Способ определения адсорбционной активности геля гидроокиси алюминия для биопрепаратов

Способ определения адсорбционной активности геля гидроокиси алюминия для биопрепаратов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(„, 747890

Союз Советсник

Социалистическик

Республик

ОПИСЛНИИ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I) Дополнительное k ilRT. сии.т-ву (22) Заяилено 18.01.79 {21) 27299IOII30-15 (5! )М. Кл.

С 12 К 5/00 с приспелинением заявки .%

Государственный комитет (2,"1 ) П риори тет ло делам изобретений и открытий

Опубликовано 5.07.80. Бюллетень ¹ -6

Дата опубликования описания 17.07.80 (53) УДК.

541.1 83:54-36

{088.8) H. И. Передереев, И. А. Хорьков, Н. П. Иванов, И. Ф. Задорожный, А. И. Албулов, Т. П. Климова, О. С. Гиллер, В. Б. Тен и М. С. Асылбеков (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности и Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (71) Заявители (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДСОРБПИОНИОЙ АКТИВНОСТИ ГЕЛЯ

ГИДРООКИСИ АЛ1ОМИНИЯ ДЛЯ БИОПРЕПАРАТОВ

Изоб ретение относится к производству сорбированных и депонированных ветеринарных биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики инфекционных заболеваний и, в частности, к контролю физикохимических и биологических свойств алюмогидрогеля по его адсорбционной активности, Известен способ определения адсорбционной активности геля гидроокиси алюминия по интенсивности сорбции казеина t1). l0

Однако известный способ обладает следующими недостатками . а) в качестве сорбента

- используется нестандартный и нетипичный белок казеина, механизм сорбции которого даже приближенно не может отражать таковой

15 для вирусов, бактерий, надмолекулярных и макромолекулярных структур микроорганизмов. для чего гель, в сущности, и готовится:

6) рекомендуемые способы приготовления раствора казеина. и сорбции его гелем, а также титрацни оставшегося несорбированным белка, допускают большую погрешность в определении процента сорбцни, значительно отклоняющего от средних величин.

Целью изобретения является повышение точности способа. Для достижения поставленной цели в качестве тест-антигена используют макромолекулярный очищенный антиген из бруцелл с титром 1:800 †:1600 в РСК, при этом после сорбции тест-антигена гелем отделяют супернатант от геля, а интенсивность сорбции устанавливается по количеству иесорбированного тест-антигена в супернаганте в РДСК с положительной бруцеллезной сывороткой или очищенными специфическими иммуногло булинами из нее..

Кроме того, для достижения цели, для определения адсорбционной активности используют исходные разведения геля в концентрации 1,8 — 2,2%, а аорбцию тест-антигена производят в течение 30 — 35. мнн при перемешнванни.

Кроме того, для достижения цели, для проведения РДСК используют супернатант несорбированного тест-антигена в диапазоне разведений 1:50 — 1:800.

П р и и е р 1. Для определения адсорбционной активности геля отбирают образцы сразу

10- О промышленных серий препарата. Алюмогель с солержанием Al(OH) q около 6Я доводя фосфатным буфером рН 7,4 — 7,6 до содержания А!(ОН) q около 2 /o и готовят рабочее разведение геля. Лля этого берут 90 мл геля, добавляют к нему 8,5 мл фосфатного буфера рН 7,4-7,6 и. 1,5 мл глиноколевого буфера рН 9,5 — 10,0. Перемешивают, автоклавируют в стеклянных флаконах 40 мин при температуре 110 С. Такое рабочее разведение геля является. компонентом К 1. Компонентом Р 2 является очищенный макромолекулярный ультр звуковой антиген из бруцелл, приготовленный по разработанному нами методу, с титром в

РЛГК 1:800, компонент К 3 — положительная бруцеллеэная сыворотка с титром в РЛСК 1:10

l:-0 или специфические очищенные и лиофилиэированные иммуноглобулины и полученные но разработанному нами методу.

Ллэя определения адсорбцнонной активности испытуемых серий гейл берут компонент И 2

" и количествах 6, 24, 20, 20, 20, 20 мл и 6 мл компонента, разбавленного в два раза физ?эаствором поваренной соли, и вносят во флаконы емкостью 100 мл, соответствеРпто пронумеровав их с 1 по 7 номеп. Затем. вносят.компоненту ? в первый флакон 30 мл, во флакон

??о 2 — 30 мл, Р 3 — 16 6 мл, N 4 — 10 мл, Р 5 — 6 мл, М б — 1,2 мл и Р 7 — 30 мл и встряхивают 30 мин, при комнатной температуре на шуттель-аппарате., Таким образом, сорбция антигена происходит при содержании Al(OH), ?5, 10, 8, б, 4., 1 и, условно, 30 мг/мл суспензии.

После окончания сорбции содержимое флаконов сливают в центрнфужные пробирки и центрифугируют.10 мин при 2000 об/мин. Недостаточную жидкость сливают во флаконы з она должна быть прозрачной и титруют в ней содержание оставшегося несорбированными анти гена, в разделениях 1:1 ОΠ— 1:1800, с положи-. тельными бруцеллезными сыворотками или специфическими нммуйоглобулинами в РЛСК.

Иэ опытных данных видно, что серия геля

8.0l, приготовленная по способу ВПИиТИБП полностью сорбирует антиген при содержании

AI (OH) q 15 мг/мл суспензии.

Реэулътаты исследований при определении здсорбционной активности геля по предлагаемому методу выражают в мг на 1 мл суспепзии, в которой происходит сорбирование антигена.

В тех случаях, когда содержание Al(0H) в суспенэии недостаточно и какие-то серии геля при титрации антигена в суперпотенте не сорбировали его полностью в количестве

15 мг/мл, но сорбировали при 30 мг/мл, тогда производят дополнительное приготовление адсорбционной системы гель 1 антигеи, с содер747890

4 жанием AI(OH) !7, 20, 23, 26 мг/мл и пот вторяют опыт по дотитровке адсорбиионной активности указанных серий.

Пример 2. Лля определения адсорбционной активности геля отбирают образцы сразу 10 — 20 промышленных серий препарата.

Алюмогель с содержанием Al(ОН)э около .

6 /p доводят фосфатным буфером рН 7,4 — 7,6 до содержания AI(OH) 1,8 — 2,2% и готовят

?о рабочее разведение геля. Лля:этого берут

90 мл геля, добавляют к нему 8,5 мл фосфатного буфера рН 7,4 — 7,6 и 1,5 мл гликолевого буфера рН 9,5 —.10,0 перемешивают, автоклавируют в стеклянных флаконах 40 — 42 мин при

108-!!О С.

Такое рабочее разведение геля является компонентом И" 1.

Компонентом И = является очишейный макромолекулярный ультразвуковой аитиген, из бруцелл, приготовленный по разработанному нами методу, с титром в РЛСК 1:800 — 1:1600 компонент М 3 — положительная бруцеллезная сыворотка с титром в РЛСК вЂ”. 1;10 — 1:20 или специфические очищенные и лиофилизированные

25 - иммуноглобулины, полученные по разработанному нами методу. м

Лля определения адсорбционной активйости испытуемых серий геля берут компонент Р 2 в количествах 6, 24, 20, 20, 20 20 мл.и зо б мл компонента, разбавленного в два раза физраствором поваренной соли, и,вносят во флаконы объемом 100,мл, соответственно пронумеровав их с 1 пп 7 номер. Затем вносят компоненту М 1 в первый флакон

q5 30 мл, во флакон Р 2 — 30 мл, N4 3

16,5 мл, К" 4 - 1О мл,.?! 5 — 6 мл Р 6

1,2 мл и Р 7 .— 30 мл и встряхивают 30—

35 мин при комнатной температуре на шуттель аппарате.

° 40 Таким образом, сорбция. антигена происходит при содержании,А!(ОН), 15, fO, 8, 6, 4, и, условно, 30 мг/мл суспензии. После.. окончания сорбции содержимое флаконов сливают в центрифужные пробирки и центрифу. гируют 10-12 мин при 2 — 3 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость сливают sg флаконы, она должна быть прозрачной, и титруют в неи содержание оставшегося несорбированным антигена, в разведениях 1:50-1:80 с положительнь(ми бруцеллезными сыворотками ипи специ-. фическими иммуноглобулинамн PIlCK ("Бруцеллез сельскохозяйственных животных") .

Из данных, представленных в таблице, видно) что серия ге 801, приготов по способу ВНИиТИБП полностью сорбирует аитиген при содержании Al(OH), !5 мт/мл суспенэии в разведении 1;200, а 1:100. Записываем адсорбционную активность серии 15 мг/мл

1;100 два креста.

7478

Составитель В. Романова

Техред M. Петко Корректор Г. Рсшетиии.

Редактор Л, Новожилов

Тираж 522 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открьпий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5.

Заказ 4181/16

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Полученные результаты комиссионной про.верки свидетельствуют о больших преимушествах разработанного способа в сравнении с прототипом. Этот способ позволит разработать оптимальные требования к гелям, приготовленным по различным методам, конкретно для каждого, отдельно взятого, бактерийного или вирусного биопрепарата, с учетом адьювантной активности геля, как неспецифического стимулятора иммуногенеза и антителогенеза в случае приготовления вакцин или при разработке оптимальных схем гипериммунизацин.

Он даст возможность объективно оценить адсорбционную мошносп препарата на гомо- 1ч логичном биомакромолекулярном материале, каковым является сорбат, приготовленный из бруцелл па разраоотанному нами способу.

Формула изобретения

I. Способ определения адеорбционной активности геля гидроокиси алюминия для биопрепаратов путем установления интенсивности сорбции тест-антигена, о т л и ч а ю ш и и с я

90 6 тем, что, с целью повьппения точности способа, в качестве тест-антигена используют макромолекулярный очишенный антиген иэ бруцелл с титром 1:800 — !:1600 в РСК, при этом после сорбции тест-антигена гелем отделяют супернатант геля, а интенсивность сорбции устанавливается по количеству несорбированного тест-антигена в супернатанте в РЛСК с положительной бруцеллезной сывороткой или очищенными специфическими иммуноглобулинами из нее.

2, Способ по и. 1, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что для определения адсорбционной активности используют исходные разведения геля

l в концентрации 1,8 — 2,2%, а сорбцию тест-антигена производят в течение 30 — 35 мин при перемешивании.

3. Способ по и. I и 2 о т л и ч а ю ш и йс я тем, что для проведения РДСК используют супернатант несорбированног о тест-антигена в диапазоне разведений 1:50 — 1..800, Источники информации, принятые.во внимание при экспертизе

1. Физико-химические методы контроля ингредиентов, питательных сред и биопрепаратов" ВГНКИ, М., 1970, с. 10 — 15.