н ите видной формы, спороносцы спиральные, споры овальные, размером 1,2-1,3 х 0,8-1 мкм. .Культуральные и физиологические признаки .

На картофельной среде образует колонии диаметром 8-10 мм, окру глые, слегка выпуклые, складчатые, воздушный мицелий интенсивно серого цвета, субстратный мицелий темно-бежевый, растут в углублении arapa. На соевой среде образует колонии диаметром

8-9 мм, округлые, слегка выпуклые, складчатые, воздушный мицелий темносерого цвета, субстратный мицелий бежево-коричневый. На мясОпелтонном агаре образует колонии 4-5 мм, округлые, гладкие, воздушный мицелнй отсутствует, колонии бежевого цвета.

734271

25

Кукурузная среда с крахмалом

18400

9012

4332

9600

Формула изобретения

На синтетической среде Чапека с глюкозой образует колонии 10-11 мм, округлые, слегка выпуклые, морщинистые, воздушный мицелий сероватобелый субстратный мицелий кремовый, растут в углублении агара.

На жидкой регламентной произ водственной среде 48-часовая культура образует крупные сплетения мицелия иэ свободно растущих гиф.

Биохимические свойства. Отношение к сахарам слабо сбраживает арабинозу, маинит, хорошо сбраживает глюкозу, галактоэу, ксилоэу, рамнозу, phфиноэуу фруктозуе

Клетчатка: интенсивно растет на клетчатке.

Желатина: слабо разжижает на седьмые сутки роста.

Молоко: пептониэирует на 10 сутки роста беэ коагуляции.

Отношение к источникам азота г xopoIIIo растет на синтетических питательных средах, содержащих минеральные источники азота, а на сложных питательных средах с органическими источникам азота.

Антагонистические свойства: подавляет грамположительные и грамотрицательные бактерии.

Пример 1. Колонии штамма

Actinomyses griseus P-42-110 вырзщивают в течение 7 суток при 28 С на картофельной агариэованнэй среде и затем пересевают на косяки с этой же средой. Косяки выращивают в термостате в тех же условиях.

Процесс выращивания посевного материала состоит из двух стадий. Первая стадия — выращивание продуцента в колбе объемом 750 мя со 100 мп молочной среды; %: кукурузная мука

2, крахмал 1,5, аммиачная селитра

0,5, мел 0,3, хлористый натрий 0,2, фосфат калия одноэамещенный 0,02

П р н м е р . Проверка степени фагоустойчнвости мутантов осуществ- ляется на твердой питательной среде ,Исследуемую культуру принимают, как устойчивую к фагам Pg 56 и Pg 57, если при высеве на газон с данной культурой фагов в титре 1 ° 10 ч/мм негативные колонии не образуются.

Устойчивость культуры к фагам проводят на твердой питательной среде

ПК -5 следующего состава, %г пептон (молоко 100 мл — 1 л, рН 7,2-7,3) .

Споры со скошенного картофельного агара высевают в колбы с молочной средой и выращивают в течение- 24 ч на подвесной качалке при 220 об/мин и температуре 28 С.

Вторую стадию выращивания noceiйого материала проводят на мучной среде. Для этого 5% выращенной культуральной жидкости передают в мучную среду. Вторая стадия выращивания посевного материала проводится.в колбах объемом 750 мя с 50 мл мучной среды, %: кукурузная мука 4, аммиачная селитра О, 7, мел О, 5, хлористый натрий О, 29, магний сернокн слый О, 05, фосфат калия одноз амещенный О, 02, железо сернокислое О, 01 (pH б, 8-7, 3), Посевной материал выращивается в течение 18 ч, на подвесной качалке" при 220 об/мин и температуре 28 С.

10% культуральной жидкости передают в регламентную ферментационную среду следующего со "тава, %: кукуруэная. мука 2, крахмал 1,5, аммиачная селитра 0,5, мел О, 3, хлорнстый натрий О, 2, фосфат калия однозамещенный О, 02, магний сернокнслый О, 05, железо сернокислое О, 025 (рН 6, 8-7, 3) .

Ферментацию проводят в колбах Эрлен,мейера объемом 750 мп, содержащих

50 мл ферментационной среды, на подвесной качалке при 220 об/мин в течение 48 ч, при 28 С. Содержание антибиотика в культуральной жидкости определяют методом диффузии в ага с использованием тест-культуры Вас.

sub"111э 6633.

На 48 ч ферментацнн продуцент кормогрнзина Actinomyces griseus штамм Ð-42-110 в лабораторных условиях синтезирует от 12400 до 18430 ед/мл антибиотика-кормогриэина, что видно иэ таблицы.

О, 5, кукурузный экстракт, 05, агарагар 1, 5. Лабораторный анализ показал, что на новом штамме Р-42-110, также как и на штамме ВНИИгенетика. 115, актинофаги Pg 56 и Pg 57 пракбО тически не развивались.

Штамм Actinomyces griseus P-42-11065 уодуцент кормогризнна, Хранится

734271

Составитель М. Мирзаев

Редактор Л. Новожилова Техред A.Щепанская ° Корректор Г.Решетник (Заказ 2007/35 Тираж .522 Подписное

Ш1ИИПИ . Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Пагент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 в коллекции культур Института микробиологии и вирусологии AH Казахской ССР, регистрационный В 48.

Морфология: клетки мицелия нитевидной формы, спороносцы спиральные, споры овальные, размером 1,2-1, 3 х.

Ь,8-1 мкм.

Культуральные и физиологические признаки. о

На картофельной среде образует колонии диаметром 8-10 мм, округлые, слегка выпуклые, складчатые, воздушный мицелий интенсивно серого цвета, субстратный выцелий темно-бежевый, растут в углублении агара. На соевой среде образует колонии диаметром

8-9 мм, округлые, слегка выпуклые, складчатые,,воздушный мицелий темно-серого цвета, субстратный мицелий бежево-коричневый. На мясо-пептонном агаре образует колонии 4-5 мм, округлые, гладкие, воздушный мицелий отсутствует, колонии бежевого цвета. На синтетической среде Чапека с глюкозой образует колонии 10-11 мм, округлые, слегка выпуклые, мор-, щинистые, воздушный мицелий серова-. то-белый, субстратный мицелий кремовый, растут в углублении агара. На жидкой регламентной производственной среде 48-часовая культура образует крупные сплетения мицелия из свободно растущих амф.

l Биохимические свойства. Отношение к сахарам: слабо сбраживает ара бинозу, маннит, хорошо сбраживает глюкозу, галактозу, ксилозу, раинозу, рафиноэу, фруктоэу.

Клетчатка1 интенсивно растет на клетчатке.

Желатина: слабо разжижает на седьмае сутки роста.

Молоко: пептониэирует на 10 сутки роста без коагуляции °

Отношение к источникам азота: хорошо растет на синтетических пита-. тельных средах, содержащих минеральные источники азота, и на сложных. питательных средах с органическими

1 5 источниками азот э.

Антагонистические свойства: подав- ляет грамположительные и грамотрицательные бактерии, Продуцирует антибиотик-кормогриЩ эин, в количестве от 12400 до

18430 ед/мл и устойчив к актинофагам Pg 56 и Pg 57.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Егоров Н.С. Микробы антагонисты и биологические методы определения антибиотической активности. Высшая школа, М., 1965,. с. 17-79.

2. Авторское свидетельство СССР, 9 510512, кл. С 12 К 1/00, 1974 (прототип) .