Штамм 574-продуцент бактериоцина а 574

Штамм 574-продуцент бактериоцина а 574

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(! !, 747887

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) 3ополнительиое к авт. свил-ву (22) Заявлено 09;02.78 (21) 2594015/28-13 (5! }M. Кл.

С 12 0 9/20 с присоединением заявки №

Гооударстввииый комитет (23) Припри гет

Опубликовано 15.07 80. Бюллетень ¹ 26 по делам изобретеиий и открытий (53) УДК

576.852.1.779. .931 (088.8) . Дата опубликования описания 17.07.80 (72) Автор изобретения

В. А. Филиппов

Полтавский медицинский стоматологический институт (7I) Заявитель (54) 1ТАММ LACTOBACi93S ACiDOPH AJS 574-ПРОПУЦЕНТ

БАКТЕРИОЦИНА А 574

Изобретение относится к микробиологии и касается полученйя штамма Lactobacil lys

Acidophilus 574-продуцента бактериоцина A

574. Предлагаемый штамм новый, в патентной и научно-технической литературе не описан.

111тамм выделен из слюны человека и хранится в коллекции микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков под номером 1583. . Целью изобретения является получение штам 10 ма 1. acidophilus 574, продуцируюшего бактериоцин. Бактериоцин А 574 ингибирует рост

acldophi 1. helveticus u l . fermenti, подавляет рост L. jugurti и 1. buchneri.

М о р ф о л о г о-к у л ь т у р а л ь н ы е п р и з н а15 к н. Полиморфные палочки размером 2-4 х 0„5 —.

0,6 мкм, располагающиеся поодиночке или попарно-последовательно. Спор и капсул не образует, неподвижен, грамм-положительный.

Ацетатный агар. Колонии круглые, сероватые, с шероховатой поверхностью и неровными краями, диаметром до 2 мм. 4!

Среда МК,— 1. Через 24 ч равномерное по-! мутнение и небольшой осадок.

Среда МРС вЂ” 2. Не растет при 15 Г и 50 С.

Среда МСР— 2 с 0,4% типоля. Рост отсутствует.

Ф и з и о л î r и ч е с к н е с в о и с т в а. ч акультативный анаэроб, максимум роста при 32 — 37 C.

Молоко створаживаст íà 3-и сутки, предельное кислотообразованне 2,3%.

Желатину не разжижает. Нитраты не восстанавливает. Каталазу не образует. Грела Гибсона и Абд-эль-Малека. Глюкозу фермептирует без образования газа.

Целлюбиозу, галактозу, мальтоэу, сахарозу, мвннозу, маннит, лактозу и салицин ферментирует.

А н т а г. о н и с т и ч е с к и е с в о и с т в а. Подавляет рост.1. acidophilus, L. helveticus, L. fermen-

6,1. juguiti и L. buchneri.

Не интибирует рост L. salivarius, 1, casei, 1. plantarum, 1. brevis. L. cellobiosus, L.viridescens, 1. delbmecku, 1. leichmanii, 1, lactis.

Бактериоцин А 574 получают следуюшим образом.

Пример 1. Суточную культуру 1. acidophilus 574 засевают уколом на чашку с 1,5Яной araposoA средой МРГ-1 и вырашивают

3 74788

3 сут. при 37 С в вакуумзксикаторах, в атмос фере углекислого газа.

Выращенную макроколонию стерилизуют парами хлороформа, после чего поверхность среды заливают слоем 4 мл 0,8%-ной агаровой среды МРС вЂ” I, расплавленной и охлажденной о до 46 С, смешанной с 0,5 мл четырех часовой индикаторной культуры 1.. jugurti NCJB 2889.

После застывания среды посевы вырьшивают о при 37 С в течение 2 сут. Вокруг макро. колонии 1, acidophilus 574 наблюцается прозрач10 ная, с нечетким краем, диаметром 33 мм зона подавления роста .индикаторного штамма L. ju ,gurti NCJB 2889..

Пример 2. Получение бактериоцина на жидкой среде МРС вЂ” 1; Культуру 1.acidophilus

574 засевают на жидкую среду MPC — 1 и выра. щивают при 32 С в течение 4 сут. Лля стерилизации к культуре добавляют 10% хлороформа, перемешивают н вьгдерживают лри 37 С втечение 30 мин, после чего жидкость отделяют

1 20 от хлороформа и центриф тируют. Из надосадопгой жидкости готовят двухкратные серийные разведения, по одной петле каждого разведения наносят на поверхность чашки с 1,5%-ной агаровой средой MPC — 1, засежшой

25 четырехчасовой i индикаторной культурой

1. Jugurti ИСАВ 2889. После выращивания о при 37 С в течение 2 суток производят учет.

Титром бактериоцйна считают его макси30 мальное разведение, подавляющее рост индикаторного штамма. Титр бактериоцина A 574 на жидкой среде MPC — 1 1:128.

Бактерноцин А574. не инактивируется трипсином, химотрипсином, иепсином, папаином, ДНК-азой, РНК вЂ” азой, лизоцимом. При 60 С инактивируется в течение 30 мш, не реплици„ руется при пассажах па индикаторном штамме 1 . jugurtl NCJB 2889 и ХоРошо диффУндиРУет в агар. Не диффундирует через целлофан.

По чувствительности к бактериоцину А 574

40 культуры L. helveticus, 1 fermenti, L. jurgurti и 1.. buchneri, обладающие одинаковыми биохимическими и физиологическими свойствами, дифференцирунпся на 2 бактериоцинотипа:

45 чувствительный к бактериоцину А 574 и устойчивый к бактериоцину А 574. При бактериоцинотипироваиии 304 лактобацилл разных видов получены следующие данные: иэ 187 культур L. acidophilus б культур относились к первому бактериоцинотипу и 181 — ко вто50 рому. Из 4 культур 1. helveticus 3 принадлежали к первому и одна — ко второму бактериоцинотипу.

Из 84 культур 1. fermenti 6 относились к первому и 78 — ко второму бактериоцино55 типу, Иэ 16 культур 1. jugurti 5 относились к первому и 11 — ко второму бакриоцинотипу.

7 4

С помощью бактериоцина А 574 удается проводить не только внутривидовую дифференциацию описанных выше видов лактобацилл, но и подразделять на бактериоцинотипы культуры биохимических и физиологических вариантов некоторых видов: .так из 147 культур

L. acidophilus,, не ферментировавших маннит и не образующих зерен волютина, 1 культура принадлежала к первому и 146 ко второму бактериоцинотипу; из 15 культур 1.acidophi—

lus, не ферментировавших маннит и образующих зерна волютина, 5 культур относились к первому бактериоцинотипу и !Π— ко второму; из 48 культур 1. fermenti, не ферментирующих маннит и не образующих зерна волютина, 5 культур относилось к первому и 43 — ко второму бактериоцинотицу; из

16 культур 1. fermenti, расщепляющих маннит и не образуюшнх зерна волютина, 1 культура относилась к первому и 15 — ко второму бактериоцинотипу; из 7 культур 1.buc—

hneri, He растущих прн 0,4% тидоля,, ферментирующих маннит и не образующих зерна волютина, .2 культуры принадлежали к первому и 5 — ко второму бактериоцинотипу.

При способности продуцировать бактерноцин А 574 культуры лактобацилл указанных выше видов подразделяются на 2 бактериоциногенотипа: продушсруюший бактериоцин .

А 574 и не продуцйруюший бактериоцин

А 574.

Бактериоцин А 574, продуцируемый цггаммом 1. acidophilus 574, может быть использован для бактериоцинотипирования и бактериоциногенотипирования 1. acidophilus, 1.Ье1vetlcus, 1. fermenti, 1. jugurti, 1. buchneri, е а также в исследованиях по генетике и физиологии .лактобацилл.

Формула изобретения

Штамм Lactobacil lus acidophilus 574-продуцент бактериоцина А 574. Хранится в коллекции микрооргашзмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков под йомером 1583.

Мор фол ого культуральпые призн а к и. Полиморфные палочки римером 2 — 4 х х 0,5-0,6 мкм, располагающиеся поодиночке или попарно-последовательно, Спор и капсул не образует, неподвижен, грамм-положительный.

Ацетатный агар. Колонии круглые, сероватые, с шероховатой поверхностью. и неровцыми краями, диаметром до 2 мм.

Среда МРС вЂ” 1. Через 24 ч равномерное помутнение и небольшой осадок.

747887

Составитель Е; Лубовннкая.

Техред М.Петко КоРРектоР И. МУска

Редактор Н. Потапова

Тираж 522 Подписное

UHHHiIH Государственного комитета С1"„СР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская иаб., д. 4/5

Заказ 4181/16

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Среда МРС вЂ” 2. Не растет при 15 С и 50 С. реда MPC 2 с 04% THI1ong Рост отсут. ствует, Ф и з и о л о г и ч е с к и е с в о и с т в а. Факультативный аиазроб, максимум роста при 32 — 37 С.

Молоко створаживает на 3-и сутки, предельное кислотообразование 2,3%.

Желатину не разжижает. Нитраты не восстанавливает. Каталазу не образует. Глюкозу ферментирует без образования газа. б

Иеллобиозу, галактоэу, мальтозу, сцц1розу, маннозу, маннит, лактозу и салицин фермеитирует.

А н т а r о и и с т и ч е с к и е с в о и с т в аЛодавляет рост L,ecidophHuiЛ..Ье1юет1аи, L fermenti, 1- jugurti u L. buchnerl..

Не ингибнрует рост L. selivarlua, L. eeeel, L. planterum, L. brevb, L. се11оЬ1оаа, L vi16 гЫеасем, L. delhmeckii, L. leichmenii, L.lectls.