Штамм n1-продуцент фибринолитических ферментов

Штамм n1-продуцент фибринолитических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

" 7ентна-т .

АНИе

Союз Советскнк

Социалистическнк

Реслублнк «745943 (61) Дополнительное к авт. свид-ву

\ (22) Заявлено 280678 (21) 2638407/28-13 (g1) (л.2 с присоединением заявки ¹

С 12 К 1/02

С 12 0 13/10

Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий

Опубликовано 07.0780. Бюллетень ¹ 25

Дата опубликования описания 070780 (23) Приоритет (53) УДК 577.15 (088.8) Г.В. Андреенко, P.A. Максимова Т.Н. Серебрякова, A.Á. Силаев, Т.С. Шаркова, O.Ê. Гаврилов, Н.С. Мурашова и Т.В. Тейлякова (72) Авторы изобретения

Московский ордена Ленина и ордена Трудового: Красного

Знамени государственный уйиверсйтет им. М.В. Ломоносова

1 (71) Заявитель (54). ШТАММ Arthrobotrys Longa Mecht Мт

ПРОДУЦЕНТ ФИВРИНОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству ферментных препаратов, может быть применено в медицинской промышленности и представляет собой новый штамм-продуцент протеолитических ферментов.

Известны различные виды микроорганизмов, способные продуцировать протеолитические ферменты с фибринолитическими свойствами.

Все фибринолитические ферменты грибного происхождения обладают прямым фибринолитическим и тромболитическим действием. Только фйбриноли- 15 тические ферМенты иэ Trichothecium

roseum LK помимо прямого действия обладают способностью активировать плазминоген, что ставит их в ряд перспективных для клиники препаратов .

Наиболее близким по технической сущности к предложенному является штамм плесневого сапрофитного грифа TrГchothecium roseum LK — проду-2 цйрующий комплекс фибринолитических ферментов -трихолизин (1).

Недостаток штамма состоит в том, что он обладает недостаточно высокой фибринолитической активностью -30 2

0,5 г сйрца. с лйтра культуральной жидкости и невысокой активаторной активности. Кроме того, штамм необходимо культивировать на средах, содержащих пищевые продукты (пищевой сахар).

Цель изобретения — получение штамма более активного продуцента фибринолитйческих ферментов (0,75 г сырца с литра культуральной жидкости) с активаторными свойствами из непато генных сапрофитных грибов Arthrobotrys Longa Hecht М!.

Указанная цель достигается культивированием Arthrobotrys Longa

Mecht Nl на простой питательной среце, имеющей следующий состав, г/л:

NaH PO4 2-3, КНОз 0,4-0,8, МЙ4СЕ О, 10,3; СаСО> 0,1-0,3; MgCP< 0,1-0,3; молочная кислота 0,4-0,8; глицерин

5-15; вода водопроводная.

Полученный штамм Arthrobotrys

Longa Mecht йl является плесневым грибом и относится к классу Fungi

Imperfecti, род Arthrobotrys, выде,лен авторами из почвы Новосибирской области,.депонирован в коллекции лаборатории антибиотиков биологи- ческого факультета MIV под 9 1, характеризуется следующими свойствами, 745943

Синтетическая

240-200

Trichothecium

ГОSeUITI

Того же сЮстава + сахар пищевой

360-200

120-80

Морфологические признаки. При росте на агаризиронанной среде Чапека, включающей, г/л: йаМОб 3,0, КН РО4 1; КСГ 0,5; HgSO4 0,5 „ сахарозу 25; агар-агар 20; воду водо проводную, принятой для культйвирования плесненых грйбов в целях описания морфологических свойств и установлений систематического положения, н те ение 14 дней при 24 С образует широкорастущую беЛую пушистую колонию, с возрастом розовеющую.

На коНИдиеносцах, трудно отличимых от вегетативных гиф, формируются макроконидии грушевидной формы "

20-40 (т двуклеточные, с перегородкой ниже середины. Конидии прик""«Ге тлейы тонкими ножками к головке" ,конидиеносца.

На пептонно-кукурузной среде, включающей, г/л: пептон 5,0," глюкозу 10, NaCC Ь,О, К СОз 0,5; кукурузный экстракт 5,0; агар-агар-20,0, водопроводную воду, образует широко-, растущую колонию, натообразную,слегка" розовеющую; макроконидии груше- вйдной формы, типичные для вида.

На сусло-агаре (5 БЯГ, агар-агар20,0 r) развивает широкорастущие пушистые белые колонии с розоватым

"" оттенком воздушного мицелия. В центре вырЬсты- столоны, представлен-,. ные слабо ветвящимся, плотным мицелием кремонатого цвета. Обратная

"" сторона"колонии морщинистая, с радиальными- складками, коричневатая.

Культуральные признаки. При росте в погруженной культуре В колбах на качалке, имеющей 240 об/мин, при 25-26 С в течение 144-168 ч на жидком сусле (4 БЛГ) тт синтетической среде, включаюдей, г/л:

МаН РО 2-3; HNO> 0,4-0,8; NHg CE

0,1-0,3; СаСОЗ 0,1-0,3; Hg Cf > 0,10,3; молочную кислоту 0,4-0,8; глицерин 5-15, литр водопроводной воды, наблюдается образование мелкодисперсной густой массы, макроконидии образуются черезвычайно редко.

"" Мйцелий распадается на отдельные

"участки, наблюдаетай интенсйнное образование микроконидий, одноклеточАГЙПГОЬОtГУЬ

Longe Necht Ni 420-400 ных, величиной в 3-5(II. Микроконидии образуются непосредственно на гифах вегетативного мицелия. Культуральная жидкость имеет вид разведенного молока, плохо фильтруется, пигментов во

5 внешнюю среду не выделяется.

Образонание фибринолитических ферментов. Предлагаемый шламм образует фибринолитические ферменты в погруженной культуре в колбах на качалке, имеющей 240 об/мин, при-25-26 С в течение 144-168 ч роста. Биосинтез осуществляют в дна этапа: ныращивайие посевного мицелия и собственно биосинтез.

Описание культивирования. Споры с сусло-агара- глубинное культивирование на среде, включающей, г/л: (NH4)g SO4 0,4-0,8; К НРО4 0,8-l,2;

КСВ 0,25-0,75; NoO@ 0,25-0,7; сахар пищевой 20-40, молочную кислоту

20 1-2; кукурузный экстракт 5-15, в качалочных колбах объемом 750 мл с 200 мл питательной среды, в течение 36-48 ч при 24-26 С повторный пересев на синтетическую среду д (состав указан ньпае), условия культивирования 144 -168 ч..

Фнбринолитическую активность определяют по методу Андреенко на фибри- . новых пластинах. Активацию плазминогена определяют по методу Андреенко по разности зоны лиэиса на непро гретых и прогретых фибриноных пластинах.

На 144-168 ч роста гриба н культуральной жидкости устанавливается фибринолитическая активность на уровне 300-400 мм, актинаторная активность 200-250 мм .

Культуральную жидкость отделяют центрифугиронанием при 800040 20000 об/мин в теченйе 5 мин при

4 С. Фибринолитические ферменты осаждают охлажденным до -20 С ацетоном из расчета 2 объема ацетона на

1 объем культурального фильтрата. Сравнительные данные фибринолитической активности ферментов, выделяемых в среды предлагаемым и известными видами грибов, представпены в таблице.

745943

Формула изобретения

Составитель И. Привалова

Редактор И. Нестерова Техред Н. Бабурка Корректор E. Папп

Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 40,76/10

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Шт амм А r t h r о Ь î t r y s L î n g à M е с h t

Nl — продуцент фибринолитических ферментов, Морфологические признаки. Колонии 5 на среде Чапека имеют характерный фенотип-широкорастущие, белые, пушистие с возрастом розовеющие.

На конидиеносцах, трудно отличиьМх от вегетативного мицелия, формиру ются двуклеточные грушевидные конидии, На сусло-агаре морфология колонии та же, обратная сторона колонии складчатая, коричневатая.

Культурально-физиологические призМаки. На синтетической среде в

15 погруженной культуре рост в виде густой мелкодисперсной массы, макроко; индии практически не образуются.

На мицелий, распадающемся на отдель20 ные участки, наблюдается интенсивное образование одноклеточных иикроконидий, имеющих величину 3-5 и.

Фибринолитические ферменты образуют в глубинных условиях при росте на синтетической среде в колбах на качалке, имеющей 240 об/мин при

25"26 С в течение 144-168 ч в количестве 0,75 г сырца с одного литра культуральной жидкости,йлаэминогена.

Штамм обладает специфической способностью к активации плазминогена.

Фибринолитическая активность на 144-168 ч роста гриба в культуральной жидкости составляет 300400 мм, а активаторная активность—

200-250 мм .

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

Р 469348, кл, С 07 G 7/02, 1973.