Штамм тест-культура для микробиологического определения лизина

Штамм тест-культура для микробиологического определения лизина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заяьлено 200478 (21) 2б18783/28-13 (Sf)M. Кл. с присоединением заявки Мо (23) Приоритет

С 12 К 1/02

С 12 D 13/06

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 230980. Бюллетень М935 (5З) УДК 668. 392 (088. 8) Дата опубликования описания 25.0980

I (72) Авторы изобретения

Д.Ф. Петров, Т.А. Носикова и Л.Л. Губанова

Биологический институт Сибирского отделения AH СССР (71) Заявитель (54) ШТАММ Евсее г1сЬ1а со С! Iig4 F 3977-TECT-КУЛЬТУРА ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИЗИНА

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма Escherichia coli

П 4F"3977, резистентного к формальдегиду, используемого в качестве тест-культуры для микробиологического количественного определения

L-лизина в культуральных средах при ферментации бактериальных культур продуцентов лизина.

Ауксотрофные формы микроорганизмов широко используются для качественного и количественного определения аминокислот, в том числе лизина.

Лизинозависимые мутанты должны обладать быстрым ростом на синтетической среде с добавлением лизина и высокой чувствительностью к нему.

Известен штамм Е. сос1 П Pys полученный в результате воздействия рентгеновских лучей на прототрофную культуру Е. cori, резистентный к формальдегиду, который можно испольэовать как индикаторную форму для определения лизина.

Штамм Е. со т,I П 4 0ув требует для роста в синтетической среде добавления только лизина, высоко чувствителен к лизину: рост штамма наблюдается уже при концентрации лизина в сре2 де 0,1 мкг/мл. Интенсивность мутности в жидкой среде пропорционально возрастает с увеличением концентрации лизина в пределах кривой от 0,1 до

5 20 мкг/мл.

Однако при использовании такого штамма в качестве индикаторной формы все операции по определению лизина необходимо проводить в стерильных ycf0 ловиях, что делает метод трудоемким.

Целью изобретения является получение Е. со 11 П 4, отвечающего всем требованиям тест-культуры, мутации устойчивости к формальдегиду, что эна15 чительно упростило бы количественное определение лизина.

Формалиноустойчивый штамм Escherichià сосi П 4 F 3977 был получен при и помощи химического мутагенеза при

2О воздействии на штамм Е. со 1 П 4 т .ув нитрозометилмочевиной (0,1% в экспозиции 120 мин)и серии пересевав в питательной среде с постепенным повышением концентрации формалина. Исходная

25 устойчивость к формалину Е.сое

П24 тув составляет 30 мг/t. Была первойачально получена устойчивость к

50 мг/Ъ формалина и в дальнейшем при ступенчатой селекции было получено не3Q сколько форм устойчивых штаммов, сре765357

1,5(для плотных сред) 20. со1 i F 3977

25

Е. со Р! П 4

45

75

Формула изобретения ди которых был выбран штамм, обозначенный Escherichia colt П 4Г 3977, который имеет устойчивость к концентрации формалина в питательной среде

200 Mr/В.

Полученный штамм имеет регистрационные номера в коллекции 17947-17951

Е. со 8i П 4F""3977 и следующие морфологическую и физиологическую .характеристики.

Клетки в молодых культурах палочковидные, одиночные или соединены в цепочки, размер 1-3 ° 0,5 мкм. Культура грамотрицательна.

Культуральные и физиологические свойства. На питательных средах колонии белые или грязно-белые. На МПА на вторые сутки культивирования при температуре 35-37 С полученный штамм образует колонии диаметром 1-2 мм, округлые, с ровными краями, слегка выпуклым профилем, гладкой, блестящей поверхностью, однородной структуры.

На жидких средах образуется однородная муть.

Желатину не разжижает. Нитраты восстанавливает до нитритов. Сбраживает глюкозу, лактозу, мальтозу, галактозу, фруктоэу, маннит с выделением кислоты и газа.

Сахарозу не сбраживает.

Факультативный азроб.

Оптимальной температурой является температура 32-37 С, минимальной—

8-10оС, максимальной — 42-45 С.

Внесение формальдегида (25

30 мкг/мл) в синтетическую среду упрощает микробиологическое определение лизина, позволяя исключить процесс автоклавирования и некоторые операции проводить нестерильно, что увеличивает производительность труда в три раза.

Штамм Еsaher i сЬ i а со Рi П<4 F 3977— тест-культура для микробиологического определения лизина. Хранится в коллекции Биологического института СО

AH .СССР.

Оптимальная реакция среды — рн

7,0-7,2.

Определение L-лизина осуществляют как в жидких средах пробирочйым мето5 дом в ряду стандартных растворов

L-лизина в пределах кривой от 0,25 до 10 мкг/мл, так и в плотных средах чашечным методом в ряду стандартных растворов L-лизина от 5 до 100 мкг/мл по зонам роста штамма, при этом состав жидких и твердых синтетических сред следующий (рН 7),%:

Не НР 0 1,2 40%-ный цитрат аммония 7 мл

KGB 0,8 Глюкоза 1,2

К 504 0,2

HgS04 Следы Агар-агар

Внесение формалина в питательную среду в количестве 100 мг.В обеспечивает стерильность в течение длительного времени, что значительно упрощает процедуру определения, позволяя избегать строгих стерильных условий работы при засеве питательных сред тест-культурой. Время, затраченное на определение лизина в 10 пробах (пробирочный метод) с использованием в качестве индикаторных форм

Е. со01 П 4. и данного штамма показано в таблйце.

50 Морфологические признаки. Клетки в молодых культурэх палочковидные, одиночные или соединены в цепочки.

Размер 1-.3 ° 0,5 мкм. Культура грамотрицательна.

Физиологические признаки. На питательных средах колонии белые или грязно-белые.

Мясо-пептонный агар. Колонии округлые с ровными краями, слегка выпуклым профилем, гладкой, блестящей поверхностью, однородной структуры. Диаметр колоний двухсуточной культуры 1-2 мм.

Мясо-питательный бульон. Образуется однородная муть.

765357

Составитель М. Ларина

Техред С. Гаврилешко

Корректор Ю. Макаренко т

Редактор A. Бер

Заказ 6500/41 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, X-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Желатину не разжижает.

Нитраты восстанавливает до нитритов.

Отношение к углеводам. Сбраживает глюкозу,лактозу, мальтозу, галактозу, маннит, фруктозу с выделением кислоты и газа.

Сахарозу не сбраживает.

Факультативный аэроб. Оптимальная температура — 32-37 С, минимальная—

8-10 С, максимальная — 42-45 С.

Оптимальная реакция среды — рН

7 0-7,2.

Устойчив к формальдегиду.