Среда для определения зараженности почвы

Среда для определения зараженности почвы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскик

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву .(22) Заявлено 211278 (21) 2699800/30-15 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 150980.Бюллетень № 34

Дата опубликования описания 150980 (51)М. Кл.

С 12 К 1/06

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 576.8.093 ° 1 (088 8) С.Ф.Сидорова, N.IO.Степанова, Б.Акмурадов и Л,Д.Гришечкина (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (71) Заявитель (54) СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАРАЖЕННОСТИ ПОЧВЫ

FUSARIUM OXYSPORUN SCHL, и FUSARIUM

SOIANI APP,ET ° WR, Ор10-0,15

Ор001-0,002

1,5 — 2,0

1 5-2,0

12-lбмл/л среды

Ос тальное. вода

Изобретение относится к области сельского хоз яйс тв а, в частности к определению запаса инфекции фитопатогенных грибов в почве.

Известны различные средЫ для выделения и подсчета микроскопических грибов в почве (1), Известна также среда для количественного подсчета F.oxysporum, в которую вхопят азотнокислый натрий, фосфорнокислый калий двуэамещенный, хлористый калий, сернокислый магний., сернокислое железо закисное, сахароза, дрожжевой экстракт, фосфорная кислота, стрептомицин, агар, вода.

Эта среда также как упомянутая выше обладает существенным недос татком— зарастает соответствующими почвенными грибами, вследствие чего малопригодна для анализа полевой почвы (2) .

Цель изобретения — расширение ассортимента сред, пригодных для определения зараженности полевой почвы грибами F.oxysporum u F.solani., 25 дифференцирующих эти виды и подавляющих сапрофитную почвенную микрофлору е

Предлагается среда для определения зараженности почвы Fusarium охуз-3p

porum u Fusarium solani которая содержит, вес. Ъ:

Азотнокислый натрий 0,15-0 20

Двузамещенный

4 ос4 орнокислый калий

Хлорисъый калий 0,03-0,05

Сернокислый магний 0,03-0 05

Сернокислое железо закнсное

Галактоза

Arap

Пентахлорнитробензол 0 05-0,1

Стрептомицин 0,03 0,05

Желчь медицинская

Из состава исключен дрожжевой экстракт, способствующий обильному росту посторонних почвенных грибов и. бактерий, исключено также подкисление средЫ фосфорной кислотой. Для лучшей дифференциации видов Fusarium сахарову заменяют в среде на галак763468 тозу и концентрацию ее уменьшают с

3 до 1,5-2 %. В качестве веществ, угнетающих рос т других грибов, ис поль зуют пентахлорнитробензол, который полностью подавляет рост Мысок, Rhizopus, Penicillium, присутствующих в почве в значительном количестве, а также медицинская желчь для ограничения роста колоний грибов, .что облегчает их подсчет на предлагаемой среде.

Технология приготовления среды.

Го тов я т с реду следующего сос тав а:

ИаИО К2НРО4 i КСХ М9304 q FesO4 i галак тсза, агар, автоклавируют 20-30 мин при 1 атм, В охлажденную до

45-47 С среду перед разливкой в чаш- 15 ки Петри добавляют пентахлорнитробензол, стрептомицин и медицинскую желчь. Навеску почвы (в пересчете на

10 г воздушно-сухой почвы) вносят в колбу с 90 мл стерильной воды, тща- 20 тельно взбалтывают и приготовляют последовательные раэ ведения до

1:1000, Затем 1 мл почвенной суспенэии в разведении 1: 1000 высевают глубинным способом на рекомендуемую среду (по 20 чашек Петри на каждый почвенный образец). Засеянные чашки инкубируют 7-10 сут. при 25-27 С на рассеянном свету, что способствует лучшей пигментации гриба. Затем подсчитывают количество колоний грибов каждого вида и пересчитывают их на

1 r воздушно.-сухой почвы: Колонии

Fusariun oxysporum(на данной среде пушисто-пленчатые, имеют характер- ную телесно-розовую окраску; F . so lani образуют пышный ватообразный мицелий беловато-кремового цвета, Пример 1.Определение количества инфекций Г.oxysporum H F.solani в почве проводят с помощью среды сле- 40 дующего состава, вес, Ъ:

NaNO . — 0,15

К2НРб4 0i10

KCX 0,03

Геяо4, 0,001 45

XgSOq 0 03

Галактоз а .

Агар 1, 5

Вода Ос тальное, Среду стерилиэуют 20 мин при

1 атм, после охлаждения до 45 в нее добавляют пентахлорнитробенэол 0 05%, стрептомицин,0,03%, желчь медицйнскую 12 мп/л среды. Затем в 20 чашек

Петри производят глубинный посев 1 мл почвенной суспензии в разведении

1:1000 и заливают средой. После 7 сут инкубации при 25 С на среде в чашках

Петри хорошо различимы колонии F.oxysporum H F.solani, Подсчитывают количество колоний каждого вида в 20 чаш- Щ ках и пересчитывают на 1 г воэдушносухой почвы, Для этого определяют среднее количество колоний каждого вида в одной чашке и умножают на разведение (1000), Пример 2.Для определения зараженности полевой почвы видами

F.oxysporum и F,.sîlàni используют среду следующего состава, вес,Ъ:

NaNO 0 17.

К4НРО4 0 12

КСЗ О., 04

МдЯО4 7Н20 О р 04

FeSO4 0,001

Галактоэа 1,7

Агар 1,7

Вода Остальное.

После 25 мин стерилизации среды о при 1 атм ее охлаждают до 47 С и добавляют пентахлорнитробенэол 0,07%, стрептомицин 0,04% и желчь медицинскую 14 мп/л среды. Затем производят посев почвенной суспензии по описанной выше методике. После 8 сут. инкубации засеянных чашек íà рассеянном свету при 27 С проводят подб" счет колоний каждого вида. гриба и пересчитывают их количество на 1 r воздушно-сухой почвы, Пример 3,Количественное определение запаса почвенной инфекции

F.oxysporum и F,solani проводят на среде следующего состава, вес, %:

NaNO 0,20

К оHРО4 0,15

КСZ 0,05

MgSO4 7HZO О, 001

Пен тахлор- нитробензол О, 1

Стрептомицин 0,05

Желчь медицинская 16 мл/л

FesO4 0,002

Галак тоза 2, О

Агар 2,0 вода Ос таль ное, Среду стерилиэуют при 1 атм

30 мин и после охлаждения ее до 47 С вводят пентахлорнитробенэол, стрептомиции и медицинскую желчь в укаэанных концентрациях, Посев проводят по описанной ранее методике; пос о ле 10 сут.инкубации чашек при 27 C на рассеянном свету подсчитывают колонии F.охуэporum и F.solani u пересчитывают на 1 г воздушно-сухой почвы.

Анализ почвенного образца, проведенный на описанных трех вариантах предлагаемой среды, дает идентичные результаты.

Формула из обре тени я

Среда для определения зараженности почвы Fusarium oxysporum Schl. H Fu

sarium solaniApp.et.Иг.,включающая азотнокислый натрий, двузамещенный, фосфорнокислый калий, сернокислый магний, хлористый калий, сернокислое железо закисное, стрептомицин, агар и воду, о т л и ч а ю щ а яя тем, что, с целью подавления са76 3468

0,001-0,002

Сос тав итель М. Мирз аев

Редактор Т.Девятко Техред И.Асталощ

Корректор С.Шекмар

Заказ 6234/25 Тираж 522 Подписное

8HHHIIH Государственного комитета СССР по.делам изобретений и открытии

113035,Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, г.Мкгород, ул.Проектная, 4 профитной почвенной микрофлоры и дифференциации видов Fusar ium, она дополнительно содержит пентахлорнитробензол, медицинскую желчь и галактозу, причем компоненты содержатся в среде в следующем соотношении,вес.%:

Азотнокислый натрий .0,15-0,20

Двузамещей-, ный фосфорнокислый калий 0,10-0,15

Хлористый калий 0,03-0,05

Сернокислый магний 0,03-0,05

Закисное сернокислое железо

Галактоза 1,5-2, О

Агар 1,5-2,0

Пентахлорнитробензол 0,05-0.,1

Стрептомицин 0,03-0 05 желчь медицинская 12-16 среды

Вода Остальное.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Руководство по изучению поч- . венных микроорганизмов и их метаболитов. Под редакцией Н.А. Красильникова Изд-во МГУ, 1966, с. 11-20, 2. Buxton Е. Rendrick. A mettod

15.

of isolatieg Phytium spp, and Fusar um oxysporum from Soil Ann.A l

Biol 1963,v.51. р,221-215 (прототип), и. рр