Штамм д-13 -тест-культура для микробиологического количественного определения -тирозина

Штамм д-13 -тест-культура для микробиологического количественного определения -тирозина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (ii>742462

Союз Советских

Социалистических

Реслублик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 130778 (21) 2644745/28-13 с присоединением заявки ¹â€” (51)М. Кл.

С 12 К 1/02

С 12 D 13/06

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 25,06 80. Бюллетень № 23

Дата опубликования описания 30. 06. 80 (53) УДК663.11 (088.8) (72) Авторы изобретения

Б. П. Карабеков, М. Г. Оганесян, С. В. Кажоян и A. Г. Чахмахчян

Чаренцаванский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промыттленных микроорганизмов (71) Заявитель (54) ШТАММ Bacillus thuringiensis D-13 pig

ТЕСТ-КУЛЬТУРА ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОЛИЧЕСТВЕННОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ 4 -ТИРОЗИНА

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается ноного штамма, используемого для микробиологического количественного определения (,-тирозина в органических смесях и веществах, а также в медицине при диагностике некоторых заболеваний, имеющих место в результате нарушений окислительного обмена фенилаланина и тирозина.

Известны различные пигментообраэующие микроорганизмы, которые исполь эуются для количественного и качест-венного определения L -триптофана микробиологическим способом (1).

Предлагаемый штамм является производным от штамма. Bacillus thurin

giensis 9 58 и получен под действием мутагена N-метил-N -нитро-N-нитрозо- 20 гуанидина. Штамм Д-13 pig отличается способностью к пигментообразованию, проявляемой только в присутствии аминокислоты тирозин, что делает его пригодньм для количественного 25 определения L --тирозина в различных органических смесях и веществах.

Интенсивность пигментообразовавия про. порциональна концентрации L -тирозина в анализируемых пробах. Рост штамма 30 наблюдается уже в присутствии 15—

20 мкг/мл тирозина в среде.

Предлагаемая культура характеризуется следующими свойствами.

Штамм Baci(gus thuringiensis Д-13

pig-тес r-культура для микробиологического количественного определения

t-тирозина. Хранится в музее культур промышленных!микроорганизмов филиала

ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов.

Морфологические признаки. Спорообразующая, кристаллообразующая, подвижная, граммположительная палочка.

Размеры (1,2-1,4) (3-6) мк.

Культуральные и физиологические признаки. Хорошо растет на мясо-пептонных средах, окрашивая их в краснокоричневый цвет, На твердых агаризованных средах (мясо-пептонный агар, агар на бульоне из рыбного гидролизата, .агар на переваре Хоттиигера) образует сероватые колонии, окруженные на первых стадиях роста (18-36 ч) розоватым ореолом; при дальнейшей инкубации среда полностью окрашивается в красно-коричневый цвет. В жидких органических средах и минимальных соленых растворах, содержа742462 колориметре ФЭК-56М по стандартной кривой, отражающей зависимость оптической плотности от концентрации тироэина в среде. щих тирозин, пигментообразов ание начинается после 1.2 ч инкубации с аэрацией на качалке при 37ОC. Интенсивность окраски возрастает с увеличением длительности инкубации.

Минимальная солевая среда с глюкозой и L-тироэином. Наблюдается пиг.ментообраэование, интенсивность окрас ки пропорциональна концентрации тирозина в среде.

Факультативный аэроб. Оптимальная температура для роста 28-30 С, Оптимальная температура для пигментооб разования 37 C. Оптимум рН 7,0-7,4. ,Синтезирует водо-растворимый пигмент красно-коричневого цвета при наличии в среде L -тирозина. Непатогенен для человека и животных. Остальные физиологические признаки характерны для вида .

Наибольшая чувствительность тесткультуры наблюцается в пределах 20- 2О

200 мкг/мл !. -тироэина.

Составы сред для размножения культуры.

1. Органическая среда: мясо-пептонный бульон, бульон на переваре 25

Хоттингера, бульон из рыбного гидролиэата и т. д.

2. Минимальная солевая среда:

К<НРО4 30 г, КН РО„1,0 г, Na SO4

0,1 г, NgSG4 7Н О 10 М, СаСГ 10 М, МПС6 1 0" М ИН4СООСН 3 10 М, глюкоза 4 10 М, L-глутаминовая кислота

0,15%, вода 1000 мл.

Пример. Использование предлагаемого штамма Д-13 pig в качестве тест-культуры для микробиологического определения 4 †òèðîçè.

Определение проводят в минимальной солевой среде, состав которой указан виае, Анализируемые образцы предварительно отделяют центрифугированием от 40 взвешенных частиц и разводят в минимальной среде в определенное число раз в зависимости от ожидаемой концентрации Ь -тирозина.

Параллельно готовят стандартный ряд пробирок с минимальной средой, в которые добавляют различные количества чистого тирозина — 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 100, 150, 200 мкг/мл

Все пробирки с анализируемыми пробами и контрольными растворами инокулируют определенным количеством суспензии индикаторной культуры. Инкубируют на качалке в течение 20 — 22 ч.

Количество тирозина определяют по интенсивности пигментообраэования коло 5, риметрйчески на фотоэлектрическом

С ос т ав ит ель

Редактор П. Горькова Техред Н.Ков

Индикаторную культуру предварительно инкубируют в питательном бульоне и перед началом определения дважды отмывают буфером от бульона.

Наибольшая чувствительность тесткультуры наблюдается в пределах 20200 мкг/мл тирозина в среде.

Формула изобретения

Штамм Вас1Ицз thuringiensis Д-13 р1д — тест-культура для микробиологического количественного определения .-тироэина. Хранится в музее культур промышленных микроорганизмов филиала

ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов.

Морфологические признаки. Спорообразующая, кристаллообразующая, подвижная, граммположительная палочка размером (1,2-1,4} (3 — 6) мк.

Культуральные и физиологические признаки. Органическая среда. Мясопептонный бульон, бульон на переваре

Хоттингера, рыбном гидролиэате . Синтезирует красно-коричневый пигмент с окрашиванием среды. На твердых агариэованных мясо-пептонных средах об разует сероватые колонии; при длительной инкубации среда полностью окрашивается в красно-коричневый цвет.

Минимальная солевая среда с глюкозой и L -тирозином. Наблюдается пигмеи тообраэование; интенсивность окраски пропорциональна концентрации тироэина в среде.

Факультативный аэроб. Оптимальная температура роста 28-30 С; оптимальная температура пигментообразования

37 С. Оптимум рН 7,0-7,4. Сахаролитические, протеолитические свойства и серологические признаки — типичные для Bacillus thuringiensis var.

dendrotimus.

Непатогенен для человека и животных.

Наибольшаяочувствительность тесткультуры наблюдается в пределах 20200 мкг/мл L-тирозина.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Swack N. S., Mites P. G °, 1960 Nycofogia, 52, 574

М. Ларина алена Корректор С. щомак

Подписное

Заказ 3407/27

Тираж 522

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР пс делам изобретений и открытий

113035 Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал НПП Патент, г. ужгород, ул . Проектная, 4