Способ получения иммобилизованной пероксидазы

Способ получения иммобилизованной пероксидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советски к

Социалистическик

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

742434 (6I ) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 11.10.78(2! ) 2687230/23-04 (51 ) M. Кл.

С 07 G 7/02

С 07 G 7/022 с присоединением заявки J%—

Гооударстееиный ком нтет (23 ) П риоритет по делам изобретений и открытий

Опубликовано 25.06.80. Бюллетень № 23

Дата опубликования описания 28.06,80 (M) УД 577.15. ,07(088.8 ) B. П, Гаврилова, И, И, Шамолина, Л, С. Степанова, В. A Хохлова, .Л. А. Вольф, Т.Н, Калинина и Л. H. Федорова (72) Авторы изобретения

Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени институт текстильной и легкой промышленности им. С. М. Кирова и Ботанический институт им. В. Л, Комарова АН СССР (7I) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ

ПЕ РОКС ИЛА 361

Изобретение относится к области получения иммобилизованных ферментов, в частности, пероксидаз.

Пероксидазы, иммобилизованные на полимерных носителях, в настоящее время используются для предотвращения

5 роста микроорганизмов в реакторах, для холодной стерилизации жидкостей (например, пища и медицинские жидкости ), для повышения стойкости пива к холодното му помутнению, Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ получении иммобилизованной пероксидазы путем обра!

5 ботки полимерного носителя на основе модифицированного полистирола водным раствором пероксидазы хрена в присутсто вии бикарбоната натрия при 0 4 С . Продолжительность обработки 20 ч fl), Недостатками этого способа являются использование пероксидазы из хрена (сложность и дороговизна получения фермента), длительность обработки носителя раствором пероксидазй, проведение процесса иммобилизации при низких температурах, а также использование синтетического полимерного носителя, процесс получения которого длителен и многостадиен.

Цель изобретения - упрощение процес» са.

Это достпгается известным способом получения иммобилизованной пероксидазы путем обработки полимерного органичес» кого носителя, в качестве которого ис» пользуют альгинатное волокно, культуральным фильтратом базидиального гриба

Сеггепсзмах1тпс1 при 18-22 С в течение о

10-30 мин, Предлагаемый способ отличается от известных использованием пероксидазы— продукта микробиологического синтезакультурального фильтрата Сеггепсз пзстт;ттпст использованием в качестве носителя альгинатного волокна, проведением процесса обработки при 18-22 С в течение 1О30 мин.

742434

3

Предлагаемый способ позволяет использовать более доступную и дешевую пероксидаэу, --отсутствует необходимость осуществления сложного синтеза носителя, процесс проводят при комнатной температуре и в течение небольшого промежутка времени, Способ отличается простотой и хорошим качеством получаемого продукта (выход по, активности достигает 80100%).

Способ осуществляют следующим образом.

Фермент пероксидаэа получают выращиванием базидиального гриба Сегvena

1ъал11псв культуре поверхностным способом на питательной среде„содержащей

10 г глюкозы,. 3 г пентона, 1 г

КН РО,, 0,5 г Мд GО ° 7Н О и 1 л водопроводной воды.

Продолжительность выращивания гриба составляет 7-8 сут при температуре о

26 С. Данный штамм гриба синтезирует внеклеточную пероксидазу. Активность фермента составляет 6,37 ед/мг белка, Активность фермента определяют по окислению бензидина.

Навеску альгинатного волокна обраба тывают в течение 10-30 мин культураль- g0 ным фильтратом, полученным в результате выращивания гриба Сеггеьа maz ma.

По окончании сорбции продукт промывают дистиллированной водой.

Анализ полученных данных показывает наличие высокой антимикробной активностй препарата иммобилизованной пероксидазы, полученного по предлагаемому способу. Волокна обладают высокой степенью

1 чувствительности в отношении грамо- 40 трицательных бактерий (Евс"пете&11Q еоЬ ) . что определчет возможность использования его для санации жидких сред.

Пример 1. 0,2 г альгинатного волокна обрабатывают в течение 10 мин

О при 22 С 5 мл культурального фильтрата базидиального гриба СЮ ела тспдпос активносгью 0,357 ед/мл. Продукт отмывают дистиллированной водой. Получают препарат с активностью 0,139 ед/мг носителя (88% от исходной).

Пример 2. 0,2 г альгинатного волокна выдерживают в 5 мл культурального фильтрата базидиального гриба Сего

renana< ma при температуре 20 С в течение 20 мин, Продукт отмывают ди стиллированной водой. Получают препарат с активностью 0,158 eg/ìã носителя (100% от исходной).

Пример 3, 1 г альгинатного волокна выдерживают в 15 мл раствора культурального фильтрата баэидиального гриба Сеггепа тамма, содержащего пероксидазу, при 18 С в течение 30 мин.

Продукт отмывают дистиллированной водой.

Получают препарат с активностью

0,095 ед/мг носителя (100 o от исходной) °

Формула изобретения

Способ получения иммобилизованной пероксидаэы путем обработки органического полимерного носителя раствором, содержащим фермент - пероксидазу, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве носителя используют альгинатное волокно, в качестве раствора, содержащего пероксидазу— культуральный фильтрат базидиального гриба Сеггепа чсгммщ, а обработку им носителя осуществляют при 18-22 С в течение 10-30 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США М 3860486, кл. 195-68, опублик. 1975 (прототип).

Составитель О. Скородумова

Редактор С. Суркова Техред М. Петко Корректор М. Коста

Заказ 3401/26 Тираж 495 Подписное

HHMHIIN Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4