Способ получения полисахарида, обладающего противоопухолевым действием

Способ получения полисахарида, обладающего противоопухолевым действием

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Иностранцы

Тикао Есикуми, Тосихико Вада, Масахико Фудзии, Хиромицу Макита, Кинзабуро Сузуки, Акио Санмио и Харухиса Хаяси (Япония)

Иностранная фирма

Куреха Кагаку Когио Кабусики Кайся

"(Япония) (72) Авторы изобретения (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИСАХАРИДА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВООПУХОЛЕВЫМ

ДЕЙСТВИЕМ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для приготовления медикаментов.

Известен способ получения поли- 6 сахарида, обладакщего противоопухолевым действием путем глубинного культивирования продуцента,отделения мицелиальной массы с последующей экстракцией иэ нее целевого продукта горячей !О водой и очисткой экстракта от балластных примесей (протеинов„ низкомолекулярных веществ) известными приемами fl) .

Однако этот способ не обеспечива- 16 ет получения полисахарида с высокой противоопухолевой активностью.

Целью изобретения является повы-! шение противоопухолевой активности МО полисахарида.

Цель достигается тем,что в качестве продуцента используют штамм Сог1оIus versicoIor (Fr/i QueI. FERN-Р2414, Cor1о1us consors (Berk.) Ymaz. ®

FERN P-988, Сог5оХпз hirsutus (Fr.)

QueI. FERN-P-2711 или CorioIus parga

menus (Fr.) Pat. FERN-P-2712 класса

Basid1omycetes и перед экстракцией полученную культуральную жидкость безЗО отделения мицелия высушивают при температуре б0-150oС.

Способ полчче ни я поли сахарида заключается в том что грибок относящийся к кориолюсу класса базидиомицетов подвергают погруженному культивированию в жидкой среде, полученную питательную среду сушат при температуре 60-150 С и подвергают экстракционо ной обработке водным растворителем с последующей очисткой полученного экстракта путем удаления из него веществ с мсжекулярным весом менее

50 00 °

Культиыим вание грибков класса базидиомицетов проводят в жидкой среде в условиях аэрации и перемешивания, причем рост мицелия происходит не на поверхности жидкой среды, а в основном в глубине жидкого слоя. Выращивание проводят при скорости аэрации от

0,1 до 2,0 л/мин/л среды и при скорости вращения мешалки от 30 до

800 об/мин.

В качестве среды используют любую натуральную или синтетическую среду, которую обычно применяют при выращивании микроорганизмов. Выращивание длится 3-10 дней.

Молекулярный вес находится в пределах or 5000 до 30000G.

Азотосодержащий полисахарид обла- бО дает очень сильным противоопухолевым действием,. проявляемым при лечении мышей не только при внутрибрюшинном введейии в организм, но также и при введении через рот. 6S

В Случае погруженного культиви-рования с использованием жидкой среды мицелиф не юаспростпаняется на поверхности среды с образованием больших масс, а формируется в виде небольших шарикоподобных или волокйистых масс, создаваемых пеоемешиванием. В ходе такого процесса полисахарид образуется не только внутри мицелия, но также в самой соеде.

Ратем питательную среду подвергают сушке, которую проводят при тем1 ературе от 60 до 150 С.,Чля сушки испЬльзуют барабанные газоструйные сушилки и тонкопленочные выпарные аппараты.

В результату такой обработки упрощается экстракпия водным,пас гворителем, а также сбор полисахарида посредством очистки экстракционного раствора.

После обработки с ыкОй осушествляют экстракпию водным раствором, содержащим щелочь, соль (например хлористый натрий, ацетат натрия), полярным органическим растворителем (например метанол, этанол) . Наиболее 25 эффективной является экстракпия с нагреванием водой или разбавленным раствором щелочи.

Полученный экстрактный раствор затем подвергают обработке с целью g() очистки этого раствора путем удаления из него веществ с молекулярным весом менее 5000, что позволяет получить целевой полисахарид. Такую обработку пооводят высаливанием, диализом, ультрайильтрацией, гелевым фильтрованием или осаждением органическим растворителем.

После удаления низкомолекулярных компонентов (c молекулярным весом менее 5000) из экстрактного раствора его подвергают распылительной сушке или сушке вымораживанием с последукщим приготовлением технической продукции.

Полисахариды, полученные пвед- 45 лагаемым способом представляют собой вещества печеночно-коричневого цвета с содержанием азота от 2 до

8%; полисахариды не имеют точки плавления, а постепенно темнеют и 50 разлагаются при температуре, превышающей приблизительно 120ОС. Вещество растворимо в воде, но почти нерастворимо в спирте, пиридине, хлороформе, бензоле и гексане, оно почти без- 55 вкусно и не обладает запахом.

Предлагаемое вещество может быть использовано не только для предотвращения нежелательных побочных эффектов в химиотерапии рака и повышения чувствительности к радиотерапии, но также для предотвращения отклонений восприимчивости или физического здоровья пациента, воз- никаюших после хирургических операций или переливания крови, а также для борьбы с вирусными и бактериальными заболеваниями.

Пример. 1600 л питательной среды, содержащей 10% глюкозы, 1,5% дрожжевого экстракта, 0,1Ъ первичного кислого фосфата калия и

0,1Ъ гептагидрата сульфата магния, загружают в ферментор, после чего питательную среду инокулируют 7А л шлама грибков штамма CorioIus vers3coXox (Fr) QueI. PERM-P-2.414, полученного встряхиванием культуры с последующим культивированием в течение 7 дней при температуре 26 С,скорости аэрации 0,5 л/мин/л среды и скорости вращения мешалки 156 об/мин.

Приготовленный таким образом бульон (шлам) делят Hà 500-литровые порции, после чего каждую из этих порций сушат в сушилке типа с двойным барабаном . Температуру поверхности барабанной сушилки регулируют таким образом, что температура поверхности питательного бульона (поверхность бульона определяют формированием тонкого слоя бульона на поверхности барабана) равна соответственно 65, 80, 90, 110 и 145 С и содержание воды в каждой порции высушенного продукта составляет менее 20 вес.Ъ.

Затем в каждую из этих порций высушенного продукта добавляют по

250 л горячей воды и проводят. экстракционную обработку при температуре 95+1ОС в течение 3 ч, а после охлаждения мицелиальный остаток отделяют от экстрактного 6аствора с использованием декантатора анекового типа и с разделением в центробежном сепараторе пластинчатого типа .

Полученные полисахаоидные продукты представляют собой коричневый порошок, легко растворимый, в воде.

Полисахарид, полученньй с применением сушки при температуре 60-150 С обладает высокой ингибируюшей актив ностью.

Полисахарид подавляет рост опухолей.

Были проведены следующие опыты.

Клетки опухоли саркомы-180 трансплантируют внутрибрюшинно в организм мыши и после 7-дневного удовлетворительного роста этих клеток вновь трансплантируют под кожу аксиллярной области другой мыши с получением твердых опухолей. Предлагаемое ве-. щество вводят внутрибрюшинно в ко740156

Составитель С. Малютина

Редактор Ж . Рожкова Техред И.Асталош Корректор М. Вигула

Заказ 2970/53 Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государствениого комитета ГГГР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д . 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 личестве 10 мг/кг один раз в день в течение 20 дней при общей дозе

0,2 мл/20 r (вес мыши), а при пероральном введении это вещество дают в количестве 1000 мг/кг,в день в течение 20 дней с введением общего количества 0,2 мл/20 r (вес мыши) °

Ядра клеток всех опухолей погибают по истечении 25 дней после трансплантации, степень подавления опухоли рассчитывают по среднему весу опухолей в группах мышей, которык вводят предлагаемое вещество и среднему весу опухолей мьааей контрольной группы.

Предлагаемый способ позволяет

15 получить препарат, обладающий высокой противоопухолевой активностью. Taic, величина активности препарата, полученного известным и предлагаемым способами 100% и 95-98% соответст- 20 венно, но при этом доза введения предлагаемого препарата 10 мг/кг, т. е. в 60 раз меньше дозы известного (600 мг/кг) .

Препарат может быть использован s медицине при лечении злокачественных опухолей, Формула изобретения

Способ получения полисахарида, обладающего противоопухолевым действием, путем глубинного культивирования продуцента с последующей экстракцией и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения противоопухолевой активности, в качест-. ве.продуцента используют штамм

CorioIus versicoIor .(Fr) gueI. РЕВМ-Р-2414, .CorioIus consors (Perk,)

Jmaz. FERN-Р-9В8,

pargamenus (Fr .) Pat. РЕНИ-Р-2712 класса Basidiomycetes и пеЬед экстракцией полученную культуральную жидкость без отделения мицелия высушивают при температуре 60-150.t.:.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Заявка Японии s 50-323 4, кл. 30 А 3322, ойублик. 1975.