Штамм плесневого гриба 44-продуцент целлюлолитических ферментов

Штамм плесневого гриба 44-продуцент целлюлолитических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

тен тно-те н,:„ библиотека 1 5 4

Союз Советскин

Социалистических

Республик

<11745933 (61) ???????????????????????????? ?? ??????. ????????-????????” (22) ???????????????? 1506.78 (2l) 2629783>

С 12 0 13/10 с присоединением заявки М— (23) Приоритет—

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий

Опубликовано 070780 Бюллетень Йо 25

Дата опубликования описания 070780 (53) УДК 577 15 07 (088.8) Н.A. Острикова, С.A. Коновалов, М.С. Ваганова и Й.М. Малиновская (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (71) Заявитель (54) ШТАММ ПЛЕСНЕВОГО ГРИВА Тг сЬодегща ч1г де 44

ПРОДУЦЕНТ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и касается нового штамма, продуцента внеклеточных целлюлаз, которые используются при силосовании грубых кормов, в производстве спирта, а также для получения сахаристых растворов из отходов пищевой и деревообрабатывающей промышленности.

Известны различные штаммы плесневых грибов, в том числе вида

Trichoderma viride, ферменты которых применяются для гидролиза целлюлоэосодержащих растительных субстра- 15 тов (1) .

Недостатком известных продуцентов целлюлаэ является низкая активность Cl-фермента.

Наиболее близким по технической 20 сущности к предлагаемому является штамм Trichoderma viride Всесоюэ1 ного научно-исследовательского ин ститута генетики и селекцйи промышленных микроорганизмов. этот штамм 25 характеризуется следуктдими призна ками. При посеве уколом на агаризованную среду Роулен-Тома с добавлением кукурузного экстракта на

7 сут роста образуется колония 30

2 штамма, которая занимает всю поверхность чашки. Воздушный мицелий белый, порошковидный, периферия колонии не опУщена. Конидии в видЕ темно-зеленых подушечек густо собраны в центр колонии. Среда не окрашена.

Культура способна утилизировать глюкозу, глицерин, крахмал, целлюлозу. Молоко коагулируют с последующей пептониэацией,конечная величина рН 7,8. Желатину разжижает медленно.

Оптимальная температура роста штамма на агаризованной и жидкой питательных средах 28-30 C.

Дыхание аэробное.

Продуцируют целлюлолитические ферменты. Активность С -фермента—

5, 5 ед/мл (2) .

Цель изобретения — получение новогб штамма, обеспечивающего повышенную активность целлюлозы.

Штамм rpz5a Tr i choderma vi ride

44 получен из музейного штамма

Тгichoderma viride ВНИИГенетика (регистрационный 9 F 57) путем трех этапов селекции с применением тепловой обработки и химических мутагенов.

745933

На среде Роулен-Тома на 7 сут роста диаметр колонии 5,0-5,5 см, мицелий белый, порошковидный, конидии желтого цвета покрывают всю поверхность колонии. Среда не окрашена.

Физиолого-биохимические признаки.

Ассимилирует глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, ксилозу, манноэу, сахарозу, глицерин. Клетчатку гидролизует до глюкозы. Крахмал гидролизует. Желатину не разжижает.

Молоко не коагулирует. Использует аммонийную, нитратную и белковую формы азота.

Штамм интенсивно продуцирует целлюлазу при росте на среде со свекловичным жомом.Максимум накопле50

d0

65,ltlra Tr i choderma v i r i de 44 " йродуцент целлюлолитических ферментов культивируется в глубинных уоловиях на жидкой питательной среде .

Активность целлюлаэы С -фермента определяют с использованием в ка5 честве субстрата фильтровальной бумаги по методу Шомодьи-Нельсона. С

Активность целлюлаэы С1-фермента в культуральной жидкости состав- t0 ляет 22-25 ед/мл на 6 сут роста.

Морфологические признаки.

Мицелий септирован, конидиеносцы формируются в виде боковых ответвлений гиф на 30-32 ч роста, слабо дифференцированы, иногда разветвленные. Конидии овальные, размером

2,5-2,8 х 3,5-3,7 мк лимонно-желтого цвета.

Культуральные признаки.

На сусло-агаре на 5 сут роста при ЗСО диаметр колоний 3,5-3,8 см.

Воздушный мицелий белый, колонии концентрические, центр приподнят, в агар не врастают, кОнидии лимонно-желтого цвета, в среду выделяется 25 желтый пигмент.

На картофельно-декстрозном агаре на 5 сут диаметр колоний 3,0-3,2 см, характер роста как на среде с сусло-агаром. На среде Чапека с крах- 30 малом на 5 сут диаметр колоний 2,53,0 см, рост слабый, мицелий в виде легкого налета, конидии желтые, расположены по всей колонии, среда окрашена в желтый цвет. 35

На среде Чапека-Докса с сахаровой на 5 сут диаметр колоний 3,03,2 см. Характер роста как на среде

Чапека с крахмалом. Среда не пигментирована.

На среде Гетчинсона на 5 сут на поверхности бумаги образуется белый рыхлых мицелий, среда и полоска бумагй"окрйаейй в лимонйо- желтый-цвет.

На ломтиках картофеля хороший рост, мицелий пушистый, белый, кони- 45 дии лимонно-желтого цвета, ломтик картофеля окрашен в желтый цвет. ния целлюлаз в культуральной жидкости приходится на 144, ч роста.

При культивировании штамма Trichoderma viride. 44 в ферментере емкостью 30 л активность С1-фермента на 4 сут составляет 17-18 ед/мл, на б сут 22-25 ед/мл.

Таким образом, предлагаемый штамм позволяет повысить активность культуральной жидкости с 5,5 до 20-25 ед/мл, что обеспечивает повышенный выход препарата.

Штамм характеризуется обильным спорообразованием, что имеет большое значение для производства ввиду сокрашения количества посевного материала.

Экономический эффект составляет, 1333 руб/м культуральной жидкости.

Формула изобретения

Штамм плесневого гриба Tricho йекша 1г1бе 44 †продуцент целлюлолитических ферментов .хранится в музее культур Всесоюзного научноисследовательского института генетики промышленных микроорганизмов. Регистрационный Р ЦМПМ F-105.

Морфологические признаки.

Мицелий септирован. Конидиеносцы слабо дифференцированы, формируются к 30-32 ч роста в виде боковых ответвлений гиф, иногда разветвленные.

Конидии овальные, размером 2,5.2,8х3,5-3,7 мк, содержат одно ядро лимонно-желтого цвета.

Культуральные признаки.

На сусло-агаре на 5,сут роста при 30 диаметр колоний 3,5-3,8 см.

Воздушный мицелий белый, колонии концентрические, в агар не врастают, центр приподнят, конидий лимонножелтого цвета, в среду выделяется желтый пигмент.

На среде Роулен-Тома c кукурузным экстрактом на 7 сут роста диаметр колоний 5,0-5,5 см, мицелий бледно-желтый, порошковидный. Конидии желтого цвета, среда не окрашена.

На картофельно-декстрозном агаре на 5 сут роста диаметр колоний

3,0-3,2 см, характер роста как на среде с сусло-агаром.

На среде Чапека с крахмалом на

5 сут роста диаметр колоний 2,53,0 см, рост слабый, мицелий в вице легкого надета, конидии желтые, среда окрашена в желтый цвет.

На среде Чапека-Докса с сахароэой на 5 сут роста диаметр колоний

3,0-3,2 см, хараКтер роста как на среде Чапека с крахмалом. Среда не пигментирована.

На среде Гетчинсона на 5 сут роста на поверхности бумаги образуется белый рыхлый мицелий, среда

745933

Сосвитель Н. Паников

Техред М. Кузьма Корректор E. Папп

Редактор С. Тараненко

Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4076/10

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,4 и полоска бумаги окрашены в лимонножелтый цвет .

На ломтиках картофеля рост хороший, мйцелий пушистый, белый, конидии лимонно-желтого цвета, ломтик картофеля окрашен в желтый цвет.

Физиолого-биохимические признаки.

Ассимилирует глюкозу, галактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, сахарозу, глицерин, лактозу °

Клетчатку гидролизуют до глюкозы, крахмал гидролиэует, желатину не разжижает, молоко не коагулирует.

Использует аммонийэую, нитратную и белковую формы азота.

Штамм интенсивно продуцирует целлюлазу при росте на среде со эвеклоЬичным жомом, Максимум накоп.ления целлюлаэ на 144 ч. Активность

С -фермента на 4 сут составляет

17-18 ед/мл, на 6. сут 22-25 ед/мл.

5 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

Р 399522, кл. С 12 Р 13/10, 1973.

2. Калунянц К.A., Ваганова М.С., Шусь Г.В., Чугунова Т.А. и Грачев Ю.П. Оптимизация состава пита" тельной среды для биосинтеза целлюлаэы грибом Trichoderma чiгi

de. — "Прикладная: биохимия и микробиология", 1976, т. XII, вып. 2, с. 269-272 (прототип).