Штамм вируса оф-5 возбудитель рабдовирусного гепатита форели

Штамм вируса оф-5 возбудитель рабдовирусного гепатита форели

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскик

Социалистических

Республик (и>734275 е: (61) Дополнительное н авт. свнд-ву (22) Заявлено01.1178 {21) 2684731/30-15 (51) и. KA.2 с присоединением заявки М

С 12 К 1/02

С 12 К 7/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 150530. Бюллетень йо18

Дата опубликования описания 1505,80 (5З) УДЫ 616.988. .43{088.8) (72) Авторы изобретения

Е.Ф. Осадчая и М. Г. Наконечная

Украинский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (71) Заявитель

{54) штАмм ВиРУсА RABDovIRUs 5А1МОМК

ОФ-5 — ВОЗБУДИТЕЛЬ РАБДОВИРУСНОГО

ГЕПАТИТ .ФОРЕЛИ

Изобретение относится к области биологии, в частности к ветеринарной вирусологии, и представляет собой новый штамм вируса, который вызывает заболевание молоди форели и 5 может быть использован для получения специфической иммунной сыворотки.

В ихтиопатологии известны различные вирусные болезни форели и соответствующие возбудители их. Так инфекционный некроэ поджелудочной железы вызывается вирусом гексавональной Формы (1).

Инфекционный некроз гомопоэтической ткани QHN) вызывается вирусом 15 пулевидной Формы размером 140 х к160 нм. Возбудитель JHN разрушается эфиром и хлороформом, очень термолабилея. Оптимальная температура развития его в клеточных культурах 20

l0-15 С. Разрушается при прогревании,до 45оС в течение 15 мин. Вызывает заболевание мальков форели (2).

Целью изобретения является вьщеление возбудителя новой болезни Форе-25 ли, изучение его свойств, которые необходимо знать для постановки диагноза на рабдовирусный гепатит, а также для получения специфической иммунной сыворотки, которую можно 30 было бы испольэовать с целью диагностики данного заболевания Форели в хозяйствах.

Предлагаемый рабдовирус ИаЬс1о1оч1rus saImonis ОФ-5 в литературе не описан, он отличается от известных вирусов и является самостоятельным возбудителем рабдовнрусного гепатита Форели °

Штамм RaboIovirtis saImonis OC-5 хорошо культивируется на перевнваемых клеточных культурах EPC, FHN, ASE, RTY — 2 и первичной культуре клеток гонад Форели, вызывая активное цитопатогенное действие (ЦПД) через 21-48 ч.

Морфологическое признаки. Размер вирионов при выращивании на перевиваемой клеточной культуре ЕРС

140 - 150 х 60 нм, пулевидной формы, по краям вириона ворсинки. Штамм относится к рабдовирусам.

Культуральные свойства. Хорошо культивируется на перевиваемых клеточных культурах в.титре 10 — 10 з 6

ТЦД-:. Оптимальная температура развития вируса 22 — 24 С. Может культивироваться до 30 С. Устойчив к эФиру, хлороформу, кислотности среды., 734275

1О !

Хорошо сохраняется при -20 C в течение 3 лет, при +4ОC — в течение шести ..месяцев. Не обладает гемагглютинирующим свойством и гемадсорбцией.

Разрушается при 60 в течение 15 мин.

Антигенные свойства. Выделенный вирус отличается по своим антигенным свойствам от известных вирусов — воз будителей болезни форели. Так, при постановке реакции нейтрализации с иммунными сыворотками к 7PN, 3HN и

VHS вирусам получен отрицательный результат, что свидетельствует о

М аэличии их антигенной структуры, Данный вирус вызывает образование вируснейтрализующих антител. При иммунизации данным вирусом кроликов получена иммунная специфическая сыворотка, которая предназначена для диагностики рабдовирусной болеэки молоди форели при помощи реакции нейтрализации.

Вирулентные свойства. При введении нового вируса в брюшную полость здоровым подопытным форелям в дозе 0,2 мл цля одной форели .массой 8-10 у 66,6% последних возникает заболевание с последующей гибелью. Следовательно, вирус ОФ-5 является патогеннйм для здоровых форелей. Вызывает заболевание и гибель до 70% .здоровых форелей,, На основании комиссионной проверки установлено, что вновь выделенный штамм является патогенным для здоровых форелей и вызывает самостоятельное заболевание.

Выделение вируса. В последние годы выращиванием форели занимаются многие рыбоводные хозяйства нашей страны. Во многих рыбкомбинатах перешли на интенсивные формы ведения форелеводства. Учитывая то, что условия выращивания не всегда отвечают требованиям, необходимым для нормального развития рыб, очень часто среди них возникают болезни различной природы. Предлагаемый вирус выделен от больных мальков, сеголетков и годовиков форели в двух форелевых хозяйствах УССР, в которых наблюдалась значительная гибель рыб с клиникой потемнения кожного покрова, спиралевидного движения в воде с последующим опусканием мальков на дно бессейна и гибелью их. Айалогичный вирус выделен из икры самки, а также смеси оплодотворенной икры от 10 производителей.

Выделение вируса проводят путем заражения однослойных клеточных культур .ЕРС и FHN, которые выращивают на основной среде Игла с добавлением .

5% сыворотки крупного ро.атого скота, а также смеси пенициллина и стрептомицина по 100 ед/мп. Выращивают при 22-24 C. На второй-третий день отбирают пробирки, т, которых клетки образовали монос ой. В 4 — 6 пробирок вносят суспензию, приготовленную на физрастворе 1:б, из печени, почек, селезенки и жидкости брюшной полости больных рыб. Ежедневно проводят микроскопию зараженных клеточ. ных культур под малым увеличением микроскопа (х 60). При появлении цитопатогенного действия вируса на клетки (ЦПД) культуру эаморажнвают при-20 С, Для проведения второго пассажа зараженные культуры размораживают и вносят по 0,2 мл вируссодержащей культуральной жидкости в здоровые .леточные культуры. Такое пассирование на клеточных культурах проводят 4-5 раз,после чего возникаюtace в последующих пассажах ЦПД считают специфическим действием вируса.

Таким образом выделяют вирусы от мальков, сеголетков и годовиков форели, а также иэ икры самки и смеси оплодотворенной икры форели. Все выделенные вирусы имеют пулевиднуи форму, размером 150 х 60 нм, оптимальная температура выращивания 22 — 24 C нечувствительны к эфиру, хлороформу и кислотности среды. Хорошо сохраняются при -20"С и +4 С. Не обладают

1 емагглютинирующим свойством. Разру- аются при 60 С в течение 15 мин, Патогенные для здоровых форелей.

Вирус RS ОФ-5 используют для иммунизации серого кролика с целью получения специфической иммунной сы.воротки. Для этого по 2 мл вируссодержащей культуральной жидкости вводят кролику внутривенно три раза интервалом 7 дней. После его обескровливают и получают сыворотку крови. После прогревания ее при 60 С в течение

30 мин определяют титр накопления антител, который составляет 1:320 °

Иммунная сыворотка хранится в замороженном состоянии и может быть использована для постановки реакции нейтрализации при диагностике рабдовирусного гепатита форели.

Формула изобретения

Штамм вируса Rabdovirus saImonis

ОФ-5 — возбудитель рабдовирусного гепатита форели. Может быть использован для получения специфической иммунной сыворотки. Хранится в музее вирусных штаммов УкрНИИРХа.

Морфологические признаки. Размер вирионов при выращивании на перевиваемой клеточной культуре EPC

140-,150х60 нм, пулевидной формы, по краям вириона ворсинки. Штамм относится к рабдовирусам.

Культуральные свойства. Хорошо культивируется на любой из перевива мых культур — EPCt HM, AE, РТУ-2 и первичной культуре из гонад форели с активно проявляющимся ЦПЦ через

Составитель М. Мирзаев

Редактор Л. Новожилова Техред A.Ùåïàíñêàÿ

Корректор Г.Решетник

Подписное

Заказ 2007/35 Тираж 522

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

:Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

24-48 ч в титре 10 — 10 ТПД5О. Устойчив к хлороформу, эфиру и кислотности среды, Хорошо сохраняется при температуре -20ОС и при +4. С. Не обладает гемагглютинирующим свойством.

Разрушается при 60 С в течение 15 мин.

Вирулентные свойства. Вызывает заболевание и гибель до 70% здоровых форелей.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Cerini С.P., MaIsberger R 0 .

Am. N. . Acad. Sci. v. 126, art. 1, р. 422-427. 1965.

Осадчая Е.Ф. Инфекционный.некроз гемопоэтической ткани, профилактика и меры борьбы. Рыбоводство и рыболовство, Р 3, с. 13-14, 1974.