Способ выделения комплекса ферментов -глюканазы и амилазы

Способ выделения комплекса ферментов -глюканазы и амилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскми

Социалистических

Республик

О С И E

ИЗОБРЕТЕНИЯ

<ц763465

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 270778 (21) 2649807/28-13 (51)М. Кл.

С 12 D 13/10 с присоединением заявки Нов

Государственный комитет

СССР оо делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 1509.80 Бюллетень ¹ 34

Дата опубликования описания 15,0980 (53) УДК 577. 15..07(088.8) (72) Авторы изобретения

H.A.Òèóíîâà, И.В.Зайкина, В.Ю.Авиженис, Р.К. Алекнавичюте и А.A.Ãëåìæà

Ордена Ленина институт биохимии имени A.Н.Баха

AH СССР и Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии (71) Заявители (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КОМПЛЕКСА ФЕРМЕНТОВ

Р -ГЛЮКАНАЗЫ И АМИЛАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству ферментных препаратов и используется в про" изводстве ферментов микробного происхождения.

Известен способ выделения $ 1,31,4-глюканаэы иэ культуральной жидкости Baci(!8 us зиЬс1с1з, заключающийся в его осаждении сернокислым аммонием иэ водно-ацетонового раствора, оставшегося после осаждения фермента амилазы ацетоном flj.

Однако при выделении амилазы из культуральной жидкости этого микроорганизма по производственному регламенту (ацетоном) фермент р-глюканаза почти не осаждается и остается в отходе: в водноацетоновом растворе.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности является способ выделения амилазы из культуральной жидкости микроорганизмов путем адсорбции фермента на крахмале (2) .

Недостаток известного способа заключается в том, что крахмал является дорогостоящим пищевым сырьем. Кроме того, данный сорбент не может быть использован для получения р-глюканаэы.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и расширение сырьевой базы.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве адсорбирующего материала применяют сульфитную целлюлозу или пшеничную солому, которые вводят в количестве 8-12 В от объема культуральной жидкости. указаннйе сорбенты содержат в качестве основного компонента целлюлозу и являются отходами про15 иэводства.

Способ осуществляется следующим образом. В культуральную жидкость, содержащую ферменты после выращивания микроорганизма, или к раствору

20 ферментов добавляют иэмельченйЫй целлюлозосодержащий материал, получейную кашицеобраэную массу отжимают, фильтруют или центрифугируют, а затем высушивают на воздухе или роторной сушилке. Полученный препарат является сорбатом ферментов и проявляет свою активность в тех же условиях,как и ферментные препараты, полученные други30 ми способами.

763465

Испытуемые образцы

j5 -глюканаза

Амилаэа ед. (тыс.) ед. (тыс. ) 3, 850

0,623

4,400

0,440

100

6625

100

2580,0

4437„0

6430,0

16,1

38,9

114

67,0

11,4

3,990

103, 6

1328, 9 20

Р -глюканаза, ед. (тыс.) Амилаза

Испытуемые образцы

1101,4

100

j0Q

ll 8

Исходный раствор

Фильтрат

15,5

110,24

991,26.

1,83

11, 00

93

Сорбат

Пример 1. Выделение ферментов путем адсорбцин на соломе.

Пшеничную солому нарезают и измельчают в шаровой мельнице,. затем " полученную муку пропускают через сито (с отверстиями в 0,25 мм ) °

В качестве ферментов используют лиофильно высушенную культуральную жидкость Bacit tus япЫ18 is р полу ченную на Вильнюсском заводе Ферментов и содержащую как амилазу, так и -1,3-1,4-глюканаэу. 1(ля опыта готовят 1%-ный раствор этих ферментов, осадок нерастворившихся примесей отделяют центрифугирова- нием. К 100 мл раствора ферментов добавляют 10 r измельченной соломы.

По истечении 30 мин твердую часть отделяют от раствора путем фильтрования на воронке Бюхнера ° В одном случае полученный сорбат ферментов на порошке иэ соломы снова разводят

Исходный ферментный раствор для опыта Т и Ц

Опыт j. Фильтрат

Сырой сорбат на соломе

Опыт H. Фильтрат

Высушенный сорбат на соломе

Из таблицы следует, что большая часть fb-глюканазы .адсорбируется на соломе и полностью проявляет свою активность при ее определении в сыром и высушенном препарате.

Амилаза при этом адсорбируется в количестве 67 и 20% и также проявляет свою активность при определении ее в полученных препаратах.

Пример 2, Способ выделения ферментов путем адсорбции на сульфитной целлюлозе.

В качестве ферментов используют лиофильно-высушенную культуральную . жидкость Вассой us subti0is, полученную на Вильнюсском заводе ферментов и содержащую амилаэу и р-глюканазу.

100 мл ацетатного буфера рН 5,5

0,1 М, и в полученной суспензии определяют активность ферментов, амилазы и Р -глюканаэы. Во втором случае осадок с воронки Бюхера высушивают на воздухе, и затем осадок эамачивают в 100 мл ацетатного буфера и в суспензии определяют активность ферментов. Активность также определяют в фильтрате после отделения осадка.

Активность J3 -глюканаэы измеряют по образованию редуцирующих сахаров при действии фермента на лихенин, активность амилазы — по

15 снижению иодной окраски раствора крахмала под действием фермента.

Результаты адсорбции ферментов на пшеничной соломе и исследование активности полученных сорбатов

2() приведены в табл.1.

Т а блица 1

Цля опыта готовят 1%-ный раствор этих ферментов. Осадок нераство40, рившихся примесей отделяют центрифугированием.

К 100 мл раствора ферментов добавляют 10 г сульфидной целлюлозы.

45 По истечении 30 мин твердую часть отделяют от раствора путем фильтрования на воронке Бюхнера. Полученный сорбат ферментов на порошке из целлюлозы снова разводят 100 мл

50 ацетатного буфера рН .5,5 0,1 М и в полученной суспензии определяют активность ферментов: амилазы и глюканазы. Результаты представлены в табл. 2.

Т а блица 2

763465

Формула изобретения

Составитель И.Паников

Редактор Ю.Петрушко Техред A.Ùåïàíñêàÿ Корректор М.Демчик

Заказ 6580/12 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Иэ таблицы следует, что ф-1,31,4-глюканаэа и амилаэа адсорбируют иэ раствора на целлюлозе и проявляют

93 и 90% активности при исследовании полученных сорбатов.

Предлагаемый способ по сравнению известным позволяет в 10-15 раэ увеличить выход Д-глюканаэы в сравнении с существующими методами получения ферментных препаратов путем осаждения ацетоном и сернокислым аммонием,позволяет расширить сырьевую базу для получения ферментных препаратов путем применения измельченных отходов сельского и лесного хозяйства, а также бумажной промышленности: соломы, цветочных пленок крупяных культур лузги, древесных опилок, скопа, отхода бумажного производства, хлопкового линта, хлопковых и вискоэных очесов и т.д.,которые в настоящее время н используются и загрязняют среду.

Получение комплексного ферментного препарата амилазы и ф -глюканаэы в виде сорбата на вышеперечисленных материалах исключает необходимость применения NaCC, добавляемого в качестве наполнителя, что также снизит стоимость препарата.

В отличие от способа получения ферментного препарата путем высушивания на распылительной сушилке, получаемый сорбат ферментов на перечисленных материалах является ферментным препаратом, очищенным от пигментов и некоторых других балластных веществ микробного происхождения, содержащихся в исходной культуральной жидкости. Измельченный целлюлоэосодержащий материал добавляется в культуральную жидкость без предварительного запаривания или другой обработки в отличие от способа получения сорбата амилаэы на крахмале, который требует предварительного запаривания в определенном режиме влажности и температуры.

Способ выделения комплекса 5 ферментов -глюканазы и амилазы иэ культуральной жидкости Вас1И us

subti3is, путем использования адсорбирующего материала,.о т л ич а ю шийся тем, что, с целью

Щ повышения выхода целевого продукта и расширения сырьевой базы, в качестве адсорбирующего материала применяют сульфидную целлюлозу или пшеничную солому, которые вводят в количестве 8-12% от объема культуральной жидкости.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. лекнавичюте P.Ê., Авиженис В.Ю.

Глемжа A.A. Получение(5 --глюканазы

Г15Х иэ отходов производства амилосубтилина Г 10Х.- Микробиологическая промышленность, вып. 5, 1977, с. 9-11.

2. Иульман М.С. Сорбция амилолитических ферментов ° ; M., Ïèùåвая промышленность, 1966.