Штамм 4-76 1952-продуцент антибиотика а-23/791

Штамм 4-76 1952-продуцент антибиотика а-23/791

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

4

;! ,;6 31 e:

ИЗОБРЕТЕНИЯ

<1>744033, Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 220279 (21) 2726134/30 15 г (51)М. Кл.2 с присоединением заявки №вЂ”

С 12 К 1/02

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 300680. Бюллетень ¹ 24 (53) УДК 576. 852 (088. 8) Дата опубликования описания 300680

Е.Т. Никитина, A.Ê. Каркинбаева, Л.A. Ветлугина, М.М. Кулдыбаев, Д.О. Амирбекова и Е.К. Кошанова (72) Авторы 1эобретения

Институт микробиологии и вирусологии AH Казахской ССР (71) Заявитель (54) ШТАММ 4-76 Actinomyces roseofIavus Arai.

1952 — ПРОДУЦЕНТ АНТИБИОТИКА A -23/791

Изобретение относится к области производства антибиотиков, используемых в сельском хозяйстве.

Для повышения урожаев сельскохозяйственных культур, предуп(зеждения и лечения их болезней в настоящее У время широко используют антибиотики и другие препараты микробиосинтеза 11).

В борьбе с корневой гнилью огурцов применяют антибиотик A-23/791, полностью подавляющий рост патоге11ов, стимулирующий рост проростков огурцов и ускоряющий их цветение(2).

Цродуцентом антибиотика является

111тамм Act. roseoflavus Arai штамм А-23/791.

На жидкой питательной среде, содержащей 1% рыбной муки, 0,5% пептона, 2% глюкозы, 1,5% лактозы, 0,5% крахмала, Оц,2% сернокислого аммония, 0,5%,хлористого натрия, 0,5% углекислого кальция (рН 6,8-7,2), штамм

A-23/791 при культивировании на качалке (180 оборотов в минуту) в течение 96 ч накапливает 127-222 мг (на литр среды) антибиотика А-23/791 с активностью 3200-4000 ед/MI /о

Е 388-510 при 365 нм. Однакс, 4см

Act. roseoflavus Arai штамм A-23/791 характеризуется недостаточно высоким уровнем биосинтеэа антибиотика.

Целью изобретения является полу5 чение штамма Actinomyces roseoflavus

А-23/791, образующего больше антибиотика A-23/791 с высокой биологической активностью.

Штамм 4-76, полученный иэ вторич10 ной колонии Act. roseoflavus Arai штамма А-23/791 пригизучении естественной изменчивости, отвечает указаг ным требованиям.

Штамм 4-76 Act. roseoflavus Arai

15 хранится в коллекции Института микробиологии и вирусологии AH Казахской ССР sa М 70 и характеризуется следующимй культурально-морфологическими и физиологическими признака20 ми.Синтетические среды. На средах

:Чапека с Глюкозой, Чапека с глицерином и. Гаузе 1 штамм 4-76 не образует. воздушный мицелий или он очень скуд25 ный. Субстратный мицелий — желтый, среды не окрашены.. При микроскопи- ческом исследовании мицелий — членистый, поперечник 0,6-0,8 мк.

Органические среды. На сусло-ага30 ре и среде Гауэе 2 штамм 4-76 воэдуш744033

Фо

)чсм

Продуктнвность по выходу антибиотика (мг ) нз

1 гмицели я

Антибиотическая активность ед/мг

Выход препарата иэ ице ли я

1 л культуральной жидкосТИ- МГ

Sec мицелия из1л культуральной жидкости, r

Штамм

Actinomyces

roseofIavus при

365 нм

4000 510

6000 840

3200,388

57,7

A-23/791

2,2

127

10,1

5,4

1 4-76

A-23 791

„2 4-76

A-23/7 91

3 4-76

273

209

27,1

39,4

39,1 360

40,2 222

25 4 660

4300 790., 9,5

3200 400 5,5

6000 840 26 О ный ммцелий не образует, субстратныймадово-желтый, мягкой консистенции, складчатый, среда не окрашена. Прй

" микроскопическом исследовании мицелмй — членистый, легко распадающийся на фрагменты, -поперечник 1-,Ъ-1,8 мк.

Источники углерода. Использует глюкозу, малътозу, лактозу, маннит, галактоэу, арабиноэу и лнмоннокислый натрий. "лабо использует крахмал и

axaposy.

Источники азота. Интенсивно использует пептон, аргинин, аланйн, серии, лейции. На cpeäàõ с триптофаном, мочевиной, гистидином, валином, лизином, аспарагином, аэотнокислйм кальцием и калием развивается слабо. Не 15 усваивает глютаминовую и аспарагиновую кислоты.

Штамм 4-76 желатину разжижает на пятые — седьмые сутки, молоко коагулирует и частично пептонизирует, крах- 20 мал гидролиэует интенсивно, натраты / не восстанавливает, — сахарозу -инвер тирует, на клетчатке не растет, серовбдород не образует. Развивается при рН 5,5-8,5, температурный оптимум 28-30. С ° Аэроб.

Обладает ярковыраженной антибиотической активностью по отношению к фнтопатогенным грибам Fusarium okysporum, Fusarium soIani, Venturiа

cucumerina, Pythium de Baryanum, Ascochyta meIonis — возбудителям бо-. лезней растений.

Полученный иэ биомассы штамм 4-76 антибиотик идентичен по физико-химическим свойствам антйбиотику А-23/791 иэ Actinomyces roseofIavus Arai штамм

A-23/791. Оба представляют собой желтые аморфные порошки. Их УФ-спектр характеризуется двумя максимумами при 264 и 365 нм (в этаноле) . Хро- 40 матографический спектр обоих антйбйотиков идентичен хроматографическому спектру роэеофунгина. Оба антибиотика растворимы s низших спиртах,,водном ацетойе, водонасыщенном н-бута- 45 ноле и иерастворимы в воде, серном и "петролейном эфирах.

Сравнительное изучение биосийтеэа антибиотика A-23/791.Act. roseofIavus штаммом A-23/791 и предлагаемым штаммом 4-76, проводят следующим образом.

Получение посевного материала.

600 мл питательной среды, .содержащей,Ъ: кукурузный экстракт 1,0; глюкозу 1,0; (NH4) SO4 0,35; крахмал 1,5) мел 0,5; хлористый натрий

0,5; разливают в качалочные колбы по 100 мл и стерилиэуют прн

0,8 атм 30. мин. Полученную среду засевают штаммами АсС. roseofIavus.

А-23/791 и 4-76 (по три колбы), предварительно выращенными на скошенной агаризованной питательной среде, из расчета. одна пробирка на пять колб. Состав агаризованной питательной среды,%: рыбная мука 1; пептон 0,5; глюкоза 2,0; лактоэа 2,0; серно-кислый аммоннй 0,2; мел 0,5; крахмал 1,0; хлористый натрий 0,5.

Посевной материал выращивают при .

27-28 С в течение 48 ч в колбах на о качалке при 180 об/мин.

Ферментация.

10 л среды, содержащей,Ъ; рыбную муку 1,0; пептон 0,5; глюкозу 2,0; лактозу 1,5; крахмал 0,5; сернокислый аммойий 0,2; мел 0,5; хлорнстый натрий 0 5 разливают в 100 колб по

100 мл и стерилиэуют при 0,5 атм

30 мин. После стерилизации и охлаждения в среды вносят посевной материал в количестве 5Ъ. Колбы ставятся на качалку (180 об/мин). Ферментация продолжается 96 ч при 28 С.

Обработка Культуральной жидкости.

Антибиотик выделяют иэ мицелия (влажность 70В) зкстракцией ацетоном (1:3). Ацетон упаривают в вакууме о при 40 С из водного остатка, активное начало экстрагируют н-бутанолом.

Растворитель упаривают, антибиотик осаждают серным эфиром, осадок отфильтровывают и высушивают в вакууме до желтого аморфного порошка. Aicтивность определяют диффузионным методом с использованием в качестве тесткультуры Cand. guiIIiermondii.

Примеры, иллюстрирующие продуктивность испытанных штаммов, приведены в таблице.

744033

Формула изобретения

Составитель М. Мирзаев I

Техред О. Андрейко KoppeK Top М. Демчик

Редактор Г. Пилипенко

Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Зак аэ 3647/1

Филиал ППП Патент, г. Ужгород,, ул; Проектная, 4

Как видно из данных таблицы, штамм

4-76 Act. roseofIavus образует на 1 л питательной среды 273-660 мг антибиотика. Ранее предложенный штамм

A-23/791 на том же объеме питательной среды накапливает 127-222 мг антибиотика, т.е. почти в 2-3 раза меньше.

Преимуществом предлагаемого штамма 4-76 является то, что продуцируемый им антибиотик обладает большой биологической активностью, что подтверждено величиной экстинкции Е (см,таблицу).

Существенным достоинством предлагаемого штамма является также,и то, что штамм 4-76 более продуктивен на 1 г мицелия оН накапливает QT 9,5 до 26,0 мг антибиотика. При меньшем накоплении мицелия он обеспечивает больший выход целевого продукта— антибиотика, что позволяет при выделении антибиотика иэ мицелия снизить расход растворителей.

Штамм 4-76 Actinomyces roseofIavus

Arai 1952-продуцент антибиотика

A-23/791. Получен при излучении естественной изменчивости штамма

A-23/791. Хранится в коллекции Ийститута микробиологии и вирусологии

AH Казахской CCP за Р 70.

Культурально-морфологические признаки.

Синтетические среды. На средах

Чапека с глюкозой, Чапека с глицерином и Гаузе 1 штамм 4-76 не образует воздушный мицелий или он очень скудный. Субстратный мицелий — желтый,. среды не окрашены. При микроскопическом исследовании мицелий — членистый, поперечник 0,6-0,8 мк.

Органические среды. На сусло"агаре и среде Гаузе 2 штамм 4-7б.воздушный мицелий не образует, субстратный— медово-желтый, мягкой консистенции, складчатый, среда не окрашена. При микроскопическом исследовании мицелий — членистый, легко распадающийся на фрагменты, поперечник 1,0-1, 8 мк.

Физиологические признаки.

Источники углерода. Использует глюкозу, мальтозу, лактозу, маннит, галактозу, арабинозу и лимоннокислый натрий. Слабо использует крахмал и сахарову.

Источники азота. Интенсивно использует пептон, аргинин, алании, серин, лейцин. На средах с триптофаном, мочевиной, гистидином, валином, лизином, аспарагином, азотнокислым кальцием и калием развивается слабо. Не усваивает глютаминовую и аспарагиновую кислоты.

Желатину разжижает на 5-7 сутки, молоко коагулирует и частично пептонизирует, крахмал гидролизует интенсивно, нитраты не восстанавливает, сахарову инвертирует, на клетчатке не растет, сероводород не образует.

Развивается при рН 5,5-8,5. Темпера25 турный оптимум 28- 30 С. Азроб.

Обладает ярковыраженной антибиотической активностью по отношению к фитопатогенным грибам Рпзаг1ит oxysрогцщ, Fusarium soIani,)Venturia cu30 cumerina, Pythium de Baryanum, Ascochyta meIonis — возбудителям болезней растений.:

Штамм 4-76 Act. roseofIavus Arai

1952 образует на литр питательной

35 среды 273-660 мг антибиотика A-23/791 с биологической активностью 4300

6000 ед/мг.

Оказывает стимулирующее действие на рост и развитие растений.

40 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Родин М.Н. Общая фитолатология. N., Высшая школа, 1978, с. 320-340.

45 2.,Авторское свидетельство СССР

9 499294, кл. С 12 К 1/00, 1976.