Способ определения адсорбционной активности геля гидроокиси алюминия для биопрепаратов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(„, 747890

Союз Советсник

Социалистическик

Республик

ОПИСЛНИИ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I) Дополнительное k ilRT. сии.т-ву (22) Заяилено 18.01.79 {21) 27299IOII30-15 (5! )М. Кл.

С 12 К 5/00 с приспелинением заявки .%

Государственный комитет (2,"1 ) П риори тет ло делам изобретений и открытий

Опубликовано 5.07.80. Бюллетень ¹ -6

Дата опубликования описания 17.07.80 (53) УДК.

541.1 83:54-36

{088.8) H. И. Передереев, И. А. Хорьков, Н. П. Иванов, И. Ф. Задорожный, А. И. Албулов, Т. П. Климова, О. С. Гиллер, В. Б. Тен и М. С. Асылбеков (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности и Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (71) Заявители (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДСОРБПИОНИОЙ АКТИВНОСТИ ГЕЛЯ

ГИДРООКИСИ АЛ1ОМИНИЯ ДЛЯ БИОПРЕПАРАТОВ

Изоб ретение относится к производству сорбированных и депонированных ветеринарных биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики инфекционных заболеваний и, в частности, к контролю физикохимических и биологических свойств алюмогидрогеля по его адсорбционной активности, Известен способ определения адсорбционной активности геля гидроокиси алюминия по интенсивности сорбции казеина t1). l0

Однако известный способ обладает следующими недостатками . а) в качестве сорбента

- используется нестандартный и нетипичный белок казеина, механизм сорбции которого даже приближенно не может отражать таковой

15 для вирусов, бактерий, надмолекулярных и макромолекулярных структур микроорганизмов. для чего гель, в сущности, и готовится:

6) рекомендуемые способы приготовления раствора казеина. и сорбции его гелем, а также титрацни оставшегося несорбированным белка, допускают большую погрешность в определении процента сорбцни, значительно отклоняющего от средних величин.

Целью изобретения является повышение точности способа. Для достижения поставленной цели в качестве тест-антигена используют макромолекулярный очищенный антиген из бруцелл с титром 1:800 †:1600 в РСК, при этом после сорбции тест-антигена гелем отделяют супернатант от геля, а интенсивность сорбции устанавливается по количеству иесорбированного тест-антигена в супернаганте в РДСК с положительной бруцеллезной сывороткой или очищенными специфическими иммуногло булинами из нее..

Кроме того, для достижения цели, для определения адсорбционной активности используют исходные разведения геля в концентрации 1,8 — 2,2%, а аорбцию тест-антигена производят в течение 30 — 35. мнн при перемешнванни.

Кроме того, для достижения цели, для проведения РДСК используют супернатант несорбированного тест-антигена в диапазоне разведений 1:50 — 1:800.

П р и и е р 1. Для определения адсорбционной активности геля отбирают образцы сразу

10- О промышленных серий препарата. Алюмогель с солержанием Al(OH) q около 6Я доводя фосфатным буфером рН 7,4 — 7,6 до содержания А!(ОН) q около 2 /o и готовят рабочее разведение геля. Лля этого берут 90 мл геля, добавляют к нему 8,5 мл фосфатного буфера рН 7,4-7,6 и. 1,5 мл глиноколевого буфера рН 9,5 — 10,0. Перемешивают, автоклавируют в стеклянных флаконах 40 мин при температуре 110 С. Такое рабочее разведение геля является. компонентом К 1. Компонентом Р 2 является очищенный макромолекулярный ультр звуковой антиген из бруцелл, приготовленный по разработанному нами методу, с титром в

РЛГК 1:800, компонент К 3 — положительная бруцеллеэная сыворотка с титром в РЛСК 1:10

l:-0 или специфические очищенные и лиофилиэированные иммуноглобулины и полученные но разработанному нами методу.

Ллэя определения адсорбцнонной активности испытуемых серий гейл берут компонент И 2

" и количествах 6, 24, 20, 20, 20, 20 мл и 6 мл компонента, разбавленного в два раза физ?эаствором поваренной соли, и вносят во флаконы емкостью 100 мл, соответствеРпто пронумеровав их с 1 по 7 номеп. Затем. вносят.компоненту ? в первый флакон 30 мл, во флакон

??о 2 — 30 мл, Р 3 — 16 6 мл, N 4 — 10 мл, Р 5 — 6 мл, М б — 1,2 мл и Р 7 — 30 мл и встряхивают 30 мин, при комнатной температуре на шуттель-аппарате., Таким образом, сорбция антигена происходит при содержании Al(OH), ?5, 10, 8, б, 4., 1 и, условно, 30 мг/мл суспензии.

После окончания сорбции содержимое флаконов сливают в центрнфужные пробирки и центрифугируют.10 мин при 2000 об/мин. Недостаточную жидкость сливают во флаконы з она должна быть прозрачной и титруют в ней содержание оставшегося несорбированными анти гена, в разделениях 1:1 ОΠ— 1:1800, с положи-. тельными бруцеллезными сыворотками или специфическими нммуйоглобулинами в РЛСК.

Иэ опытных данных видно, что серия геля

8.0l, приготовленная по способу ВПИиТИБП полностью сорбирует антиген при содержании

AI (OH) q 15 мг/мл суспензии.

Реэулътаты исследований при определении здсорбционной активности геля по предлагаемому методу выражают в мг на 1 мл суспепзии, в которой происходит сорбирование антигена.

В тех случаях, когда содержание Al(0H) в суспенэии недостаточно и какие-то серии геля при титрации антигена в суперпотенте не сорбировали его полностью в количестве

15 мг/мл, но сорбировали при 30 мг/мл, тогда производят дополнительное приготовление адсорбционной системы гель 1 антигеи, с содер747890

4 жанием AI(OH) !7, 20, 23, 26 мг/мл и пот вторяют опыт по дотитровке адсорбиионной активности указанных серий.

Пример 2. Лля определения адсорбционной активности геля отбирают образцы сразу 10 — 20 промышленных серий препарата.

Алюмогель с содержанием Al(ОН)э около .

6 /p доводят фосфатным буфером рН 7,4 — 7,6 до содержания AI(OH) 1,8 — 2,2% и готовят

?о рабочее разведение геля. Лля:этого берут

90 мл геля, добавляют к нему 8,5 мл фосфатного буфера рН 7,4 — 7,6 и 1,5 мл гликолевого буфера рН 9,5 —.10,0 перемешивают, автоклавируют в стеклянных флаконах 40 — 42 мин при

108-!!О С.

Такое рабочее разведение геля является компонентом И" 1.

Компонентом И = является очишейный макромолекулярный ультразвуковой аитиген, из бруцелл, приготовленный по разработанному нами методу, с титром в РЛСК 1:800 — 1:1600 компонент М 3 — положительная бруцеллезная сыворотка с титром в РЛСК вЂ”. 1;10 — 1:20 или специфические очищенные и лиофилизированные

25 - иммуноглобулины, полученные по разработанному нами методу. м

Лля определения адсорбционной активйости испытуемых серий геля берут компонент Р 2 в количествах 6, 24, 20, 20, 20 20 мл.и зо б мл компонента, разбавленного в два раза физраствором поваренной соли, и,вносят во флаконы объемом 100,мл, соответственно пронумеровав их с 1 пп 7 номер. Затем вносят компоненту М 1 в первый флакон

q5 30 мл, во флакон Р 2 — 30 мл, N4 3

16,5 мл, К" 4 - 1О мл,.?! 5 — 6 мл Р 6

1,2 мл и Р 7 .— 30 мл и встряхивают 30—

35 мин при комнатной температуре на шуттель аппарате.

° 40 Таким образом, сорбция. антигена происходит при содержании,А!(ОН), 15, fO, 8, 6, 4, и, условно, 30 мг/мл суспензии. После.. окончания сорбции содержимое флаконов сливают в центрифужные пробирки и центрифу. гируют 10-12 мин при 2 — 3 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость сливают sg флаконы, она должна быть прозрачной, и титруют в неи содержание оставшегося несорбированным антигена, в разведениях 1:50-1:80 с положительнь(ми бруцеллезными сыворотками ипи специ-. фическими иммуноглобулинамн PIlCK ("Бруцеллез сельскохозяйственных животных") .

Из данных, представленных в таблице, видно) что серия ге 801, приготов по способу ВНИиТИБП полностью сорбирует аитиген при содержании Al(OH), !5 мт/мл суспенэии в разведении 1;200, а 1:100. Записываем адсорбционную активность серии 15 мг/мл

1;100 два креста.

7478

Составитель В. Романова

Техред M. Петко Корректор Г. Рсшетиии.

Редактор Л, Новожилов

Тираж 522 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открьпий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5.

Заказ 4181/16

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Полученные результаты комиссионной про.верки свидетельствуют о больших преимушествах разработанного способа в сравнении с прототипом. Этот способ позволит разработать оптимальные требования к гелям, приготовленным по различным методам, конкретно для каждого, отдельно взятого, бактерийного или вирусного биопрепарата, с учетом адьювантной активности геля, как неспецифического стимулятора иммуногенеза и антителогенеза в случае приготовления вакцин или при разработке оптимальных схем гипериммунизацин.

Он даст возможность объективно оценить адсорбционную мошносп препарата на гомо- 1ч логичном биомакромолекулярном материале, каковым является сорбат, приготовленный из бруцелл па разраоотанному нами способу.

Формула изобретения

I. Способ определения адеорбционной активности геля гидроокиси алюминия для биопрепаратов путем установления интенсивности сорбции тест-антигена, о т л и ч а ю ш и и с я

90 6 тем, что, с целью повьппения точности способа, в качестве тест-антигена используют макромолекулярный очишенный антиген иэ бруцелл с титром 1:800 — !:1600 в РСК, при этом после сорбции тест-антигена гелем отделяют супернатант геля, а интенсивность сорбции устанавливается по количеству несорбированного тест-антигена в супернатанте в РЛСК с положительной бруцеллезной сывороткой или очищенными специфическими иммуноглобулинами из нее.

2, Способ по и. 1, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что для определения адсорбционной активности используют исходные разведения геля

l в концентрации 1,8 — 2,2%, а сорбцию тест-антигена производят в течение 30 — 35 мин при перемешивании.

3. Способ по и. I и 2 о т л и ч а ю ш и йс я тем, что для проведения РДСК используют супернатант несорбированног о тест-антигена в диапазоне разведений 1:50 — 1..800, Источники информации, принятые.во внимание при экспертизе

1. Физико-химические методы контроля ингредиентов, питательных сред и биопрепаратов" ВГНКИ, М., 1970, с. 10 — 15.