Штамм 163-продуцент амилосубтилина и протосубтилина

Штамм 163-продуцент амилосубтилина и протосубтилина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ь(-т-Ссп Э ll! AH

1lATEi" -:. .й 4 I, ЯАя бибпиОтбкэ. МБ

Il И

Союз Советских

Социалистических

Республик (lit 73 7442

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. свид-ву — (22) Заявлено01.04.77 (2I ) 2467832/28-13 с присоединением заявки Ло (51)М. Кл.

С 12 D 13/10

Государственный комитет (23)ПрноритетСССР ло делам изобретений и открытий

Опубликовано 30,05.80. Бюллетень K 20 (53) УДК 615. ,779,94 (088.8) Дата опубликования описания 30.05.80

М. М. Скворцова, Н. А, Томашевская, H. И. Кашкина и Л. Ю, Прасолова (72) Авторы изобретения (7!) Заявитель

Бердский химический завод (54) ШТАММ ВАСЫА05 SUBZего.I 163—

ПРОДУБЕНТ АМИЛОСУБТИЛИНА

И ПРОТОСУБТИЛИНА

Сусло-агар. На 3-и сутки роста ко15 лонии белого цвета, круглые, края неровные, центр гладкий, но встречается и моршинистый.!

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству ферментных препаратов.

Известен штамм тзастИus воИ,тИь

103 — продуцент амилосубтилина и протосубгилина $1) .

Известный штамм не обладает устойчивостью к вирулентным фагам.

Белью изобретения является получение штамма Всзс1Имв ввЫлИВ 163, обладаюшего устойчивостью к вирулентным фагам, Штамм Ьас1Иов эиЖтИэ 163 получен в результате изучения естесгвеннстй изменчивостииспользуемых в производстве амилосубтилина и протосубтилина культур Bacillus вт Ът,Ж1в

Штамм Вас Иов эоЬт.зИ в 163 хранится в музее культур микроорганизмов ВНИИгенетики под номером БМПМ

В-1560 и характеризуется следуюшими признаками, Культурально-морфологические признаки.

Величина клеток трехсуточной культуры на сусло-агаре 0,7-0,8х2-3 мкмт клетки подвижны, жгутики расположены по периферии клеток. Клетки не содержат живых включений. На 4-5-е сутки на сусло-агаре.образуются овальные споры размером 0,6-0,9х 1,0-1,5 мкм. Споры расположены аксцентрально, преимушественно ближе к центру. Мясо-пептонный агар. На 3-и сутки роста ко о лонии белого цвета, круглые с неровными краями, центр моршинистый, возвышаюшийся в виде. вфлкаичика, Ломтики картофеля. На 3-и сутки рост.обильный, складчатый, Глюхозный агар. При посеве столбиком культура дает рост по всему уколу.

Физиолого-биохимические свойства, 3 7374

Температурный оптимум +37ОС. Желао тину при 18 С медленно разжижает,иног

rta до 15 суток и более.

Молоко с лакмусом через 10 суток слабо пептонизирует через 15 суток створаживает.

Лакмус обесцвечивает. .Крахмал гидролнзует.

Усваивает глюкозу, сахарозу, Не сбраживает лактозу, галактозу, 1 мальтозу, рибозу, маннит, рамнозу.

42 4

Культуру выращивают поверхностным методом в,термостате при 37 С в течение трех суток. Полученную посевную культуру используют для засева ферментационной среды, Состав ферментационной среды и условия ферментации при биосинтезе амидосубтилина, вес,%:

Крахмал - -. 16-18

0 Кукурузный экстракт 1,2

Дрожжи сухие кормовые 0,24

Лак тоза 0,3

Магний сернокислый 0,015

Калий сернокислый 0,3

А ммоний форсфорнокислый двузамещенный 0,84.

Натрий хлористый 0,03

Медь сернокислая 0,00039

Окись кальция 0,0012

Амилосубтилин 0,017

Qp тофосфорная кислота

Вода рН 6,5-6,7

Остальное

Культивирование осушествляет при температуре 37 С, при постоянном перемешио вании и аэрации среды и при поддержании постоянного рн 6,2-6,3 с помощью

25% — ного водного рж:твора аммиака. Длительность ферментапии 66-72 ч. ферментажвная активность культуральной жидкости по методу согласно ГОСТ 20264,4-74 не ниже, 160 ед АС/мл.

Состав ферментационной среды и условия ферментации при биосинтезе протосубилина, вес.%:

Крахмал 8,0

Кукурузный экстракт 0,8

Дрожжи сухие кормовые 0,4

Магний сернокислый 0,05

Кальций хлористый 0,01

Калий хлористый 0,15

Аммоний фосфорнокис лый двузамещенный 1,2

Амилосубтилин 0,05

Ортофосфор ная кислота 0,2

Вода Остальное рН 6,6-6,8

Культивирование осуществляется при температуре 37 С и при постоянном перемешивании и аэрации среды Длительность ферментации 50-56 ч. ферментативная активность культуральной жидкости по методу Лейлян-фольгарда согласно ГУ 59-32-70 не ниже 170 ед. ПС/мл.

После окончания ферментации культуральную жидкость подвергают 1,5-2-крат

0,61

0,3

0,15

0,001

На среде Кларка образует ацетилметил,карбинол, интенсивность кислотообразова ния слабая, 15

Культура Вас1Юus 5 иЪМИв 163 обладает устойчивостью к вирулентным фага м. . Пример использования штамма BaciEязв цЬ1лИэ 163. 20

- -Культуру штамма хранят в лиофильновысушенном состоянии в запаянных ам, пулах при температуре 2-4 С. Защитной средой для лиофилизации служит сыворотка бычьей крови, добавляемая по

0,2 мл в каждую ампулу. С целью оживления культуры в ампулу заливают 1 мл мясопептонного бульона, суспензию перемешивают иглой, закрывают ампулу стерильной ватной пробкой и выдерживают. в 30 о таком виде в термостате при 30 С в течение 10-15,мин, после чего термоо статируют при 37 С в течение 15 мин.

Суспензию культуры пересевают на скошенный в пробирках суслоагар 3,5-5,0 B или на стерильные ломтики картофеля и термостатируют при 37 С в течение трех суток.

Для приготовления посевного материала культуру, выращенную на сусло-агаре 40 или ломтиках картофеля, переносят в колбы с посевной средой следующего состава, %:

Крахмал 20

Аммоний лимонно45 кислый 3

Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,2

Натрий фосфорнокислый

50 двузамещенный

Магний сернокислый

Железо сернокислое закис ное 0,002

Медь сер нокислая 0,00075

Марганеп сернокислый 0,000125

Аминобензойная кислота рН 7,0

Составитель E. Дуоовицкая

Редактор Т. Пилипенко Техред Н. Ковалева Корректор И, Муска

Тираж 522 Подписное

ЫНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, R-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 260 2/7

Филиал ППП «Патент», г, Ужгород, ул, Проектная," 4

5 737 ному концентрированию в вакуум-выпарной установке при температуре 35-40 С о

Упаренную культуральную жидкость высушивают в распьшительной сушильной установке при следующих условийх: температура сушильного агента на входе в о сушильную башню 140 С,на выходе—

70-75 С.

Полученный сухой концентрат усредняют поваренной солью до активности, требуемой действующими ГОСТ на препараты амилосубтилин и протосубтилин, Использование штамма Вс с Юав subО Яis . 163 позволит повысить сьем готового продукта с единицы обьема питательной среды и снизить затраты,связанные с дополнительной обработкой и стерилизацией оборудования.

Формула иэобре те ния

Штамм Sac Mus БоЬ Ж1в 163 — продупент амилосубтилина и протосубтилина.

Хранится в музее культур микроорганизмов ВНИИгенетики под номером ЦМПМ

8-1560.

Культурально-морфологические признаки, ЗО

Величина клеток трехсуточной культуры на сусло-агаре 0,7-0,8х 2-3 мкм, клетки подвижны; жгутики расположены по периферии клеток, Клетки не содержат жировых включений, На 4-5-е сутки на сусло-агаре образуются овальные спо442 6 .ры размером 0,6-0,9 х 1,0-1,5 мк

Споры расположены аксцентрал ьно, преимущественно ближе к центру.

Мясо-пептонный агар. На 3-и сутки роста колонии белого цвета, круглые с неровными краями, цепче морщинистый возвышающийся в виде вулканчика„

Сусло-агар, На 3-и сутки роста колонии белого цвета круглые, края неровные, центр гладкий, но встречается и морщинистый.

Ломтики картофеля. На 3-и сутки рост обильный, складчатый. Глюкознь1й агар. При посеве столбиком культура дает рост по всему уколу.

Физиолого-биохимические свойства.

Температурный оптимум .+37 С.

Желатину при 18 С медленно разжижает, иногда до 15 суток и более.

Молоко с лакмусом через 10 суток слабо цептонизщ ует, .через 15 суток створаживает, Лакмус обеспвечивает, Крахмал гидролизует.

Усваивает глюкозу, сахарозу.

Не сбраживает лактозу, галактозу, мальтоэу, рибозу, маннит, рамноэу. На среде Кларка образует ацетилметилкарбинол, интенсивность кислотообразования слабая, Культура 5uc1H.Us söÛÆЪ 163 обладает устойчивостью к вирулентным фагам, Источники информации„ принятые во внимание при акспертнзе

l. Авторское свидетельство СССР

¹ 283152, кл. С 12 K 3/00, 1970.