Способ получения антибиотика

Способ получения антибиотика

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

И ПА1 ЕМТУ

Союз Советских

Социалистических

Респубпик

««741804 (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 07.10.77 (21) 2529301/28-13 (23) Приоритет — (32) 31.03.77 (31) 37166/77 (331 Япония (Slp М. Кл.

С 12 D 9/00

Гасударственный камитет

СССР па делам изобретений и открытий

Опубликовано 15.06.80. Бюллетень Ж 22

Дата опубликования описания 15.06.80 (53) УДК 615.779.

925 (088 8) (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Эйдзи Хигасиде Мицуко Асан и Сенити Танида (Япония) Иностранная фирма

"Такеда Кемикал Индастриз, Инк" (Япония) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА его получения в патентной и научно-технической литературе не описан.

11елью изобретения является получение антибиотика общей формулы а

Изобретение относится к области микробиологии и касается получения нового антибиотика. . Предложенныйантибиотик новый и способ

el (H3 0

30 где

В качестве штамма микроорганизма, производящего антибиотик используют штамм No Н3 сн, С ОН

Г

R —. СΠ— СН вЂ” Со- СНе СНе-Снз ипи- т- 0 Сне- Сн

Сх> Н3

Эта цель достигается тем, что штамм No — cardia С вЂ” 15003, который выделен из почвы.

cardia С вЂ” 15003 (ATCC 31281; YF0 13726, Штамм Nocard а С вЂ” 15003 хранится в инFERM 3992) выращивают на питательной сре- ституте исследования фсрментации в отделении де, содержащей источники углерода и азота, ® промышленной науки и технологии (ЕЕй М) с последующим выделением целевого продук- под номером 3992, в Институте фсрментации, та. Осака (1FO) под номером 13726 и в Американской коллекции типовых культур (АТСС), Мэриленд, США под номером 31281.

74 I 804

3

Культурально- морфологические признаки

Вегетативный мицелий развивается как на плотной, так и в жидкой питательной среде.

Гифы имеют в диаметре 0,8 — 1,2 мм, часто образуются метелкоподобные тела (5-200 х х 200-1000 мм), на которых происходит дальнейший воздушный рост, в некоторых случаях они могут быть разделены на фрагменты.

Штамм хорошо растет на различных токсономических средах, в.старых культурах в цепях встречаются конидальноподобные клетки.

Суспензия клеток, полученных из поверхностей таких культур содержит удлиненные эллипсоидальные (0,8 — 1,2 мм — 4,8 — 6,8 мм) и эллипсоидальные (0,8-1,2 х 1,0 — 2,0 мм) тела, подобные артроспорам, имеющие гладкие поверхности, Штамм хорошо растет на различных питательных средах.

Сахаро-нитратный агар.

Рост умеренный. Субстратный мнцелий желтый до коричневого, образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий скудный, белый.

Растворимый пигмент отсутствует или светлый, желтовато-коричневый.

Глицериново-нитратный агар.

Рост умеренный. Субстратный мицелий цвета слоновой кости. Образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий умеренный, белый. Растворимый пигмент отсутствует.

Глюкозо- аспарагиновый агар.

Рост умеренный. Субстратный мицелий от золотистого до ярко-желтого. Воздушный мицелий скудный, белый. Растворимый пигмент яркожелтого цвета. 35

Глицерино-аспарагиновый агар.

Рост умеренный .Субстратный мицелий цвета слоновой кости, образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий скудный, белый.

Растворимый пигмент отсутствует.

Крахмальный агар.

Рост умеренный. Субстратный мицелий цвета слоновой кости до желтого, образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий скудный, белый. Растворимый пигмент отсутствует.

Агар с малатом кальция.

Рост умеренный,.субстратный мицелий цвета слоновой кости, образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий умеренно белый, до цвета слоновой кости. Растворимый пигмент отсутствует, Агар с дрожжевым солодовым экстрактом, Рост умеренный. Субстратный мицелий ко.ричневатый до ярко-желтого, образуются метел. коподобные тела.

Воздушный мицелий умеренный, белый,дс цвета слоновой кости. Растворимый пигмент отсутствует .

Овсяно солодовый агар.

Рост умеренный, субстратный мицелий цвета слоновой кости до желтого, образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий скудный, белый„до светло-желтого. Растворимый пигмент отсутствует.

Пептонный агар с дрожжевым экстрактом и железом.

Рост умеренный. Субстратный мицелий колониальный желтый. Воздушного мицелия нет, Растворимый пигмент колониальный, желтый.

Тирознновый агар, Рост умеренный. Субстратный мицелий цвета слоновой кости, образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий умеренный, белый,до цвета слоновой кости. Растворимый пигмент коричневого цвета.

Физико-биохимические признаки, Растет при температуре 12 — 38 С, хороший рост воздушного мицелия наблюдается при

20 35оС

Желатину разжижает, Крахмал гидролизует, Нитраты восстанавливает.

Молоко пептонизирует, но не коагулирует.

Козеин разлагает.

Меланоидные пигменты на пептонном агаре с экстрактом дрожжей и железом не производит, на тирозиновом агаре производит.

Тирозин разлагает.

Ксантин и гипоксантин не разлагает.

Хорошо растет и усваивает 0-ксилозу, 0-глюкозу, маннозу, фруктозу, сахарозу, трегалозу, усваивает L-арабинозу, О-галактозу, 1-рамнозу, мелибиозу, растворимый крахмал, Слабо растет на мальтозе, раффинозе, глицирине.

Не усваивает лактозу, инозитол, 0-сорбитол, Среда, применяемая для культивирования антибиотика может быть как плотной, так и жидкой, и содержать источники углерода v азота, которые штамм может ассимилировать и переваривать. Кроме того, среда содержит неорганические продукты и микроэлементы.

В качестве источников утлерода используют глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, декстрин, крахмал, глицерин, маннит, сорбит, жиры и масла (например соевое масло, свиное сало, куриный жир).

Источником азота может быть, например, мясной экстракт, дрожжевой экстракт, сухие дрожжи, соевое молоко, жидкость от замачивания зерна, пептон, мука из хлопковых семян, истощенная меласса, мочевина, соли аммония, например сульфат аммония, хлорид аммония, нитрат аммония, ацетат аммо. ня. Среда может также содержать соли натрия, калия, кальция, магния, железа, марганца, цинка, кобальта, никеля, соли фосфорной и борной кислот и соли органических кислот, такие как ацетаты и лро5 74 l пионаты. Среда в качестве добавок может содержать различные аминокислоты, например глутаминовую и аспарагиновую кислоты,алании,глицин, лизин, метионин, пролин), пептиды, витамины, например В,, В, никотиновую кислоту

В,2, С, Е), нуклеиновые кислоты (например пурин, пиримидин и их производные).,для установления рН среды туда добавляют неорганическую или органическую кислоту, щелочь, буфер, В качестве противовспенивающих агентов могут быть добавлены подходящие количества масел, жиров, поверхностно-активных веществ.

Культивирование проводят в любых условиях: стационарно, при встряхивании, погруженых, аэробных и др. Условия культивирования зависят от условий и состава среды, штамма, методики культивирования и других факторов; предпочтительно проводят инкубацию при 20-35 С при первоначальном рН около 7,0.

Предпочтительной является температура

23 — 35 С при первоначальном рН 6,5 — 7,5.

Инкубышю продолжают до тех пор, пока содержание антибиотика не станет максимальным.

Для культивирования при встряхивании или аэробного погружного культивирования в жидкой среде25 требуется 48 — 144 ч.

Антибиотик накапливается в ферментациониом бульоне как внеклеточно, так и внутриклеточно. Его определяют с помощью тонкослойнои хроматографии.

ЭО

804 6

Ферментативный бульон разделяют на клетки и фильтрат с помощью фильтрования или центрифугирования. Фильтрат экстрагируют таким . же образом этилацетата. К клеткам прибавляют

35 такое же количество 70%-ной смеси ацетонвода, как и фильтрата, а после одночасового перемешивания при 20сС суспензию фильтруют. Иэ фильтрата удаляют ацетон и полученный водный раствор экстрагируют этилацетатом. Каждый из экстрактов концентрируют до 0,01 объема и подвергают тонкослойной хроматографии на стеклянной пластине с силикагелем, Система растворителей: хлороформ-метанол 9:1. Активность ,определяют по интенсивности пятен, определяемой

45 при облучении УФ-излучением при 2537 X.

Антибиотик выделяют и очищают с помощью адсорбентов, таких как активированный уголь, макропористые неионные смолы, силикагель, окись алюминия или экстракцией растворителем.

$9

Растворителями, пригодными для экстракции фильтрата, могут быль несмешивающиеся с водой органические растворители, такие как сложные эфиры жирных кислот, например этилацетат и амилацетат, спирты, например бутанол, галоидированные утлеводороды, например хлороформ, и кеитоны, например метилизобутилкетон.

Экстракцию проводят нри значении рН, близком к нейтральному, предпочтительно устанавливают рН культуральной жидкости, равным 7, и экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой и концентрируют при пониженном давлении.

Затем к концентрату прибавляют такой неполярный растворитель, как петролейный эфир или гексан, и собирают сырой продукт,содержащий активное соединение. Очистку проводят адсорбционной хроматографией, предпочтительно используют силикагель. Проявление проводят, начиная с петролейного эфира и гексана, а элюирование антибиотика осуществляют при добавлении полярного растворителя, такого как этилацетат, ацетон, этанол или метанол.

При использовании силикагеля (005 — 0,2 мм) в качестве носителя проводят хроматографию на колонке с серийным увеличением отношения гексана к этилацетату. Отбирают образец элюата и исследуют с помощью тонкослойной хроматографии и фракции, содержащие антибиотик, объединяют и концентрируют при пониженном давлении. Затем к концентрату прибавляют петролейный эфир или гексан, в результате чего получают сырой продукт. Так как этот продукт содержит примеси, продолжают его очистку. Очищают его с помощью второй колонки с силикагелем, используя систему растворителей. Проявляющая система состоит из галоидированного углеводорода, такого как хлористый метилен или хлороформ, с добавкой полярного растворителя, такого как спирт, например метанол или этанол, кетона, как ацетон или метилэтилкетон. Таким путем выделяют антибиотик.

При использовании макроскопической адсорбирующей смолы в качестве очищающего средства для сырого продукта, элюирование антибиотика осуществляют смесью воды с низшим спиртом, низшим кетоном или сложным. эфиром. Низшим спиртом может быль метанол, этанол, нропанол или бутаиол, а низшим кетоном может быть, например, ацетон или метилэтилкетон. Сложным эфиром — этилацетат.Сырой продукт растворяют в 60%-ной амеси метанол— вода и адсорбируют на колонке,Дайон нР-10.

Колонку промывают 70%-ной смесью метанол— вода, а затем проводят элюирование 90%-ной смесью метанол — вода. Таким путем антибиоппс элюируют из колонки. Фракции, содержащие антибиотик, объединяют и концентрируют при пониженном давлении. К сухому продукту добавляют 5-8 объемов этилацетата и смесь оставляют стоять до отделения кристаллов антибиотика. Эти кристаллы антибиотика содержат несколько активных компонентов С 15003, P-3 и Р4. Их затем отделяют друг от друга с помощью адсорбента. Используя сипикагель или макропористую неиониую адсорбирующую смолу и растворители, можно элюировать необходимый компонент. Например, при использовании силикагеля проявление проводят гек7 741804 .8 саном, этилацетатом или хлороформом-метано- рования, включающего использование 60%-ной лом, в результате чего активные компоненты смеси метанол-вода и 95%-ной смеси метанолС 15003, P-4, P-3 и P-3, выделяют в таком вода с добавкой 5% хлористого натрия, P 3, порядке. После определения тонкослойной хро- P-3 и P-4 поглощаются в укаэанном порядке. матографией фракции, соответствующие С-15003, > После отбора образцов и определения с помоP-4, P-3 и P-3 соответственпо, концентрируют щью тонкослойной хроматографии каждую при пониженном давлении и к концентратам группу активных фракций концентрируют при прибавляют этилацетат. Активные компоненты пониженном давлении и кристаллизуют нз этилмогут быть получены в виде кристаллов. При ацетата. Выделенные кристаллы содержат этилиспользовании макропористой неионной адсор- 1g ацетат как кристаллизацнонный растворитель бирующей смолы может быть применен гради- и после сушки над пятиокисью фосфора при ент элюирования с изменением соотношения 70 С в течение 8 ч показывают физические и спирта, кетона или сложного эфира и воды. химические свойства, данные которых приведеНапример, с помощью метода градиента злюи- ны в таблице.

>о

741804 о

I rl а о с и ф <.„ ф

vi о u7" Ф щ

1 +! о р (I

«) 1 с9

I/Ъ

ОО

° «4 о о а

Ю о

ОО

Ф„а 3 м ъ

Н

1 «3

1 ь

Ch (v v x z Ю и о

1 т

1 ! ч

1 с! II (Ь!

», о

Е! о

1 т

"о.

Ми

o1„ и1, 11

1 î !

М й!

1p,0

le о И

3и ()

ОЭ ж

u /) сч о а о о

CZ

С ж

v о о о В о ж

+! о о о о о

СО Ф II и

«1, л а о О

С 4 00 о m

Д Г с

° Ч, » t ф м

10 Г) о

О а co ч> а (ф о о о

v>

TK

«Ч

О 0

О0 С )

«-

«»

О

lA с3

QQ о

М Ъ ц а

D и

Ф оо ч . 00

tV С 4 о ( Ф

МЪ

ОО д а

00 с1 сч

Й

° °

Рч

i5g м

:f

F и и (ч Г 4 00 д а ао о и

СЧ

00 о

lA

« а а

О Оо

Ф с 4 (Ч

vip

С Ъ СЧ 00

ГЧ М 00 (Ч C4 <

OÎ, аео гч оо

ott с СЧ м сг) С 4 Оо

П а О0 4 CV ГЧ ь 1»

Е о

Рй

Ю ф

v о а о" о0 а оС а сч о

° « 38

3« ч

ОиО

<> Со Ю

eh ч < фа ОО0

Оео

00 М со ж р о

«ч «- о во

«ч ч

opß е ч

»«« о а О О0 и (vj «4

«-<»«

5 о

Я ф о л

Д «

Х Я

Я о

И3

741804 ь и

Ф .о

Ф ю

Ф (м

МЪ

ФЭ зф й(ф

О О

Й о о о

1.

)4 )4 длит при перемешиваюш с 5))т) об. k безвол. ного сульфата натрия и конпевтрирукп при пониженном давлении до объема 200 об.ч.

К концентрату прибавляют петролсйный эфир и отфильтровывают нерастворимые продукты; фильтрат перемешивают с 10 об. ч. силикагеля и отгоняют этилацетат нри пониженном давлении. Остаток помещают в верхнюю часть колонки с силикагелем (400 об. ч.). Элюирование осуществляют с помощью 500 об. ч. гексана, 500 об. ч. смеси гексан-этилацетат (3:1), 500 об. ч. смеси гексан-этилацетат (1:1), 500 об. ч. смеси гексан-этилацетат (1:3), 500 об. ч. этилацетата и 1000 об. ч. смеси этилацетата с метанолом (50:1), собирая. элюат фракциями по 100 об. ч.

Одну часть каждой фракции концентрируют досуха и к концентрату добавляют О,1 об. ч. этилацетата, получая смесь. Смесь наносят в виде пятна на расстоянитт 2,5 сМ от нижнего края стеклянной пластины с силикагелем и проявляют примерно 17 см в системе растворителей этилацетат-метанол (19:1) . После проявления проводят определение в ультрафиолетовом свете.

Объединяют активные фракции Р 23-N 28 с Rf 0,6-065 и концентрируют их при пониженном давлении примерно до 20 об. ч. К этому концентрату прибавляют 150 об. ч. петролейного эфира для получения 15 об. ч. продукта.

Пример 4. Экстрагируют при перемешивании 32000 об. ч. влажных клеток, полученных в примере 3, 50000 об. ч. 70%-ного раствора ацетона в воде. Затем фильтруют на фильтре, работающем под давлением. Снова повторяют экстракцию и фильтрование. Объединяют фильтраты и отгоняют ацетон при пониженном давлении. Прлученную водную систему пропускают через колонку с 5000 об. ч. дуайона нР -10. Колонку промывают водой и 50%-ным водным метанолом, после чего элюируют

15000 об. ч. 90%-ного метанола B воде. Элюат концентрируют при пониженном давлении до

3000 об. ч. и встряхивают с таким же количеством воды и этилацетата, вновь повторяют процедуру. Объединяют этилацетатные соли, промывают водой, сушат при добавлении безводного сульфата натрия и концентрируют при пониженном добавлении до 200 об. ч. После прибавления петролейного эфира отфильтровывают осадок.

Полученный продукт очищают на колонке с силикагелем, собирая 8,0 об. ч. сырого продукта.

Пример 5. В 10 об. ч. этилацетата растворяют 1,5 об. ч. сырого продукта, полученного в примере 3, и хорошо перемешивают раствор с 4 об. ч. силикагеля. Отгоняют этилацетат при пониженном давлении. Остаток наносят на верхнюю часть колонки с 300 об. ч. силикагеля и колонку промывают сначала 500 об. ч. хлороформа, а затем элюируют 500 об. ч. смеси хлоI3, I)Hf ! Ь вый .штибио ик облалает активностью ив. ибироваш1я роста против микроорганизмов. которые вызывают болезни растений.

Ангибиотик и его компоненты обладают противоопухолевой активностью 200% при дззе

0,00625 мг/кг/день.

В испытании на острую токсичносгь на мышах при внутрибрюшинном введении LDgp составляет 0,3!3 мг/кг.

Антибиотик обладает сильной ингибируюшей активностью против грибков и простейших и является ценным для борьбы с грибками и простейшими.

Антибиотик может быть использован для лечения болезней растений, вызванных МНКроорганизмами.

Пример 1. Штамм Nocardia С-15003 (ЯРО 13726, FERM 3992, АТСС 31281), выращенный на среде (агар с дрожжевым и солодовым экстрактом)„используют для инокулирования ферментера емкостью 200 об.ч., содержащего

40 об.ч. засеваемой культуральной среды (2% глюкозы, 3% растворимогр крахмала, 1% сырой соевой муки, 1% жидкости от замачивания зерна, 0,5% полипептона, 0,3% NaCI, 0,5% СаСО3 25 рН 7,0) . Инокулированную среду инкубируют при 28 С в течение 48 ч для получения посевной культуры. 0,5 об. ч. полученной . посевной культуры переносят в ферментер, содержащей 40 об.ч. ферментационной среды, состоящей из 5% деке- 3ц трина, 3% жидкости от замачивания семян кукурузы, 0,1% полипептона и 0,5% СаСОз, рН 7,0; культивируют при 28 С в течение 90 ч, получая инокулят (посевную культуру). Посевная культура имеет титр 25 мг/мл.

Пример 2. Порцию из 10 об. ч. посевной культуры, полученной в примере 1, переносят в ферментер емкостью 2000 об. ч., содержащий 500 об. ч. посевной культуральной среды иинкубируютпри 28 С в течение 48 ч. Переносят 500 об. ч. полученной культуры в танк из нержавеющей стали емкостью 50000 об. ч., содержащий 30000 об. ч. посевной культуральной среды и культивируют при 28 С в условиях аэрации для получения посевной культуры. Эту культуру используют для посева в танк емкостью

200000 об, ч., содержащий 100000 об.ч. ферментационной среды, подобной той, что использовали в примере 1, при степени инокулирования

10%. Засеянную среду инкубируют при 28 С в условиях аэрации. Полученная культура имеет титр 25 мг/мл.

Пример 3. К 95000 об. ч. культуры, полученной в примере 2, добавляют 2000 r.

Гифлосуперселя и после тщательного перемешивания смесь фильтруют. Затем фильтрат экстрагируют 30000 об. ч. этилацетата. Эту процедуру повторяют снова. Объединяют этилацетатные слои, дважды промывают 30000 об.ч. воды, 741804

15 ро форм- метанол (50: 1), 500 г смеси хл ороформ-метанол (?О:1) и 500 г смеси хлороформметанол (10:1) . Элюат собирают. фракциями по 25 об. ч, Концентрируют при пониженном давлении

0,5 об. ч, каждой фракции. К концентрату прибавляют 0,05 об. ч. этилацетата и смесь используют как образец для тонкослойной хроматографии на силикагеле (проявляющая система:хлороформ-метанол 9:1) .

Фракции N 39 и 40 при 2537А в зоне Rf

0,50-0,60 собирают и концентрируют досуха при пониженном давлении. К остатку прибавляют 2 об. ч. этилацетата и оставляют смесь стоять, в результате чего получают 0,150 об. ч. кристаллов антибиотика.

Растворяют кристаллы антибиотика в. 15 об.ч. метанола, затем прибавляют 0,30& r хлористого натрия и 15 об. ч. воды. Набивают колонку

200 об. ч. Дайона рН-10 и калибруют 600 об.ч.

50%-ного раствора метанола в воде, содержащего 50% хлористого натрия. Образец приготовленного выше раствора пропускают через колонку и проводят элюирование, используя .

1500 об. ч. 60%-ного метанола в воде, содержащего 5% хлористого натрия и 1500 об. ч. 95%ного метанола в воде. Элюат собирают фракциями по 15 об. ч. и каждую фракцию исследуют с помощью тонкослойной хроматографии иа силикагеле. Фракция 145-153 содержат компоненты С-15003 P-3, фракции 167-180 содержат

С-15003 P-3 и P-4, а фракции 185-190 содержат С-15003 Р-4, Каждую группу фракций концентрируют и растворяют, добавляя 50 об. ч. воды и

100 об, ч. этилацетата. Раствор встряхивают в делительной воронке и отделяют водный слой.

После промывки дважды 50 об. ч. воды этилацетатный слой сушат над безводным сульфатом натрия, концентрируют и оставляют стоять. „

По описанной выше методике получают кристаллы из каждой группы фракций. Кристаллы собирают фильтрованием, сушат и получают, об. ч.:

С-15003 P-4 0,070

С-15003 P-3, P-4 0,018

С-15003 P-4 0 015 °

Смесь кристаллов С-15003 P-3 и P-4 (0,018 ч) растворяют в 0,3 об.ч. этилацетата, наносят в виде пятна на линию на расстоянии 2,5 см от

50 нижнего края стеклянной пластинки с силикагелем, затем проявляют смесью этилацетата с метанолом (19:1). После. проявления примерно 18 см выскабливают полосу абсорбции при

Rf 0,68 (P-4) и Rf 065 (Р 3), каждую независимо экстрагируют этилацетатом, содержащим незначительное количество воды. Полученный этилацетатный экстракт промывают водой, сушат над безводным сульфатом натрия, концентрируют при пониженном давлении и оставляют стоять.

Получают 0,010 об. ч. кристаллов С-15003

Р-4 и 0,003 об. ч. кристаллов С-15003 P-3, из фракции Rf 0,68 и Rf 0,65 соответственно.

Пример 6. Инокулируют 1000 об. ч. культуры примера 2 в танк из нержавеющей стали, содержащий 100000 об. ч. посевной культуральной среды; засеянную среду инкубио руют при 28 С в условиях аэрации и перемешивают в течение 48 ч. Затем полученную культуру переносят в танк емкостью

2000000 об. ч., содержащий 1000000 об. ч. ферментационной среды, подобной той, которая была использована в примере 1. Культивирование проводят при 28 С в условиях аэрации и перемешивании при внутреннем давлении

1 кг/см в течение 90 ч. Полученная культура г имеет титр 20 мг/мл, К 90000 об. ч. полученной культуры добавляют 900000 об. ч. ацетона и после перемешивания в течение 1 ч прибавляют 20000 об. ч. Гифлосуперселя. Смесь затем перемешивают и фильтруют на фильтре, работающем под давлением. К 1700000 об. ч. колученного фильтрата прибавляют 500000 об. ч. воды и смесь экстрагируют 1000000 об. ч. этилацетата. Этилацетатный слой промывают водой, сушат, прибавляя безводный сульфат натрия и концентрируют при пониженном давлений. К концентрату добавляют птеролейный эфир и собирают полученный осадок фильтрованием и. сушат. Собирают 65 об. ч. сырого продукта.

После этого сырой продукт очищают и получают 9,5 об, ч. С-15003 P-3, 0,300 об.ч.

С-15003 Р-3 и 2,5 об.ч. С-15003 Р-4 °

Пример 7. Растворяют в 1 об ч, тетрагидрофурана 0,015 об. ч. кристаллов антибиотика С-15003, полученных в примере 5, после чего охлаждают раствор до 5 С и прибавляют

0,012 г литийалюминийгидрида. Смесь оставляют стоять на 2 ч. Затем прибавляют 0,5 об. ч.

1%-ного водного раствора серной кислоты, реакционную смесь экстрагируют 2 об. ч. этилацетата. Этилацетатный слой промывают водой, сушат, добавляя безводный сульфат натрия и концентрируют при пониженном давлении. Проводят тонкослойную хроматографию на силикагеле с концентратом, выскабливают зону с Rf 0250,3 и экстрагируют этилацетатом с незначительным количеством воды. Экстракт промывают водой, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. после чего отделяют кристаллы. Кристаллы отфильтровывают и сушат. Получают 0,010 об.ч.

С-15003, плавящегося при 174 С. Элементарный анализ:

Найдено%: С 59,65; Н 658; Й 5,02;

CP. 6,51;, СгаНзтС!МгОа гА

О отличающийся тем, что штамм 2О содержащей источники .углерода и азота с

Nocardia С-15003 (АТСС 31281, «JFO 13726, последующим вьщелением целевого продукFERIVI 3992) выращивают на питательной среде, та.

Составитель С. Малютина

Техред М.. Кузьма

Корректор В. Бутяга

Редактор Л. Емельянова

Заказ 3247/57 Тираж 522

UHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

17

Вычислено,%: С 59,52; Н 6,60; N 4,96;

С 6,27.

ИК-спектр 1715, 1670, 1580 (см ).

УФ(нм): 232 (32750), 244 (ЯИ 30850), 252 (31650), 281 (5750), 288 (5700).

74)804 18

Предлагаемый способ позволяет получить новый антибиотик, который найдет применение в медицине и ветеринарии.

Формула изобретения Способ получения антибиотика общей формулы