Патент 749890

Способ получения литических ферментов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

<и749890

Союз Советских

Социалистических

Республик

Ф

«б =

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕПЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 230378 (21) 2595302/28-13 (51) М. Кл.

С 12. 0 13/10 с присоединением заявки Но (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР по дедам изобретений и открытий

Опубликовано 28.0780. Бюллетень Йо 27

Дата опубликования описания 300780

{53) УДК 577.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения

О.В. Кислухина и Б.A. Маргарян

Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (71) За явмтель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ

ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения литических ферментов из бактерий.

Известен способ получения литичес-5 ких ферментов путем глубинного культивирования бактерий рода Baci PPus на питательной среде, содержащей органический источник углерода, а также источники азота, фосфора и минеральные соли (1) .

Недостатком известного способа является невысокая литическая активность ферментов.

Келью изобретения является повыше-15 ние активности ферментов.

Это достигается тем, что культуральную жидкость за 2-б ч до окончания ферментации разбавляют в 1,5-2,5 20 раза добавлением водопроводной воды или раствора минеральных солей, входящих в состав питательной среды.

Способ осуществляют следующим образом.

Микроорганизмы из рода Ba c i P Pu s культивируют на питательной среде, содержащей органический источник углерода, а также источники азота, фосфора и минеральные соли. Суммарная 30 концентрация источников углерода и азота должна составлять не менее 2%и

В период активного синтеза литических ферментов за 2-6 ч до окончания культивирования объем культуральной жидкости увеличивают в 1,5-2,5 раза путем введения стерильных растворов минеральных солей или водопроводной воды. Оптимальный состав и количество разбавляющего раствора зависят от состава питательной среды и степени ее обеднения к моменту начала активного синтеза литических ферментов.

Солевые растворы, используемые для увеличения объема культуральной жидкости, могут содержать все компоненты минерального состава основной среды или часть их, например только соли одновалентных катионов или только соли двухвалентных катионов. Все компоненты минерального состава среды, кроме неорганического источника азота, могут быть взяты в тех же концентрациях, что в основной питательной среде, а неорганический источник азота — в концентрации в 2-3 раза более низкой, чем в основной питательной среде.

Обеднение питательной среды путем увеличения ее объема за счет компонен3 " " 749890

Формула изобретения

ЦНИИПИ Заказ 4556./19

Тираж 522 Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная,4 тоЪ, =Не" сбдержащих органических источников питания, привадит к интенсификации биосинтеза литических ферментов и значительному повышению суммарной активности синтезированных литических ферментов.

Пример 1. Контроль.

400 л питательной среды, приготовленной по известному способу, содержащей (нн4)2 HP04, KGP., Hgso<. 7н20, СаСВ, сухйе пивные дрожжи и осахаренный ячменный солод в качестве источ2 ника углерода, помещают в ферментер емкостью 1500 л, засевают водной суспензией культуры B,subti (is 797, выращенной на ломтях картофеля. Ферментацию ведут в течение 16 ч при темпе- 15 ратуре 36-38, постоянном перемешивании и аэрации 0,5 объем/об.мин. По окончании ферментации активность литических ферментов составила

12 700 ед. JIA/мл. Суммарная актив- 2О ность 50, 8 - 108ед ЛА, Опыт.

Культивирование ведут в тех же условиях, что в контроле.

Через 9 ч после засева среды в э5 ферментер добавляют стерильный раствор 0,8 кг (NH4)< НР04 и 0,24 кг КС в 400 л водопроводной воды. Ферментацию закончат через 15 ч после засева среды. Литическая активность культуральной жидкости составит

18500 ед. JIA/мл. Полученная суммар ная активность составит 148 10 ед.

JIA, что в 2,9 раза выше, чем в контроле. "

Пример 2. 12 r сухого фер.ментативного гидролизата дрожжей

БВК, 8 r лактозы, 4 r (НН4) HP04=,-0,6 г КСЮ*, О 1 r СаСР2 и 0 1 r М95С4 +

) 7Н О растворяют в 1 л водопроводной

2 воды, устанавливают рН 7,2 и разли- 40 вают среду по 100 мл в колбы емкостью 750 мл. Среду стерилиэуют 1 ч при 0,5 атм и после охлаждения засевают водной -суспенэией культуры

B.subti(ris 797, выращенной в пробир ке на скошенном сусл6-пептбнном агаре. Колбы ставят на качалку со скоростью вращения 160 об/MHH. Культивирование проводят при 38 С. о

5 контрольных колб снимают с качалки через 16 ч после засева среды.

Средняя литическая активность составила 26.700 ед. JIA/ìë.

В 5 опытных колбах через 10 ч после засева среды вносят дополнительно по 100 Мт стерильного водного раствора, содержащего в г/л: (йн4)2нРО4- 2, KCE — 0,6, СаСС2 — О, 1, Hg S04 -

7Н20 — 0,1 при рН 7,0. Ферментацию

I прекращают, как и в контрольном варианте, через 16 ч после засева среды. Литическая активность культуральной жидкости составит 25.300 еч.JIA/мл.

Суммарная активность литических ферментов в пересчете на 1 колбу составит в контроле 2,67.10 6 ед. JIA, в опытном варианте 50,6 10 ед. JIA или в 1,9, раза больше.

Пример 3. В колбы емкостью

750 мл, содержащие по 100 мл стерильной питательной среды, описанной в примере 2, вносят водную суспензию культуры Baci Plus mesentericus 66, выращенную в пробирке на Скошенном сусло-пептонном агаре. Культивирование проводят на качалке со скоростью вращения 160 об/мин при температуре 40 С.

5 контрольных колб снимают с качалки через 16 ч после засева среды.

Средняя лйтическая активность составила"3200 ед. JIA/мл.

В 5 опытных колбах через 14 ч пос ле засева среды вносят дополнительно по 150 мл стерильной водопроводной воды. Ферментацию закончат через 16 ч после засева среды. Средняя литическая активность составит 2400 ед.ЛА/мл.

Суммарйая активность литических ферментов в пересчете на 1 колбу составит в контроле 0,32 106ед. JIA, в опытном варианте 0,60 )0 ед. ЛА, или

6 в 1,87 раза больше.

Данный способ получения литических ферментов позволяет увеличить активность литических ферментов беэ дополнительйых"- затрат на органические источники углерода и без продления

"срока культивирования продуцентов.

Способ "получения литических ферментов путем глубинного культивирования бактерий рода Baciirfus на питательной среде, содержащей органический источник углерода, а также источники азота, фосфора и минеральные соли, отличающийся тем, что с целью повышения активности

I ферментов, культуральную жидкость

М за 2-6 ч до окончания ферментации разбавляют в 1,5-2,5 раза добавлением водопроводной воды или раствора мйнеральных солей, входящих в состав питательной среды.

Источники информации, принятые-"во вйймание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

9 415294, кл. С 12 D 13/10, 1972.