Способ выращивания продуцентов литических ферментов

Способ выращивания продуцентов литических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(11) 767196

С©юз Советских

Социалистических

Рес убя.

К АВТОРСКОМУ СВИ ИТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. сеид-ву (22) Заявлено 241178 (21) 2689091/28" 13 (51)М. Кл.

С 12 D 13/10 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Государствеииый комитет

СССР ио делам изобретеиий и открытий (53) УДК 5 7 7. 15. 0 7 (088. 8) Опубликовано 3рр9.80,Бюллетень ¹ 36

Дата опубликования описания 30.09.80 (72) Авторы изобретения

Б.A.Ìàðãàðÿí, О.В.Кислухина и Т.А.Кузнецова

Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ПРОДУЦЕН1ОВ ЯИ1 ИЧЕСКИХ

ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологичес- . кой проьыаленности и может быть использовано при получении препаратов литических ферментов путем 5 глубинного культивирования микроорганизмов, в частности бактерий рода Вас1сйив.

Известны способы получения литических ферментов путем глубин- 1О ного культивирования микроорганйз- мов на различных питательных средах, содержащих источники органических соединений углерода и азота в суммарной концентрации до 10в и ми- 15 неральные соли. Культивирование проводится одностадийно или в две стадии соответственно без корректировки или с корректировкой состава питательной среды в ходе фер- 3) ментации (13.

Наиболее близким по своей технической сущности к заявленному является способ, согласно которому 25 продуцентов литических ферментов выращивают глубинным методом на питательных средах, содержащих ассимилируеьне источники органических соединений, углерода и азота s суммарной концентрации не ниже 2% и минеральные соли, причем за 2-6 ч до окончания ферментации объем . культуральной жидкости увеличивают в 1 5-2,5 раза эа счет введения компонентов питательной среды, не содержащих органических источников углерода и азота. В качестве таких компонентов используют водопроводную воду или водные растворы всех или части — мийеральных компонентов основной питательной среды в концентрациях, не превышающих их концентрации в основной питательной среде (23.

Недостатком известного способа является то, что увеличение культуральной жидкости эа счет компонентов, не содержащих органических источников питания, приводит к сокращению продолжительности продуктивного состояния и автолизу клеток микроорганизмов вследствие снижения осмотического давления среды. Результатом этого является недостаточно высокая активность литических ферментов, продуцируемых микроорганизмами.

Целью изобретения является; пре,дотвращение автолиза клеток проду45

Формула изобретения

767196

= цента и повышение активности целево го= продукта:

Поставленная цель достигается тем, что одновременно с разбавлением культуры в питательную среду вводят ингибитор автолиза, представляющий собой экстракт ферментолиза биомассы бактерий, в концентрации, 0,02-0, 10% по отношению к конечному объему культуральной жидкости.

Ингибиторы автолйза получают из биомассы продуцента или других бактерий известным способом. " Для выделения регуляторов может использоваться биомасса любой бактерии при условии, что выделенные регуляторы обладают отрицательным знаком действия на интенсивность as- толиза продуцента литических ферментов, то есть снижают интенсивйость

" автолиза.

Предлагаемый способ может быть использован при получении литических ферментов путем глубинногб культивирования микроорганизмов, наприме бактерий В, subtilis и В. mesente—

ricus, на различных питательных средах, содержащих в начальный момент культивирования ассимилируемые источники углерода и азота в суммарной концентрации 2-5% °

Введение в культуральную жидкость растворов ингибиторов автолиэа приводит к стабилизации бактериальных клеток, увеличению их жизнеспособности и продолжительности про дуктивного состояния в условиях обедненной питательной. среды, следствием чего является повышение ак тивности литических ферментов в куль туральной жидкости.

20 р

Зо

Пример 1. Глубинную культуру B.subti0is 402 выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 40 мл среды следующего состава, г/л: ферментативный гидролизат дрожжей БВК 12) лактоэа 10; (Мн,) НГО4 4 > КС 0 0, 6; CaC e 0, 1

М) 804 7Н Э 0,1 при рН 7,0. После стерилизации и засева среды колбы . инкубируют в течение 14 ч на качалке при температуре 37 . Затем в 4 контрольные колбы вносят дополнительно по 40 мл стерильной водопро" водной воды, а в 4 опытные колбыпо 40 мл стерильного водного раствора (вода водопроводная),содержащего

80 "мг ингйбитора автолиэа, выделенного из биомассы B.subtifis 402 (конечная концентрация ингибитора

s культуральной жидкости — 0,1%) .

Контрольные и опытные колбы вновь ставят на качалку прй той we òåìпературе", ийкубируют 4 ч, а затем определяют литическую активность по методу Кислухиной.

Средняя литическая активность в контрблЬных колбах составила

13500 ед/мл, в опытных колбах—.*.У

20800 ед/мл, или 154% по отношениюк контролю.

Пример 2. Глубинную культуру В.subtifis 402 в течение первых 14 ч вйращивают так же, как в примере 1. Затем в 4 контрольные колбы вносят по 40 мл стерильного водного раствора солей, содержащего, г/л: МдЯ04 7Н О 0,1) СаС0 0,1.

В 4 опытные колбы вносят по 40 мл такого же солевого раствора, содержащего дополнительно по 60 мг ингибитора автолиза, выделенного иэ культуры Baci88 us megaterium 400 (конечная концентрация ингибитора в культуральной жидкости — 0,075%) .

Контрольные и опытные колбы инкубируют на качалке 4 ч при температуре

37 С, после чего. определяют литичес Ь кую активность.

Средняя литическая активность в

Контрольных колбах составила

12000 ед/мл, в опытных колбах—

18000 ед/мл или 150% по отношению к контцолю.

Пример 3. Глубинную культуру В.зиЬМ01s R 2 выращивают в колбах объемом 750 мл на 50 мл среды следующего состава, в г/л: гидролизат бактериальной биомассы 10; мальтоза 10;(NHI,) НРО 4;КС8 0,6;

ИдЯО 7НгО 0,1; СаС8г 0,1 при рН 7,2.

После стерилйэации и засева колбы инкубируют в течение 12 ч на качалке при температуре 37 С. Затем в контрольные колбы вносят по 50 мл стерильной водопроводной воды, а в опытные — по 50 мл стерильного водного раствора, содержащего по 30 мг ингибитора автолиза, выделенного иэ

Я эерТососсцз 0 ас1Ы (конечная концентрация ингибитора в культуральной жидкости 0,03%) . Контрольные и опытные колбы йнкубируют на. качалке

5 ч, затем определяют литическую активность.

Средняя литическая активность в контрольных колбах составила

5330 ед/мл, в опытных — 7200 ед/мл. или 135% по отношению к контролю.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить активность литических ферментов в культуральной жидкости на

35-54%.

Способ выращивания продуцентов литических ферментов путем культивирования микроорганизмов рода

Вас1И us на питательной среде, содержащей источники органических соединений, углерода и азота в суммарной концентрации 2-5% с раэбавлением культуры в процессе культивирования в 1,5-2,5 раза эа 2-6 ч до .окончания ферментов пу-.ем введения

767196

Составитель Н.Паников

Редактор Г.Прусова Техред Ж.Кастелевич Корректор М.Вигула

Заказ 7135/23 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. ужгород, ул. Проектная, 4 растворов, не содержащих ассимилир1 емые источники углерода и азота, о т л и ч а ю щ н и с я тем, что, с целью предотвращения автолиза клеток продуцента и повышения активности целевого продукта, одновременно с разбавлением культуры в питательную среду вводят ингибитор автолиза, представляющий собой экстракт ферментолизата биомассы тех же или других бактерий, в концентрации

0,02-0,10В по отношению к конечному объему культуральной жидкости.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР по заявке 9 2595302/28-13, кл. С 12 D 13/10, 1978 °

2. Авторское свидетельство СССР по заявке У 2648462/28-13,,кл. С 12 D 13/10, 1978 (прототип) .