Штамм лиа-т-080-продуцент липолитического фермента

Штамм лиа-т-080-продуцент липолитического фермента

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

опий;Вм

ИЗОБРЕТЕН

Союз с.оветскик

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 130278 (21) 25787 с присоединением заявки ¹

С 12 К 1/02

С 12 D 13/10

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано,150580. Бюлле

Дата опубликования описания1

53) УДл 577. 15. . 07 (088, 8) (72) Авторы изобретения

A.Ä. Коммунарская, М.О. Зодьян, В.Д. Пономарева, В.К. Грекова, Н.IO. Брик и Э.Б. Петрова

Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (71) Заявитель (54) ШТАММ РЕИ1С1ШОИ 50LTTUM WESTLTNQ

ЛИА-T-080-ПРОДУЦЕНТ ЛИПОЛИТИЧЕСКОГО

ФЕРМЕНТА

Изобретение относится к областимедицинской промышленности, в частности к производству ферментов медицинского назначения.

Известен способ получения липаэы из PeniciIIium SoIitum WeestIinng штамм JINA-T-062 (1).

Штамм ЛИА-Т-062 PeniciIIium So11tum характеризуется следующими признаками: на среде Чапека с глюкозой колонии 4,0-4,6 см в диаметре к 14сут. роста, бархатисто-войлочные, с радиально-складчатым центром, синевато-зеленые с коричневатым оттенком в центре и белым извилистым краем-. Обрат- 15 ная сторона мраморно-розовая радиально-складчатая в центре.

Микроскопические признаки.Метулы слабо расходящиеся от 2 до 4 в группе,размером (11,8-12,7) <(2,9-3,4). мкмжд() стеригмы в количестве 3-6 размером (7, 8-9, 2) х (3, 0-3, 6) мкм, конидии круглые 3,7-4,1 мкм, оболочка гладкай.

Физиологические признаки. Желати. ну не разжижает, молоко пептониэирует,25 растет на средах с глюкозой, сахарозой, фруктоэой, инозитом, глицерином.

Штамм JINA-T-062 хорошо развивается и продуцирует липолитический фермент в глубинных условиях на пита- 30 тельной среде, содержащей глюкозу, лактоэу, кукурузный экстракт, (подсолнечное масло и минеральные соли.

Средняя активность штамма ЛИА-Т-062, определяемая по методу Ota u

Jamada f2),, в лабораторных условиях и в 100 л аппаратах на регламентной среде к .110-115 ч ферментации составг яет 800-1000 ЛЕ/мл.

Штамм JINA-T-062 сохраняет свои признаки при регулярных ежемесячных пересевах на свежую агаризованную среду Чапека с кукурузным экстрактом, однако его недбстатком является невысокий уровень ферментивной активности.

В связи с необходимостью интенсификации процесса производства липолитического фермента и снижения себестоимости готового продукта существенным является выведение более продуктивных штаммов продуцента и совершенствование технологии их культивирования.

Согласно изобретению повь1шение содержания липолитического фермента в культуральной жидкости обеспечива" ется использованием штамма PeniciI734273

1040

100

Райстрика/модифицированная) JINA-Т-062 16

1170

112

Райстрика(модифицированная) ЛИА-T-080 15

1670

160

Iium So1itum NestIing JINA-T-O8O, отобранного и поддерживаемого на модифицированной среде Райстрика следующего состава, г/л: пептон 6, глицерин 15, NBCI 5, KCI 0,5 Ге8040,015, СцЯО4 0,02, КН РО4 0,3, Мп804 0,0002, NgSO4 0,05, агар 25, рН-6,9 до стерилизации, стерилизация 0,6 ати

30 мин.

Штамм депонирован в музее культур Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения под номером ЛИА-Т-080.

Штамм ЛИА-T-080 PeniciIIium SoIitum

_#_estIing характеризуется следующими признаками.

На среде Чапека с глюкозой на

14 сут. роста при 24 С образует колонии диаметром 4,4-4,7 см, бархатисто-войлочные,с приподнятым радиальноскладчатым центром, синевато-зеленые с коричневым оттенком в центре колонии, эона роста белая шириной 0,51 мм, край волнистый. В центре колонии мелкие капли бесцветного эксуда- та. Иногда наблюдаются пятна белого аспорогенного мицелия и более светлые пушистые сектора. Обратная сторона темно-песочного цвета с радиальными складками в центре.

На агаре Чапека с кукурузным зкс- 30 трактом колонии 5,6-6,0 см, войлочные, с прйподнятым пушистым центром, зелено-малахитовые с коричневым оттенком в центре, сильнорадиально-, складчатые, зона роста белая, шириной 35

1-1,5 мм, край слегка волнистый, эксудат бесцветный, мелкими каплями.

Наблюдаются пятна белого аспорогенного мицелия и иногда более светлые пушистые сектора. Обратная сторона ко- 40 ричневого цвета, радиально-складчатая, На модифицированной среде Райстри- ка колонии 5,6-5,8 см, войлочно-зернистые, с чуть приподнятым центром, радиально-складчатые, синевато-. зеленые с коричневым оттенком в центре колонии, эона роста белая, шириной 1,52,0 мм, край ровный. В центре колоний мелкие капли зксудата розового цвеЧапека с кукурузным зкст" актом JINA-T-062 8 та. Наблюдаются пятна аспорогенного мицелия и иногда сектора с белым опушением. Обратная сторона бледнопесочного цвета, радиально-складчатая.

На сусло-агаре колонии 5,2-5,6 .м, войлочные, с приподнятым пушистым центром, синевато-зеленые, с редкими радиальными складками, зона роста белая 1-1,5 мм, край слегка волнистый, эксудат отсутствует. Иногда наблюдаются пятна аспорогенного мицелия и пушистые сектора белого и светлозеленого цвета. Обратная сторона табачно-бурого цвета, радиально-складчатая.

Микроскопические признаки штам,ма ЛИА-Т-080 одинаковы на при веденных средах. Метулы в группах по 2-3, размером (8,4-12,0) (2,94,1) мкм, встречаются простые, нераэветвленные конидиеносцы, стеригмы в количестве 1-5 размером (6,0

8,4) (2,9-3,6) мкм, конидии круглые 3,6-4,8 мкм, оболочка гладкая, Физиологические признаки штамма

JIHA-T-080. Желатину не разжижает, молоко пептонизирует, на клетчатке рост слабый, крахмал гидролиэует, сероводород не образует, нитраты в нитриты восстанавливает. Растет на среде с глицерином, глюкозой, арабйнозой, ксилозой, маннитом, фруктозой, раффинозой, сахарозой, инозитсм, рамнозой. .Для поддержания и хранения продуцентов лиь.аэы используют модифицированную среду Райстрика, которая обеспечивает не только увеличение продуктивности культуры, но и большую стабильность ее при хранении.

Так, при хранении продуцента липазы на модифицированной среде Райстри(ка уровень исходной ферментатинМой активности не менялся в течение 10 мес. вместо 1-2 мес. íà среде Чапека с кукурузным экстрактом.

В таблице приведена сравнительная характеристика липолитической активности PeniciIIium SoIitum штаммов

ЛИА-Т-062 и ЛИА-Т-080 при их культивировании на двух средах.

734273

Формула изобретения

Составитель H. Привалова

Редактор Н. Потапова Техред А.Щепанская Корректор Г.Решетник

Заказ 2007/35 Тираж 522 Подписное

Г1НИИПИ Государственного комитета СССР пс делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Режим ферментации штамма ЛИА-Т-080 определяется преимущественно условиями аэрации культуры.

Оптимальные условия для биосинтеза фермента достигались при подаче воздуха в количестве .1,0-1,5 объема. на объем среды в 1 мин в течение ЪО84 ч процесса культивирования продуцента с последующим снижением до 0,50,8 объема на 1 объем среды в 1 мин.

Липолитическая активность штамма

ЛИА-Т-080,при указанных условиях выращивания варьировала в пределах

4.370- 1550 ЛЕ/мл на 96-115 ч ферментации и превышала активность штамма

JNA-T-062 в среднем на 63%.

Штамм PeniciIIium sol itum WestIing

ЛИА-Т-080 — продуцент липолитическо- 20

ro фермента. Хранится в коллекции

Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения под номером ЛИА-Т-080. 25

Культуральные признаки. На среде

Чапека с глюкозой колонии 4,4-4,7 см в диаметре, бархатисто-войлочные, с приподнятым радиально-складчатым центром, синевато-зеленые с коричневым оттенком в центре и белым волнистым краем.

На среде Чапека с кукурузным экстрактом колонии 5,6-6,0 см в диаметре, войлочные, с приподнятым пушистым

35 центром, глубоко-складчатые, зеленомалахитовые с коричневым оттенком в центре и белым, слегка волнистым краем.

На модифицированной среде Райстрика колонии 5,6-5,8 см в диаметре, войлочно-зернистые с приподнятым центром, радиально-складчатые, синевато-зеленые с коричневым оттенком в центре и белым ровным краем.

Микроскопические признаки.Метулы в группах по 2-3,размером (8,4-12,0)х х(2,9-4,1) мкм,встречаются простые конидиеносцы, стеригмы в количестве

1-5, размером,6,0-8,4) 2,9-3,6)мкм, конидии круглые, диаметром 3, 6-4, 8мкм, оболочка гл дкая.

Физиоло..%÷åñêèå признаки.Желатину не разжижает, молоко пептонизирует, на клетчатке рост слабый, крахмал гидролизует,сероводород не образует,нитраты в нитриты восстанавливает, растет на среде с глицерином, глюкозой,арабинозой,ксилозой,маннитом,фруктозой, раффинозой,сахарозой,инозитом,рамно- зой.

Липолитическая активность составляет 1370-1550 ЛЕ/мл íà 96- 115 ч ферментации.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свил тельство СССР

f4 562571, кл. С 12 К 1/02, опублик °

1977.

2. AgricuIturaI and BioIoqucaI

Chemistry, voI 30, р. 351, 1966