Способ диагностики менингококкового менингита

Способ диагностики менингококкового менингита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

Опислние изоБретения

<л766587

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 250778 (21) 2656517/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 30,09,80. Бюллетень ¹ 36

Дата опубликования описания 3009,80 (51)М. Кл.з

A 61 В 10/00

Госуларственный комитет

СССР ио лелам изобретений и открытий (53) УДК 616. 0 79 . 3 (088 ° 8) Э. М. Симованьян, В, И. Шепотиновский, А. Г. Шовкун и 3. И, Микашинович

{72) Авторы изобретения

Ростовский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МЕНИНГОКОККОВОГО

МЕНИНГИТА

Изобретение относится к области медицины,и может быть использовано в клинической практике для улучшения диагностики менингитов.

Известен способ диагностики менин- 5 гококкового менингита путем биохимического анализа биологического материала $1) .

Одн а ко и э ве ст ный с по со б я вл яет ся трудоемким и травматичным.

Цель изобретения — снижение трав-матичности и упрощение способа.

Эта цель достигается.тем, что в лейкоцитах периферической крови определяют активность фосфогексоизомера- 15 эы и концентрацию пировиноградной кислоты, и при уменьшении активности фермента на 40-50% и увеличении концентрации пировиноградной кислоты на

200-300% относительно норни ставят,. 20 диагноз менингококкового менингита.

Способ осуществляют следующим образом.

Больному путем клинического обследования при выявлении менингеапьного синдрома (ригидность нишц затылка, положительные симптомы Кернига, Брудзинского, частая рвота, резкая голов.ная боль, гипертермия) ставят диагнозменингита. Затем с целью определения ЗО происхождения менингита проводят биохимический анализ крови, исследуя активность фосфогексоиэомеразы и уровень пировиноградной кислоты.

Для этого в центрифужную пробирку с каплей гепарина добавляют 2 мл веноэной крови больного. Кровь с гепарином центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 мин для получения плазни, содержащей лейкоциты. Плазму отбирают пастеровской пипеткой, помещают в центрифужную пробирку и для удаления примеси эритроцитов смешивают с

3 мп 0,008%-ного раствора хлористого аммония, оставляют на 5 мин, затем центрифугируют 3 мин при 1000 об/мин.

Надосадочную жидкость, содержащую гемолизированные эритроциты, отбрасывают.

Осадок лейкоцитов несколько раз промывают (2 мл) холодным физиологическим раствором, после каждого пронивания центрифугируют при 1000 об/мин в течение 90 с. Полученный осадок лейкоцитов отбирают микропипеткой для сравнения активности фосфогексоизомеразы в объеме 0,05 мл ° Рекомендуется для проверки чистоты полученной фракции лейкоцитов небольшой объем лейко766587 цитов микроскопировать в камере Горяева.

Отобранные 0,05 мп лейкоцитов помещают в инкубационную среду, содержащую буферно-субстратную смесь (6,3 мл .веронал ацетатного буфера, рН 7,4, 38 мг глюкоз о-6-фосфат а), инкубируют в термостате 30 мин при 370С. Параллельно отбирают еще 0,05 мп лейкоцитов и помещают в контрольную пробу, имеющую тот же состав, но не инкубиРуют и сразу осаждают белки добавлением 1-2 мп 10Ъ-ного раствора трихлоруксусной кислоты для прекращения ферментативной реакции. Об активности фермента судят по приросту образующегося в результате реакции фруктово- 15

-б-фосфата в сравнении с контрольной пробой. Пробы колориметрируют на

ФЭК-М, результаты рассчитывают по калибровочной кривой.

Активность фосфогексоиэомеразы 20 донорских лейкоцитов принимают эа

100Ъ, Содержание пировиноградной кислоты в лейкоцит ах о предел яю т следующим образом.

О, 1 мл лейкоцитов помещают в пробирку, содержащую О, 7 мп дистиллированной воды и 1 мл 10Ъ-ного раствора три хлоруксусной кислоты для осаждения белков. После центрифугирования 1 мл надосадочной жидкости инкубируют в термостате при 370С в течение 20 мин с 0,4 мл 2,4-динитрофенилгидразин а. Для получения окр аши вани я пропорционального содержанию пировиноградной кислоты, добавляют 1 мп M

12Ъ-ного раствора едкого натра. 3атем. колориметрируют на ФЭК, а количество пировиноградной кислоты рассчитывают по калибровочной кривой.

Результаты выражают в молях на 10 40 лейкоцитов.

Понижени е акти вности фосфогексоиэомеразы и повышение количества пировиноградной кислоты является признаком менингита менингококковой этиологии °

П р и м е.р 1.Больная Л. поступила в отделение на 2-й день болезни с подозрением на менингит..Иачалоэаболевания было острое, температура

39 С имелись частые рвоты, положительные менингеальные симптомы. На основании перечисленных клинических признаков был поставлен диагноз менингита. С целью выявления происхождения менингита проведено биохимичес- 55 кое исследованйе лейкоцитов перифери-. ческой крови. В результате установлено, что активность фосфогексоизомеразы оказалась ниже на 50Ъ, уровень пировиноградной кислоты повысился на 300Ъ, В сопоставлении с клиническими признаками это позволило . поставить окончательный диагноз менингококкового менингита, Ребенку было назначено антибактериальное и патогенетическое лечение. В связи с тем, что у больной определялись признаки повышенного внутричерепного давления, с лечебной целью была проведена люм- бальная пункция. Ликворологические данные (нейтрофильный плеоцитоэ

11520/3, 85Ъ нейтофилов), результаты бактериологического исследования ликвора подтвердили правильность диагноза.

Под влиянием проводимого лечения наступило клиническое выздоровление.

Повторное обследование активности фосфогексоизомеразы (0,0017 нМоль/10 и уровня пировиноградной кислоты (0,0054 нМоль/10 ) на 18-й день болезни показали нормальные значения этих показателей в период выписки из стационара, Способ испытан на 55-ти клинических больных.

Способ диагностики проводили путем исследования в лейкоцитах веноз— ной крови больных менингококковым менингитом в 1-2 сутки гиспиталиэации. Сравнение результатов исследования проводились в группах здоровых детей и больных менингококковым менингитом. Кровь практически здоровых лиц была взята у 25-ти детей. В двух группах больных менингококковым менингитом и практически здоровых детей в лейкоцитах крови, полученных обычным способом, определяли активность фосфогексоизомераэы и уровень пировиноградной кислоты.

Результаты определения активности фосфогексоизомеразы и уровня пировиноградной кислоты в лейкоцитах у больных менингококковым менингитом и у доноров представлены в таблице.

Как видно из полученных данных, у больных менингококковым менингитом регистрировалось снижение активности фосфогексоизомеразы на 40-50Ъ, увеличение уровня пировиноградной кислоты на 200-300Ъ, что при сопоставлении с клиническими данными дает основание подтвердить клинический диагноз менингококковой инфекции.

Отсутствие изменений активности фосфогексоизомеразы и пировиноградной кислоты при наличии клинических признаков менингита свидетельствует о вирусном менингите.

Предлагаемый способ позволяет установить диагноз менингококкового менингита в ранние сроки заболевания, не связан с проведением люмбальной пункции, имеет высокую степень достоверности, доступен для выполнения в условиях стационара и участкового обслуживания на догоспитальном этапе.

766587

Менингококковый менингит

Вирусный менингит

Норма

Показ атель

Фосфогексоиз омераза: нМоль/10 лейкоцитов и = 55 и 20

1,3-1,4

100-154 п =25

1,3-1,4

0,65-0,78

50-60

100

Снижение активности, Ъ от нормы

40-50

Пировиноградн ая кислота: н Моль/10 и = 20

0,05-0,06 п = 55

0,18-0,24 и = 25

0,05-0,06

120-100

300-400

100

Повышение концентрации, % от нормы

200-300 20-0

Примечание: и — количество детей в каждой группе. Конт рольную группу составляли практически здоровые дети - 25 человек.

Формула изобретения

Составитель Л, Соловьев

Редактор Н. Спиридонова Техред О. Легеза

Корректор М. Коста

Подписное

Заказ 7036/2 Тираж 673

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д, 4/5

Филиал ППП Патент, r, ужгород, ул. Проектная, 4

Способ диагностики менингококково. го менингита путем биохимического анализа биологического материала о т- 35 лич ающий ся тем, что,сцелью снижения травматичности и упрощения способа, в лейкоцитах периферической крови определяют активность фосфогексоиэомеразы и концентрацию пировиноградной кислоты, и при уменьшении активности фермента на 40-50% и увеличении концентрации пировиноградной кислоты на 200-300% относи- тельно нормы ставят диагноз меннн1 гококкового менингита.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Менингококковая инфекция. М., 1976, с, 163,