Способ получения щелочной протеазы

Способ получения щелочной протеазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик 749891,61) Дополнительное к авт. свид-ву — (22) Заявлено 28.08.78 (21) 2657879/28-13

l с присоединением заявки №вЂ” (5l) М. Кл.е

С 12 D 13/10

Гасударственный камнтет (23) Приоритет—

Опубликовано 23.07.80. Бюллетень №27 (53) УДК 663,15 (088.8) а ленам нзебретеннй н атнрмтнй

Дата опубликования описания 28.07.80

3. Г. Медведев, В. В. Дорохов, В. Г. Халабузарь, Э. В. Кузнецов, Л. Б. Носкова и Л. М. Вайнер (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЩЕЛОЧНОЙ ПРОТЕАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения щелочной протеазы.

Известен способ получения щелочной протеазы, предусматривающий культивирование бактерий рода Bacillus на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора, минеральные соли, а также глутаминовую кислоту и лизин в качестве стимуляторов биосинтеза щелочной протеазы с последующим выделением конечного продукта (IJ.

Недостатком известного способа является низкий выход щелочной протеазы, который составляет 1!660 ед/мл по методике

ФОЛИ.

Цель изобретения — повышение выхода фермента.

Указанная цель достигается тем, что в качестве стимулятора биосинтеза щелочной протеазы используют содержащие глутаминовую кислоту и лизин клетки продуцента, полученные после 24-48 ч культивирования, которые предварительно подвергают .тепловой обработке сначала при температуре !30

160 С в течение 30 — 60 мин, затем при

2 температуре 40 — 60 С и рН 7 — 10 в течение

3 — 6 ч в присутствии нейтральной протеазы. . Клетки продуцента после 24-48 ч культивирования содержат большое количество, а именно 20 — 60О/р от суммы всех аминокислот, глутаминовой кислоты и лизина,.чем и обусловлено стимулирующее действие гидролизата продуцента на биосинтез щелочной про теазы.. В качестве продуцентов щелочной протеазы используют бактерии из группы

Bacillus subti1is — Bacillus mesenterigus.

to . Пример. Культуральную жидкость Bacillus subtilis l2, полученную в производственном ферментере после выращивания в течение 36 — 48ч. направляют на сепарацию, где отделяют клетки продуцента. С ферментера, емкостью 6 м, после сепарации получают

4,0 мз клеток продуцента и часть культуральной жидкости.

Смесь клеток продуцента и культуральной жидкости загружают в сборник емкостью 6,3 мз, где ее обрабатывают при тем в пературе 135 С в течение 60 мин. После термообработки смесь охлаждают до температуры 50 С, доводят с помощью щелочи до рН 8.0, добавляют нейтральную протеазу из расчета О,!25 ед/л удельной активно749891

Формула изобретения

Составитель Т.Мелентьева

Редактор В. Зарванская Техред К. Шуфрнч Корректор В. Синицкая

Заказ 4428/8 Тираж 522 Подписное

ЦНИИПИ Госу ГарсЧВЖного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушскай иаб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород. тл, Проектная. 4

3 ,стй (по методу Ансона-Мирского) и при постоянном перемешивании выдерживают смесь в течение 5 ч.

Полученный гидролкзат напхав лязют в. сборник, емкостью 63 м „добавляют 19,2 кг бактериальной амилазы, перемешивают и вносят 3840 кг крахмала, 960 кг кукурузной муки, 192 кг белково-витаминного концентрата, 32 кг фосфорнокислого двузамещенного аммония и пеногаситель. После чего рН раствора доводят до 6,4, и нагревают до 75 С. Раствор стерилизуют и подают в ферментер, емкостью 63 ма.

В отдельной емкости готовят раствор технического казеина. Наливают 8 м воды, доводят рН до 10 и вносят 320 .кг техни ческого казеина. Температуру раствора поднимают до 50 С и перемешивают в течение

60 мин. Раствор стерилизуют и подают в ферментер. После стерилизации в реактор наливают 2000 л воды, промывные-воды стерилизуют и направляют в ферментер. Объем среды и ферментере 315 мз; рН среды в ферментере доводят до 6,8, производят посев и, ведут культивирование при постоянном перемешивании и аэрировании в течение 36 ч..Активность культуральной жидкости в конце ферментации 15300 ед/мл (по методу ФОЛП).

Способ получения щелочной прбтеазы с использованием в качестве стимулятора биосинтеза фермента гидролизата клеток продуцеита с высоким содержанием глутаминовой кислоты и лизина позволяет увеличить выход конечного продукта на 30о/о.

Способ получения щелочной протеазы, предусматривающий культивирование бактерий рода Bacillus на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фос-. фора, минеральные соли, а также глутами1в новую кислоту и лизин в качестве стимуляторов биосиитеза .щелочной протеазы с последующим выделением конечного продукта, отлича/ои1ийся тем, что, с целью повышения выхода фермента, в качестве стимуля4Ю .тора биосинтеза щелочной протеазы используют содержащие глутаминовую кислоту и лизин клетки продуцента, полученные после

24 — 48 ч культивирования, которые предва рительно подвергают тепловой обработке сначала при температуре 130 †1 C u te2е чение 30 — 60 мин, затем при температуре

40 — 60 С и рН 7 — 10 в течение 3 — 6 ч в присутствии нейтральной протеазы, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Емцева Т. В. Физиолого-биохимические исследования экспериментально полученно го мутанта Bacillus mesentericus и природного штамма Bacillus subfilis — продуцен. тов протеолитических ферментов. Автореф. дис. М., МГУ, 1975, с. 12. зо